曼氏无针乌贼雌激素受体基因的克

发布时间：2021-05-19 03:45

　　曼氏无针乌贼（Sepiella japonica）是我国沿海海域最重要的海洋头足类物种,现人工养殖已经取得突破。但养殖过程中普遍出现的性早熟现象严重影响其养殖效果,因此揭示养殖条件下的乌贼生殖发育调控机制是解决这一问题的关键。雌激素受体（estrogen receptor,ER）是典型的性类固醇核受体,在许多海洋动物的性成熟和生殖发育中扮演着重要角色。鉴于ER可能也参与乌贼的生殖发育调控,本文首次开展了曼氏无针乌贼雌激素受体sjER基因克隆和序列特征分析、亚细胞定位和受体类型鉴定、可能作用位点及组织分布特征、在生殖周期中变动规律及在生殖发育中的调控功能等方面的研究。主要取得的研究结果如下:采用Illumina Hiseq 2000高通量测序技术构建了曼氏无针乌贼未成熟和成熟卵巢转录表达谱数据库,经去冗余处理和拼接处理后,共计获得70,039条Unigenes,均长800 bp,40.7%（28,492）Unigene获得注释信息,其中近38.5%（10,969）Unigene获得GO分类注释。筛选获得了一批性腺发育相关基因序列,未成熟卵巢转录组中有793条高丰富表达（FPKM≥100）... 

【文章来源】：浙江海洋大学浙江省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 雌激素及其受体研究综述
    1.1 雌激素在动物生殖发育中的调控作用
    1.2 雌激素受体ER介导雌激素生殖调控功能的信号传递途径
    1.3 雌激素及其受体在海洋无脊椎动物中的研究进展
        1.3.1 雌激素在海洋无脊椎动物中的研究进展
        1.3.2 雌激素受体在海洋无脊椎动物中的研究进展
第二章 基于转录组的曼氏无针乌贼生殖发育相关功能基因数据挖掘及雌激素受体ER基因解析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 总RNA提取
        2.1.3 转录组文库构建和测序
        2.1.4 数据分析和挖掘
    2.2 结果与分析
        2.2.1 转录组测序结果统计
        2.2.2 unigene表达差异分析
        2.2.3 雌激素受体ER基因的数据挖掘和解析
    2.3 讨论
第三章 曼氏无针乌贼雌激素受体ER基因全序列的克隆和特征分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 总RNA提取
        3.1.3 获取sjER cDNA基因全长
    3.2 结果与分析
        3.2.1 RNA提取结果
        3.2.2 sjER cDNA基因扩增结果
        3.2.3 sjER cDNA基因全长序列的分析
        3.2.4 ER氨基酸同源序列分析
        3.2.5 ER系统发育分析
    3.3 讨论
第四章 曼氏无针乌贼雌激素受体的亚细胞定位和受体类型鉴定
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 sjER-EGFP载体的构建
        4.1.3 HEK293细胞培养、冻存和复苏
        4.1.4 细胞转染
        4.1.5 荧光染料核染和膜染
    4.2 结果与分析
        4.2.1 sjER-EGFP表达载体的构建
        4.2.2 sjER在细胞中的定位
    4.3 讨论
第五章 雌激素受体ER在曼氏无针乌贼生殖轴中的分布及在性发育周期中的变动规律研究
    5.1 材料与方法
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 卵巢组织学观测
        5.1.3 不同组织总RNA提取
        5.1.4 cDNA模板合成
        5.1.5 实时荧光定量PCR
        5.1.6 性类固醇激素雌二醇E2浓度测定
    5.2 结果与分析
        5.2.1 sjER在曼氏无针乌贼生殖轴中的分布
        5.2.2 sjER及雌激素E2在曼氏无针乌贼生殖周期中的协同变动规律
    5.3 讨论
        5.3.1 sjER在曼氏无针乌贼生殖轴中的分布
        5.3.2 sjER在曼氏无针乌贼生殖周期中的变动规律及其与雌激素的关系
第六章 曼氏无针乌贼雌激素受体ER介导的细胞信号转导功能初探
    6.1 材料与方法
        6.1.1 实验仪器
        6.1.2 实验试剂
        6.1.3 实验耗材
        6.1.4 ERE-pGL3载体的构建
        6.1.5 Flag-sjER
        6.1.6 HEK293细胞培养、冻存和复苏
        6.1.7 细胞转染
        6.1.8 ERE-pGL3含量检测
        6.1.9 Ca~(2+)流检测
        6.1.10 cAMP含量检测
    6.2 结果与分析
        6.2.1 曼氏无针乌贼雌激素受体激活ERE靶基因的作用特性分析
        6.2.2 Ca~(2+)检测
        6.2.3 cAMP检测
    6.3 讨论
        6.3.1 曼氏无针乌贼雌激素受体激活ERE靶基因的作用特性分析
        6.3.2 雌激素受体介导的cAMP信号途径及Ca~(2+)流的检测
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文及研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]拟目乌贼卵子发生与卵巢发育[J]. 罗江,蒋霞敏,柳敏海,唐锋,彭瑞冰.  水生生物学报. 2014(06)
[2]日本无针乌贼全人工养殖条件下生活史研究[J]. 郑小东,林祥志,王昭凯,于瑞海,田传远,李琪.  海洋湖沼通报. 2010(03)
[3]不同发育期克氏原螯虾卵巢和肝胰腺中孕酮和雌二醇含量变化[J]. 张成锋,闵宽洪,张汉华,朱健,周鑫.  上海海洋大学学报. 2009(01)
[4]雌激素受体α亚细胞定位及其与细胞生长的相关性[J]. 杨超毅,张晓燕,吴乔.  厦门大学学报(自然科学版). 2007(04)
[5]舟山渔场针乌贼（Sepia andreana）的生物学特性及其渔场分布变迁[J]. 吴常文,赵淑江,徐蝶娜.  海洋与湖沼. 2006(03)
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[9]鲤鱼血清中促性腺激素、17β雌二醇含量的周年变化[J]. 黄世蕉,姜仁良,赵维信,周洪琪.  水产学报. 1987(01)
[10]曼氏无针乌贼的人工孵化及其在资源增殖中作用的估计[J]. 李星颉,戴健寿.  海洋渔业. 1982(01)

硕士论文
[1]温度和光照对曼氏无针乌贼繁殖性能的影响[D]. 平洪领.浙江海洋学院 2015
[2]环境雌激素17β-E2对栉孔扇贝内分泌干扰的作用机制[D]. 刘颖.大连海洋大学 2014



本文编号：3195049