两种海水养殖鱼类减毒活疫苗联合免疫评价及口服疫苗开发

发布时间：2021-05-20 02:17

　　杀鱼爱德华氏菌和鳗弧菌是海水养殖鱼类常见的两种病原菌,可感染多种经济鱼种罹患爱德华氏菌病和弧菌病。本课题选取实验室前期开发的杀鱼爱德华氏菌减毒活疫苗WED和鳗弧菌减毒活疫苗MVAV6203,将两种疫苗联合注射接种大菱鲆,通过考察接种效果分析联合免疫过程中两种疫苗的协同或抑制作用,并进一步探究免疫协同或抑制的作用机制。结果发现,两种疫苗联合接种较单独接种可显著提高大菱鲆对鳗弧菌的免疫保护效果,血清特异性抗体显著增加,与抗原识别和递呈相关的基因如TLR2、TLR5、TLR21、MHC Ⅰ和MHC Ⅱ等在转录水平表达量增加,证实两种疫苗联合免疫具有免疫协同效果。另外,本课题制备了水型和油型鳗弧菌灭活疫苗,分析了两种类型疫苗作为口服疫苗接种大菱鲆的免疫潜力。结果发现,以海藻酸钠浓度为3%（w/v）、疫苗浓度为2.5 OD600、乳化剂司盘-80添加量为0.2%、水油比为1:9、转速为2000 r/min时制备效果最佳,但使用该疫苗口服接种大菱鲆未获得良好免疫保护效果;选择食品级鱼油,以菌体浓度为5 OD600、油水比例为1:9、转速为4000 r/min、乳化剂加入量为3%（w/v）时制备效果... 

【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1.1 水产养殖病害
        1.1.1 鳗弧菌
        1.1.2 杀鱼爱德华氏菌
    1.2 鱼用疫苗
        1.2.1 灭活疫苗
        1.2.2 减毒活疫苗
        1.2.3 多价疫苗和联合疫苗
    1.3 宿主对抗原的识别与递呈
        1.3.1 病原相关分子模式和模式识别受体
        1.3.2 TLR的信号转导
        1.3.3 抗原处理和提呈
    1.4 疫苗接种形式
        1.4.1 注射免疫
        1.4.2 浸泡免疫
        1.4.3 口服免疫
    1.5 鱼类口服疫苗
        1.5.1 微藻载体
        1.5.2 海藻酸钠微球
        1.5.3 卤虫载体
        1.5.4 纳米颗粒
        1.5.5 口服免疫诱导的免疫应答
    1.6 研究目的和意义
第2章 减毒活疫苗MVAV6203和WED联合免疫评价
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 实验试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 实验动物大菱鲆的健康检查和驯养
        2.3.2 鳗弧菌MVM425和杀鱼爱德华氏菌EIB202在大菱鲆上的预攻毒实验
        2.3.3 大菱鲆的饲养、免疫、攻毒以及取样
        2.3.4 相关免疫因子应答分析
        2.3.5 血清样品分析
    2.4 实验结果与讨论
        2.4.1 攻毒剂量的确定
        2.4.2 联合注射免疫在大菱鲆上的免疫保护评价
        2.4.3 联合注射免疫大菱鲆血清样品分析
        2.4.4 实验讨论
    2.5 本章小结
第3章 海藻酸钠微球疫苗口服免疫大菱鲆
    3.1 引言
    3.2 实验材料
    3.3 实验方法
        3.3.1 鳗弧菌MVM425在大菱鲆上腹腔预攻毒实验
        3.3.2 MVM425灭活菌液制备
        3.3.3 微球的制备及工艺优化
        3.3.4 微球疫苗含量测定
        3.3.5 微球免疫效果分析
    3.4 实验结果与讨论
        3.4.1 MVM425在大菱鲆上腹腔攻毒剂量确定
        3.4.2 微球制备及工艺优化
        3.4.3 微球疫苗含量测定
        3.4.4 微球免疫效果分析
        3.4.5 实验讨论
    3.5 本章小结
第4章 鳗弧菌乳化口服疫苗
    4.1 引言
    4.2 实验材料与方法
        4.2.1 鳗弧菌的摇瓶培养
        4.2.2 鳗弧菌的反应器培养
        4.2.3 乳化疫苗制备工艺的优化
        4.2.4 乳化疫苗鱼食制备
        4.2.5 乳化疫苗渔场免疫评价
    4.4 实验结果与讨论
        4.4.1 鳗弧菌的摇瓶培养
        4.4.2 鳗弧菌的反应器培养
        4.4.3 乳化疫苗制备工艺的优化
        4.4.4 乳化疫苗鱼食制备
        4.4.5 乳化疫苗渔场免疫评价
        4.4.6 实验讨论
    4.5 本章小结
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
论文发表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄鱼三种病原弧菌外膜蛋白交叉保护性抗原筛选[J]. 张崇文,毛芝娟,于涟.  生物工程学报. 2012(12)
[2]养殖大菱鲆出血性败血症病原菌致病性的研究及鉴定[J]. 王斌,孙岑,范薇,刘双凤,刘永波,孙彦珂.  大连水产学院学报. 2006(02)
[3]鱼用疫苗研制过程中面临的问题与课题[J]. 陈超然,陈昌福,毛芝娟.  河南水产. 2002(01)
[4]鳗弧菌口服微胶囊疫苗的制备及其对鲈鱼的免疫效果[J]. 余俊红,沈继红,王祥红,王宝坤,纪伟尚,胡应劭,徐怀恕.  中国水产科学. 2001(02)

硕士论文
[1]渔用弧菌疫苗注射佐剂的筛选和口服微粒的研制[D]. 李中权.广东海洋大学 2010



本文编号：3196886