MMD2和VLRA基因在仿刺参先天免疫过程中的作用

发布时间：2021-05-20 06:20

　　在中国海参是非常重要的经济物种,随着海参养殖业的迅速发展,规模的不断扩大,海参的病害防治就显得尤为重要。因此,我们对仿刺参的两个免疫相关基因的表达模式以及在仿刺参先天免疫过程中的作用进行研究。在本研究中我们首次克隆了单核巨噬细胞分化因子MMD2和可变淋巴细胞受体VLRA这两个与仿刺参先天免疫有关的基因。MMD2基因cDNA序列全长1243bp,有一个长777bp的开放阅读框ORF,编码258个氨基酸,并且包含HlyIII结构域和7个跨膜结构域,是一个七次跨膜蛋白。VLRA基因cDNA全长3072bp,包括1995bp的ORF,编码664个氨基酸,有一条信号肽,一个跨膜结构,具有典型的VLR的结构,包括LRRCT、多个LRR模块及LRRNT结构。通过实时荧光定量PCR分析,MMD2和VLRA在仿刺参的体壁、纵肌、肠和呼吸树四个组织中都有表达,在仿刺参受到四种常见的海洋细菌刺激之后,MMD2和VLRA的基因在仿刺参四个部位组织中的表达量明显上升,并随着细菌浓度的增加,MMD2和VLRA的表达量也随之升高,这说明了MMD2和VLRA这两个基因都参与了仿刺参的先天免疫反应。原位杂交实验结果表明... 

【文章来源】：辽宁师范大学辽宁省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 仿刺参简介
        1.1.1 仿刺参的分类地位
        1.1.2 仿刺参的形态特征及经济价值
        1.1.3 仿刺参的先天免疫
        1.1.4 仿刺参主要的免疫分子和防御机制
    1.2 无脊椎动物的免疫系统
        1.2.1 先天免疫
        1.2.2 模式识别
    1.3 MMD2基因结构功能及相关介绍
        1.3.1 MMD基因结构和功能
        1.3.2 单核巨噬细胞分化过程
    1.4 VLR的结构及功能特征
        1.4.1 可变淋巴细胞受体
        1.4.2 VLR的蛋白结构
        1.4.3 VLR的基因结构
        1.4.4 VLR的抗原结合
    1.5 本研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 仿刺参样品
    2.2 主要药品试剂
        2.2.2 实验仪器
        2.2.3 质粒与菌株
        2.2.4 实验配制溶液
    2.3 方法
        2.3.1 RNA的提取
        2.3.2 cDNA模板的制备
        2.3.3 引物的设计
        2.3.4 基因克隆
        2.3.5 切胶回收
        2.3.6 转菌测序
        2.3.7 提取质粒
        2.3.8 生物信息学分析
        2.3.9 实时荧光定量PCR
        2.3.10 原位杂交
        2.3.11 原核表达
        2.3.12 蛋白纯化
        2.3.13 包涵体复性
        2.3.14 蛋白浓度测定
        2.3.15 细菌结合实验
3 实验结果
    3.1 基因全长及信息学分析
        3.1.1 Aj-MMD2和Aj-VLRA的基因结构
        3.1.2 Aj-MMD2和Aj-VLRA的序列比对
        3.1.3 进化树分析
    3.2 实时荧光定量PCR
    3.3 原位杂交
    3.4 原核表达
    3.5 细菌结合实验
4 讨论
    4.1 MMD2和VLRA基因结构特征
    4.2 Aj-MMD2和Aj-VLRA基因表达模式
    4.3 Aj-MMD2和Aj-VLRA在仿刺参体内的分布
    4.4 Aj-VLRA重组蛋白的结合能力
结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]光照强度对不同养殖方式下刺参幼参生长和消化酶活性的影响[J]. 魏子仲,赵文.  应用生态学报. 2014(01)



本文编号：3197255