噬菌体与对虾急性肝胰腺坏死病（AHPND）相关性研究

发布时间：2021-05-20 21:10

　　随着水产养殖业的迅猛发展,水产养殖类动物疾病不断出现,造成了该产业巨大的经济损失。对虾急性肝胰腺坏死病（AHPND）是近年来出现的,一个困扰对虾养殖业的重要疾病,一直到目前为止,我们还没有完全明确急性肝胰腺坏死病的致病机制。该病在2013年由美国亚利桑那大学的Tran等人,首次确认并分离到了引起AHPND的病原,至此,引起AHPND的病原已经被研究者们确认。本实验室自AHPND发现以来,就开始了对该病的探究,本文主要是针对AHPND相关副溶血弧菌噬菌体展开的相关探究工作。本实验室从养殖场取的患病凡纳滨对虾样品中,分离并鉴定出了5株副溶血弧菌,并通过使用Flegel和Lo公布的AHPND相关质粒检测引物,进行PCR检测,明确了这5株副溶血弧菌应均为AHPND病原菌。丝裂霉素C可用于诱导溶源噬菌体的分离。本文通过使用不同浓度丝裂霉素C对5株AHPND致病性副溶血弧菌进行敏感性测试,经过比较确认0.5μg/ml为适宜的使用浓度。通过浓度为0.5μg/ml的丝裂霉素C进行诱导,从5株AHPND相关副溶血弧菌中筛选出有2株副溶血弧菌（编号分别为20130629002S01和20130726001... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文献综述
    1.副溶血弧菌
    2 对虾常见疾病
        2.1 白斑综合征
        2.2 黄头病
        2.3 桃拉病
        2.4 肌肉白浊病
        2.5 急性肝胰腺坏死病
    3. 噬菌体
    4. 卤虫
        4.1 卤虫的应用
        4.2 卤虫的养殖概况
    5.实时荧光定量PCR
        5.1 实时荧光定量PCR优势
        5.2 荧光定量PCR方法
            5.2.1 相对荧光定量PCR
            5.2.2 绝对荧光定量PCR
    6 蛋白诱导
    7.基因转化方法
        7.1 转化
        7.2 共转化
        7.3 脂质体导入法
        7.4 粒子轰击细胞法
        7.5 直接显微注射
        7.6 电转化法
    8. 感受态细胞
第二章溶源副溶血弧菌的筛选
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 培养基
            1.1.2 仪器和试剂
            1.1.3 实验菌株
        1.2 实验方法
            1.2.1 实验菌株的培养和细菌基因组DNA的提取
            1.2.2 AHPND相关副溶血弧菌质粒的PCR检测
            1.2.3 丝裂霉素C有效浓度的确定
            1.2.4 噬菌体溶源性感染菌株的筛选
    2. 结果
        2.1 五株副溶血弧菌的AHPND相关质粒的PCR检测
        2.2 溶源性噬菌体释放的丝裂霉素C最佳浓度的确定
        2.3 溶源性副溶血弧菌的筛选
    3.讨论
第三章 溶源噬菌体的分离与电镜观察
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
            1.2.1 副溶血弧菌溶源噬菌体的分离
            1.2.2 噬菌体电镜观察
            1.2.3 两株副溶血弧菌抗生素敏感性测试
            1.2.4 两株副溶血弧菌的碳源利用情况
            1.2.5 人工感染实验
    2.实验结果
        2.1 溶源噬菌体的电镜观察
        2.2 两株溶源性副溶血弧菌的抗生素敏感性
        2.3 碳源利用情况数据分析
        2.4 人工感染实验结果
    3.讨论
第四章 副溶血弧菌对卤虫无节幼体的感染实验
    1.材料和方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
            1.2.1 菌液的制备
            1.2.2 卤虫卵的孵化
            1.2.3 卤虫无节幼体的感染实验
            1.2.4 数据分析与处理
    2 实验结果
        2.1 卤虫无节幼体感染实验结果
        2.2 副溶血弧菌对卤虫无节幼体的致病力
    3.讨论
第五章 副溶血弧菌溶源噬菌体宿主范围检测
    1.材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验试剂与器材
            1.1.2 实验菌株
        1.2 实验方法
            1.2.1 菌株的活化
            1.2.2 溶源噬菌体的提取
            1.2.3 噬菌体vp1 宿主范围的测定
            1.2.4 噬菌体vp2 宿主范围的测定
    2.实验结果
        2.1 噬菌体vp1 宿主范围
        2.2 噬菌体vp2 宿主范围
    3.讨论
第六章VPP19 质粒的转化
    1.材料和方法
        1.1 实验材料
        1.2 实验方法
            1.2.1 pBAD-VPP19 质粒的提取
            1.2.2 提取质粒质量的验证
            1.2.3 SM10 和TSA-VII-2 两株菌感受态细胞的制备
            1.2.4 电击转化
            1.2.5 筛选阳性克隆
            1.2.6 阳性单克隆的诱导
            1.2.7 阳性克隆表达产物的SDS-PAGE
    2.实验结果
        2.1 质粒质量检测结果
        2.2 质粒pBAD-VPP19 的电转化
        2.3 阳性转化菌株的蛋白诱导表达
    3.讨论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[3]对虾6种病毒多重PCR检测方法的建立[J]. 刘飞,张宝存,张晓华,黄倢.  渔业科学进展. 2014(01)
[4]溶杆菌SNNU513基因gfp标记及在玉米根部定殖[J]. 武坤毅,王斐斐,崔浪军,章华伟,白成科.  中国生物防治学报. 2014(01)
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[7]对虾早期死亡综合症的处理方案[J]. 李晨.  当代水产. 2013(05)
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[9]一株副溶血弧菌噬菌体VPp1的分离鉴定及裂解性能[J]. 彭勇,丁云娟,林洪,王静雪.  海洋科学. 2013(01)
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硕士论文
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[2]生物絮团用芽孢杆菌的检测、标记及其活菌高通量计数方法的建立[D]. 董萍萍.中国海洋大学 2013
[3]副溶血弧菌噬菌体的分离鉴定、裂解性能及其在副溶血弧菌快速检测中的初步应用[D]. 彭勇.中国海洋大学 2013
[4]副溶血弧菌噬菌体qdvp001的分离鉴定及其在牡蛎净化中的初步应用[D]. 丁云娟.中国海洋大学 2012
[5]三种食源性致病菌多重PCR快速检测方法的研究[D]. 王如景.河北农业大学 2012
[6]中国卤虫革兰氏阴性菌结合蛋白在早期胚胎发育中的表达及抗菌机制的研究[D]. 郑路平.辽宁师范大学 2010
[7]卤虫生物活性筛选模型的建立及其在竹提取物中的应用[D]. 姚翠翠.安徽农业大学 2009
[8]卤虫无节幼体急性毒性实验方法的标准化研究[D]. 陈婕.天津科技大学 2009



本文编号：3198435