翘嘴鳜Leptin-b基因结构、进化及表达分析

发布时间：2021-05-20 23:59

　　从本实验室的翘嘴鳜（siniperca chuatsi）转录组数据库中搜索得到Leptin-b基因部分cDNA序列,首先通过NCBI数据库比对初步确定序列的准确性,然后通过PCR、测序获得最终准确的Leptin-b部分核心cDNA序列。根据该序列,分别设计5’和3’RACE引物进行RACE扩增,得到Leptin-b基因5’和3’末端序列,拼接得到Leptin-b的cDNA序列。应用Genome Walker方法获得Leptin-b5’侧翼区序列,然后克隆得到Leptin-b基因内含子序列,拼接得到嘴鳜翘Leptin-b基因组DNA序列。Leptin-b基因的cDNA序列全长为698bp,包括471bp的开放读码框,编码157aa的蛋白质,5’-untranslated region（UTR）长度为130bp,3’-UTR长度为94bp；推导的aa序列含有20个aa残基的信号肽,两个半胱氨酸残基以便用于二硫键的形成。Leptin-b基因5’侧翼区长度为418bp,上游30bp处发现典型的TATA box,此外还存在其他调控元件：CREB（155bp）、AP2（209bp）、AP1（242... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1 前言
    1.1 研究概述
        1.1.1 Leptin的发现
        1.1.2 Leptin的研究进程
        1.1.3 Leptin基因的结构
            1.1.3.1 小鼠Leptin基因的结构
            1.1.3.2 人Leptin基因的结构
            1.1.3.3 日本青鳉Leptin基因的结构
            1.1.3.4 红鳍东方鲀Leptin基因的结构
            1.1.3.5 非洲爪蟾Leptin基因的结构
        1.1.4 Leptin的表达组织
        1.1.5 Leptin蛋白的作用途径
        1.1.6 Leptin的生物学功能
            1.1.6.1 Leptin与生殖
            1.1.6.2 Leptin与摄食和禁食
            1.1.6.3 Leptin与脂肪代谢
            1.1.6.4 Leptin与应激
    1.2 本文的研究背景及内容
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验鱼
        2.1.2 实验药品
    2.2 方法
        2.2.1 技术路线
        2.2.2 引物设计
        2.2.3 总RNA提取及检测
        2.2.4 核心片段克隆
            2.2.4.1 反转录
            2.2.4.2 核心片段PCR反应及检测
            2.2.4.3 PCR产物纯化、回收、连接及测序
        2.2.5 3’末端克隆
        2.2.6 5’末端克隆
        2.2.7 5’侧翼序列克隆
        2.2.8 内含子克隆
        2.2.9 序列拼接及进化树构建
        2.2.10 蛋白三级结构预测
        2.2.11 基因组织表达特异性分析
            2.2.11.1 cDNA样品的制备
            2.2.11.2 实时定量PCR
3 实验结果与分析
    3.1 RNA质量分析
    3.2 Leptin-b基因cDNA核心片段克隆
    3.3 Leptin-b基因3’末端克隆
    3.4 Leptin-b基因5’末端克隆
    3.5 翘嘴鳜Leptin-b基因cDNA全序列分析
    3.6 Leptin-b基因5’侧翼区及内含子序列克隆与分析
    3.7 Leptin-b氨基酸多重比对及进化树分析
    3.8 Leptin-b蛋白质三级结构预测
    3.9 翘嘴鳜、草鱼Leptins及其受体(Lepr)组织表达结果
4 讨论
    4.1 鱼类Leptin-a和Leptin-b同源性
    4.2 翘嘴鳜同其他脊椎动物Leptin基因结构、功能及系统进化的关系
    4.3 翘嘴鳜、草鱼Leptins基因及其受体组织表达
5 小结
参考文献
硕士期间发表的论文
致谢



本文编号：3198668