展示鲤疱疹病毒Ⅱ型膜蛋白的重组杆状病毒的构建及其对异育银鲫免疫保护效果的研究
发布时间：2021-05-21 12:32
鲤疱疹病毒II型（CyHV-2）是疱疹病毒造血器官坏死病的病原体,主要感染金鱼、鲫鱼及其变种。它是一种高致病性的病毒,当水温在15℃30℃时可造成近100%的死亡率。自2009年以来,在我国江苏北部的鲫鱼养殖区春秋季节连年发生大量的异育银鲫患出血病死亡,给我国水产养殖业带来了巨大的经济损失。目前关于CyHV-2的致病机制尚未完全清楚,疫苗接种仍然是防控CyHV-2最重要的手段。已报道的针对CyHV-2的灭活疫苗和亚单位疫苗都可以起到一定的保护效果,但是这两种疫苗都需要人工注射接种免疫,不仅耗费人力物力,而且在实际操作中也面临很多困难。因此,迫切需要研究出一种操作方便、保护效果突出的疫苗来防控CyHV-2感染。在本研究中,使用杆状病毒表面展示系统表达了九个截短的CyHV-2膜蛋白（ORF25,ORF25C,ORF25D,ORF30,ORF124,ORF131,ORF136,ORF142A,ORF146）和GFP报告蛋白。通过Western blot分析,结果显示GFP和9种膜蛋白成功地展示在重组病毒表面。为了检测重组杆状病毒能否进入异育银鲫细胞,同时重组杆状病毒携带...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词对照表
第一章 文献综述
1.1 鲤疱疹病毒Ⅱ型概述
1.1.1 鲤疱疹病毒Ⅱ型简介
1.1.2 鲤疱疹病毒Ⅱ型基因组结构及编码蛋白
1.1.3 鲤疱疹病毒Ⅱ型的体外繁殖
1.1.4 鲤疱疹病毒Ⅱ型国内外流行现状
1.1.5 鲤疱疹病毒Ⅱ型宿主及临床症状
1.2 鲤疱疹病毒Ⅱ型检测方法
1.2.1 电子显微镜诊断技术
1.2.2 分子生物学检测
1.2.3 抗体检测
1.3 鲤疱疹病毒Ⅱ型刺激宿主的免疫反应
1.4 鲤疱疹病毒Ⅱ型疫苗研究
1.4.1 灭活疫苗
1.4.2 亚单位疫苗
1.5 杆状病毒表面展示系统
1.5.1 杆状病毒简介
1.5.2 杆状病毒作为基因表达载体
1.5.3 杆状病毒表面展示系统
1.6 本研究的目的、意义及主要内容
第二章 展示鲤疱疹病毒Ⅱ型膜蛋白的重组杆状病毒的构建
2.1 材料
2.1.1 病毒、质粒、菌株与细胞系
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要溶液及配方
2.2 实验方法
2.2.1 pQBD-X系列重组质粒的构建
2.2.2 rAcMNPV-X系列重组杆状病毒的构建
2.2.3 Western blot检测重组蛋白
2.3 结果与分析
2.3.1 携带目标基因的重组质粒的构建
2.3.2 展示CyHV-2膜蛋白和GFP的重组杆状病毒构建
2.3.3 Western blot检测CyHV-2膜蛋白的表达
第三章 重组杆状病毒免疫效果的评价
3.1 材料与试剂
3.1.1 异育银鲫、细胞和病毒
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要溶液及配方
3.1.4 主要仪器与设备
3.2 方法
3.2.1 重组杆状病毒rAcMNPV-GFP转导GiCK细胞
3.2.2 异育银鲫的免疫
3.2.3 免疫后宿主基因C3和IL-11表达水平检测
3.2.4 免疫后异育银鲫血清中Ig M水平检测
3.2.5 免疫后异育银鲫攻毒试验
3.2.6 统计学分析
3.3 结果和分析
3.3.1 重组杆状病毒rAcMNPV-GFP转导GiCK细胞
3.3.2 免疫后宿主基因C3和IL-11表达水平分析
3.3.3 免疫后异育银鲫血清中Ig M水平分析
3.3.4 重组杆状病毒疫苗保护率分析
第四章 鲫鱼和虹鳟IGM重链恒定区的融合表达及抗血清的制备
4.1 材料
4.1.1 菌株、质粒和实验用兔
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要溶液及配方
4.1.4 主要仪器与设备
4.2 方法
4.2.1 虹鳟和鲫鱼Ig M重链恒定区融合蛋白(JY-HZ-IgM)的表达
4.2.2 融合蛋白JY-HZ-IgM表达条件的优化
4.2.3 融合蛋白JY-HZ-IgM的纯化
4.2.4 抗血清的制备及特异性检测
4.2.5 抗血清效价检测
4.3 结果和分析
4.3.1 虹鳟、鲫鱼Ig M重链恒定区融合蛋白(JY-HZ-IgM)的表达
4.3.2 融合蛋白JY-HZ-IgM表达条件的优化
4.3.3 融合蛋白JY-HZ-IgM的纯化
4.3.4 抗血清的制备及特异性检测
4.3.5 融合蛋白JY-HZ-IgM抗血清效价的测定
第五章 讨论
参考文献
附录
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF4基因的克隆、表达与免疫学检测方法[J]. 周勇,范玉顶,徐进,马杰,江南,刘文枝,曾令兵. 淡水渔业. 2017(01)
[2]2型鲤疱疹病毒双重PCR快速检测方法的建立及应用[J]. 罗丹,梁利国,谢骏,吴旭东. 中国预防兽医学报. 2014(05)
[3]Baculovirus as a highly efficient expression vector in insect and mammalian cells[J]. Yu-chen HU~1 Department of Chemical Engineering,National Tsing Hua University,Hsinchu,Taiwan,China. Acta Pharmacologica Sinica. 2005(04)
本文编号：3199712
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词对照表
第一章 文献综述
1.1 鲤疱疹病毒Ⅱ型概述
1.1.1 鲤疱疹病毒Ⅱ型简介
1.1.2 鲤疱疹病毒Ⅱ型基因组结构及编码蛋白
1.1.3 鲤疱疹病毒Ⅱ型的体外繁殖
1.1.4 鲤疱疹病毒Ⅱ型国内外流行现状
1.1.5 鲤疱疹病毒Ⅱ型宿主及临床症状
1.2 鲤疱疹病毒Ⅱ型检测方法
1.2.1 电子显微镜诊断技术
1.2.2 分子生物学检测
1.2.3 抗体检测
1.3 鲤疱疹病毒Ⅱ型刺激宿主的免疫反应
1.4 鲤疱疹病毒Ⅱ型疫苗研究
1.4.1 灭活疫苗
1.4.2 亚单位疫苗
1.5 杆状病毒表面展示系统
1.5.1 杆状病毒简介
1.5.2 杆状病毒作为基因表达载体
1.5.3 杆状病毒表面展示系统
1.6 本研究的目的、意义及主要内容
第二章 展示鲤疱疹病毒Ⅱ型膜蛋白的重组杆状病毒的构建
2.1 材料
2.1.1 病毒、质粒、菌株与细胞系
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要溶液及配方
2.2 实验方法
2.2.1 pQBD-X系列重组质粒的构建
2.2.2 rAcMNPV-X系列重组杆状病毒的构建
2.2.3 Western blot检测重组蛋白
2.3 结果与分析
2.3.1 携带目标基因的重组质粒的构建
2.3.2 展示CyHV-2膜蛋白和GFP的重组杆状病毒构建
2.3.3 Western blot检测CyHV-2膜蛋白的表达
第三章 重组杆状病毒免疫效果的评价
3.1 材料与试剂
3.1.1 异育银鲫、细胞和病毒
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要溶液及配方
3.1.4 主要仪器与设备
3.2 方法
3.2.1 重组杆状病毒rAcMNPV-GFP转导GiCK细胞
3.2.2 异育银鲫的免疫
3.2.3 免疫后宿主基因C3和IL-11表达水平检测
3.2.4 免疫后异育银鲫血清中Ig M水平检测
3.2.5 免疫后异育银鲫攻毒试验
3.2.6 统计学分析
3.3 结果和分析
3.3.1 重组杆状病毒rAcMNPV-GFP转导GiCK细胞
3.3.2 免疫后宿主基因C3和IL-11表达水平分析
3.3.3 免疫后异育银鲫血清中Ig M水平分析
3.3.4 重组杆状病毒疫苗保护率分析
第四章 鲫鱼和虹鳟IGM重链恒定区的融合表达及抗血清的制备
4.1 材料
4.1.1 菌株、质粒和实验用兔
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要溶液及配方
4.1.4 主要仪器与设备
4.2 方法
4.2.1 虹鳟和鲫鱼Ig M重链恒定区融合蛋白(JY-HZ-IgM)的表达
4.2.2 融合蛋白JY-HZ-IgM表达条件的优化
4.2.3 融合蛋白JY-HZ-IgM的纯化
4.2.4 抗血清的制备及特异性检测
4.2.5 抗血清效价检测
4.3 结果和分析
4.3.1 虹鳟、鲫鱼Ig M重链恒定区融合蛋白(JY-HZ-IgM)的表达
4.3.2 融合蛋白JY-HZ-IgM表达条件的优化
4.3.3 融合蛋白JY-HZ-IgM的纯化
4.3.4 抗血清的制备及特异性检测
4.3.5 融合蛋白JY-HZ-IgM抗血清效价的测定
第五章 讨论
参考文献
附录
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF4基因的克隆、表达与免疫学检测方法[J]. 周勇,范玉顶,徐进,马杰,江南,刘文枝,曾令兵. 淡水渔业. 2017(01)
[2]2型鲤疱疹病毒双重PCR快速检测方法的建立及应用[J]. 罗丹,梁利国,谢骏,吴旭东. 中国预防兽医学报. 2014(05)
[3]Baculovirus as a highly efficient expression vector in insect and mammalian cells[J]. Yu-chen HU~1 Department of Chemical Engineering,National Tsing Hua University,Hsinchu,Taiwan,China. Acta Pharmacologica Sinica. 2005(04)
本文编号：3199712
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