栉孔扇贝（Chlamys farreri）性腺发育相关基因的筛选及Cf-phb2在精巢中的表达分析

发布时间：2021-05-27 13:06

　　性腺发育是发育生物学研究的重要领域之一，这是一个多基因参与调控的过程。PHB（Prohibitin）被认为参与多种生物过程，包括抑制某些转录因子的转录活性、对细胞周期的负调控作用以及抑制肿瘤和细胞凋亡等。本研究采用半定量RT-PCR技术对栉孔扇贝（Chlamys farreri）增殖期精、卵巢差异表达谱中的10个两性差异表达序列标签进行了验证；RACE技术获得phb2全长cDNA序列，采用半定量RT-PCR、real-time PCR和原位杂交技术分析了该基因在栉孔扇贝中的空间表达以及各发育阶段精巢中的表达特征。主要结果如下：半定量RT-PCR检测，确定栉孔扇贝10个两性差异表达序列标签中3个为卵巢高表达，4个为精巢高表达，一致率为40%。以其中一个精巢高表达标签（>F0BWI0G01A0M8X）序列为基础，RACE技术获得一个全长为2122bp的cDNA序列，该序列含有开放阅读框882bp，编码293个氨基酸；经过序列比对及同源性分析初步判定其为栉孔扇贝phb2基因，定名为Cf-phb2。栉孔扇贝phb2的半定量RT-PCR检测结果显示，其在各器官中均有表达，以精巢中表达量最高... 

【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 性腺发育相关基因的研究进展
        1.1 脊椎动物性腺发育相关基因
        1.2 无脊椎动物性腺发育相关基因
    2 PHB 家族基因的研究进展
        2.1 PHB 家族基因的序列特征
        2.2 PHB 家族成员的功能
    3 本研究的目的和意义
第二章 栉孔扇贝性腺发育相关基因的筛选
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 工具酶、试剂盒及仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 总 RNA 的提取
            1.2.2 雌雄性腺 cDNA 模板的合成
            1.2.3 半定量 RT-PCR
                1.2.3.1 设计 RT-PCR 引物
                1.2.3.2 雌雄性腺模板量的调平
                1.2.3.3 RT-PCR 分析各基因在雌雄性腺中表达的差异
    2 结果与分析
        2.1 总 RNA 的质量
        2.2 栉孔扇贝增殖期精卵巢差异表达序列的检验
    3 讨论
第三章 栉孔扇贝 phb2 基因 cDNA 全长的克隆及表达
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 工具酶、试剂盒及仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 性腺组织学切片的制备和性腺分期
            1.2.2 总 RNA 提取和 cDNA 模板的合成
            1.2.3 目的基因的 RACE 扩增
                1.2.3.1 引物设计
                1.2.3.2 RACE-Ready cDNA 的合成
                1.2.3.3 RACE 扩增及序列的生物信息学分析
                    1.2.3.3.1 5’-RACE 扩增
                    1.2.3.3.2 3’-RACE 扩增
            1.2.4 目的基因的全长 cDNA 获得生物信息学分析
            1.2.5 半定量 RT-PCR
            1.2.6 相对定量 qRT-PCR 分析
            1.2.7 原位杂交
                1.2.7.1 探针的的制备
                1.2.7.2 组织原位杂交
    2 结果与分析
        2.1 目的基因全长 cDNA 的克隆及其序列的生物信息学分析
        2.2 栉孔扇贝 phb2 基因的时空表达特征
    3 讨论
        3.1 Cf-phb2 基因序列结构及同源性分析
        3.2 Cf-phb2 基因的时空表达规律及其在精子发生中的作用
        3.3 Cf-phb2 基因潜在的抑制细胞增殖的作用
总结
参考文献
个人简历
待发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]Foxl2基因在栉孔扇贝发育过程中的表达图式[J]. 刘晓玲,刘建国,王丹,张子炎,张志峰.  中国水产科学. 2013(01)
[2]单环刺螠生殖腺的发生及雌体的生殖周期[J]. 李昀,王航宁,邵明瑜,张志峰.  中国海洋大学学报(自然科学版). 2012(06)
[3]栉孔扇贝Cf-dmrt4-like基因的克隆、序列特征及表达分析[J]. 冯政夫,邵明瑜,孙大鹏,张志峰.  中国水产科学. 2010(05)
[4]Research Progress in the Structure and Functions of Prohibitin[J]. Jia-xian OU, Si-fei HUANG, Hong CHEN Department of Anatomy & Histo-Embryology, Shanghai Medical School, Fudan University, Shanghai 200032, China.  Journal of Reproduction and Contraception. 2010(02)
[5]Cloning,characterization,and expression analysis of the DEAD-box family genes,Fc-vasa and Fc-PL10a,in Chinese shrimp （Fenneropenaeus chinensis）[J]. 周倩如,邵明瑜,秦贞奎,康庆浩,张志峰.  Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2010(01)
[6]马氏珠母贝Dmrt5基因的克隆及时序表达模式分析[J]. 于非非,桂建芳,周莉,王梅芳,余祥勇.  水生生物学报. 2009(05)
[7]Sox基因家族功能的研究进展[J]. 江玲霞,李纪委,贺彧,李美丽,方威,李贵强,徐银学.  生物技术通报. 2008(06)
[8]Prohibitin研究现状与人类疾病[J]. 史雨,黄文彦,徐虹.  国际儿科学杂志. 2008 (05)
[9]哺乳动物性别决定机理与SRY基因调控性腺分化的研究进展[J]. 杨宇,马恒东.  上海畜牧兽医通讯. 2007(03)
[10]稀有鮈鲫Dmrt基因家族13个成员的克隆与序列分析[J]. 张小艳,孙立伟,查金苗,王子健.  生态毒理学报. 2007(01)

博士论文
[1]性别发育基因P450c17、DMY和Dmrt1的克隆、表达及选择性剪接研究[D]. 余红仕.武汉大学 2003

硕士论文
[1]栉孔扇贝（Chlamys farreri）性别分化相关基因的筛选以及两个相关基因的表达分析[D]. 秦贞奎.中国海洋大学 2011
[2]栉江珧繁殖生物学及人工苗种繁育技术研究[D]. 张红云.集美大学 2010



本文编号：3207624