罗非鱼湖病毒病分子流行病学调查、检测技术的建立及亚单位疫苗的研制
发布时间：2021-07-03 15:24
病害是罗非鱼养殖中的问题,病原主要是无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）,但是近年来国内外新爆发的罗非鱼湖病毒病也造成了大规模罗非鱼死亡事件,导致巨大的经济损失,严重制约着罗非鱼水产养殖业的发展。本研究中主要在我国罗非鱼主要养殖区地区,进行了罗非鱼湖病毒病分子流行病学调查研究,建立了罗非鱼湖病毒检测技术,并对分离鉴定的罗非鱼湖病毒基因组结构进行了分析。此外。我们研制了罗湖病毒病亚单位疫苗,并对其免疫效果进行了初步评价。主要研究结果如下:1.罗非鱼湖病毒病分子流行病学调查2018年10月和2019年10月,对罗非鱼养殖地区——雷州、化州、吴川、高州和廉江5个地区进行了罗非鱼湖病毒感染情况调查,共采集了罗非鱼样本150个。结果发现,雷州48个样本中阳性率为62.5%;化州21个样本中检测结果均为阴性;吴川21个样阳性率为19%;高州15个样本阳性率为13.3%;廉江45个样本中阳性率为24.4%。结果表明罗非鱼湖病毒在罗非鱼养殖区流行。2.罗湖病毒全基因组测序及序列分析PCR扩增了罗非鱼湖病毒节段1～10并进行了测序,结果发现各片段大小分别为1641 bp、147...
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
核酸电泳检测结果
罗非鱼湖病毒病分子流行病学调查、检测技术的建立及亚单位疫苗研制18基本理化性质https：//web.expasv.org/protparam抗原表位https：//imed.med.ucm.es/Tools/antigenic.pl跨膜区结构https：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/#Opennewwindow茎环结构https：//rfam.xfam.org疏水性https：//web.expasy.org/protscale磷酸化位点https：//www.cbs.dtu.dk/services/NetPhos3.3结果3.3.1病毒致死情况分析结果如表3-6所示，原液组和稀释组攻毒14d内的累积死亡率分别达达91.70%和83.30%，可见该病毒对罗非鱼具有较强的毒力。表3-6罗非鱼感染病毒悬液的试验结果Table3-6Testresultsoftilapiainfectedwithvirussuspension组别重复数量（尾）剂量（mL）不同时间的死亡数（尾）死亡总数（尾）平均死1-4d5d6d7d8d9d10d11-14d亡率/%原液组1120.200123320112120.201122241291.70%3120.2001123310稀释组1120.20012232102120.2002322221183.30%3120.200123210对照组1120.20000000002120.200000000003120.2000000000不同养殖场发病鱼样本回归感染健康罗非鱼，均成功感染，普通PCR检测结果如图3-1。在回归感染的发病鱼各个组织检测结果如图3-2，各组织普通PCR检测，均出现了电泳条带。图3-1不同养殖场发病鱼的PCR检测结果Figure3-1PCRdetectionresultsofdiseasedfishindifferentfarms注：M，Marker；N，阴性对照；P，阳性对照；1-18为回归感染患病鱼样品
发病鱼不同组织的PCR检测结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]畜禽肉中金黄色葡萄球菌活菌可视化LAMP检测方法的研究[J]. 陈琼,董华夏,戴小芳,刘萍,晏涛,郦娟. 食品工业科技. 2020(20)
[2]重症新型布尼亚病毒感染的临床特征和疗效分析[J]. 肖玲燕,史东阳,刘永福,郑以山. 新发传染病电子杂志. 2020(01)
[3]罗非鱼湖病毒病研究进展[J]. 胡虎子,曾伟伟,王英英,王庆,尹纪元,李莹莹,周文礼,高彩霞,渠洋,王雅慧,李波. 病毒学报. 2020(01)
[4]猪圆环病毒3型荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 王阳,胡胜云,石玉佩,申贞彦,孙彤,周双海. 北京农学院学报. 2020(02)
[5]保温大棚池塘罗非鱼循环水高产高效养殖集成技术研究[J]. 文衍红,黄杰,郁蔚文,黄凯,罗福广. 养殖与饲料. 2019(11)
[6]实验动物常见支原体荧光定量PCR检测方法建立[J]. 辛闻婷,杨媛媛,王馨宇,吴东,李灵恩. 实验动物科学. 2019(05)
[7]罗非鱼无乳链球菌病的研究进展[J]. 苏友禄,刘婵,邓益琴,郭志勋,冯娟. 大连海洋大学学报. 2019(05)
[8]罗湖病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 吴凤雷,黄瑜,黄郁葱,蔡双虎,简纪常,汤菊芬. 广东海洋大学学报. 2019(05)
[9]罗非鱼罗湖病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 雷燕,肖洋,赵振峰,唐绍林,黎建斌,陈福艳. 广东海洋大学学报. 2019(03)
[10]MRI在原发性中枢神经系统淋巴瘤与多发性脑胶质瘤鉴别诊断中的临床意义[J]. 杨志成,冷珊珊,段文娟. 临床和实验医学杂志. 2019(05)
博士论文
[1]黄病毒复制缺陷病毒的构建及sfRNA产生机制研究[D]. 张秋艳.中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所) 2019
[2]赤点石斑神经坏死病毒感染GF-1和SSN-1细胞的microRNA组与转录组研究[D]. 陈文捷.华中农业大学 2017
[3]氡致人支气管上皮细胞恶性转化过程中p53介导的能量代谢改变[D]. 刘星.苏州大学 2016
[4]两种二十面体病毒MCMV、CarMV衣壳结构及MCMV复制位点的电镜三维重构研究[D]. 王春艳.浙江大学 2015
[5]H1和H3亚型流感病毒荧光RT-PCR及装甲RNA标准物质的研究和应用[D]. 乔彩霞.中国农业大学 2014
[6]RNA基因干扰技术抑制草鱼呼肠孤病毒复制的研究[D]. 马杰.华中农业大学 2013
[7]环介导等温扩增技术快速检测水产动物病原的研究[D]. 何琳.浙江大学 2012
[8]重组牛干扰素τ抗马传染性贫血病毒效果的研究[D]. 徐青元.中国农业科学院 2011
[9]三种嗜神经病毒的核酸检测方法和初步流行病学研究[D]. 曾志磊.重庆医科大学 2008
[10]上皮向间叶转化（EMT）在胰腺癌侵袭和转移过程中的发生及机制研究[D]. 殷涛.华中科技大学 2007
硕士论文
[1]三种温度条件下吉富罗非鱼对饲料的脂肪需要量及脂肪代谢研究[D]. 周梦馨.上海海洋大学 2018
[2]埃博拉病毒重组蛋白疫苗GP-Fc的构建及免疫原性研究[D]. 杨韧.北京工业大学 2017
[3]A型流感病毒M2蛋白跨膜区抑制自噬体成熟[D]. 谷琳琳.中国农业科学院 2017
[4]猪流行性腹泻病毒SYBR Green Ⅰ和Taq-Man荧光定量PCR检测方法的建立及应用[D]. 张田生.江西农业大学 2015
[5]降解肌酐为肌氨酸基因工程菌的构建[D]. 王滚.南华大学 2015
[6]蛋白质结构预测模型优化方法研究[D]. 张文轩.华中科技大学 2015
[7]锦鲤疱疹病毒诱导的细胞凋亡与抗病毒药物筛选[D]. 李俊超.华中农业大学 2014
[8]利用荧光定量PCR检测PCV2的方法建立及应用[D]. 郭慧娟.天津农学院 2014
[9]无乳链球菌诱导吉富罗非鱼sIgM、mIgD重链基因的克隆及表达分析[D]. 王培.广东海洋大学 2014
[10]土壤中茄链格孢半巢式和实时荧光定量PCR检测方法的建立[D]. 王倩.河北农业大学 2014
本文编号：3262845
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
核酸电泳检测结果
罗非鱼湖病毒病分子流行病学调查、检测技术的建立及亚单位疫苗研制18基本理化性质https：//web.expasv.org/protparam抗原表位https：//imed.med.ucm.es/Tools/antigenic.pl跨膜区结构https：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/#Opennewwindow茎环结构https：//rfam.xfam.org疏水性https：//web.expasy.org/protscale磷酸化位点https：//www.cbs.dtu.dk/services/NetPhos3.3结果3.3.1病毒致死情况分析结果如表3-6所示，原液组和稀释组攻毒14d内的累积死亡率分别达达91.70%和83.30%，可见该病毒对罗非鱼具有较强的毒力。表3-6罗非鱼感染病毒悬液的试验结果Table3-6Testresultsoftilapiainfectedwithvirussuspension组别重复数量（尾）剂量（mL）不同时间的死亡数（尾）死亡总数（尾）平均死1-4d5d6d7d8d9d10d11-14d亡率/%原液组1120.200123320112120.201122241291.70%3120.2001123310稀释组1120.20012232102120.2002322221183.30%3120.200123210对照组1120.20000000002120.200000000003120.2000000000不同养殖场发病鱼样本回归感染健康罗非鱼，均成功感染，普通PCR检测结果如图3-1。在回归感染的发病鱼各个组织检测结果如图3-2，各组织普通PCR检测，均出现了电泳条带。图3-1不同养殖场发病鱼的PCR检测结果Figure3-1PCRdetectionresultsofdiseasedfishindifferentfarms注：M，Marker；N，阴性对照；P，阳性对照；1-18为回归感染患病鱼样品
发病鱼不同组织的PCR检测结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]畜禽肉中金黄色葡萄球菌活菌可视化LAMP检测方法的研究[J]. 陈琼,董华夏,戴小芳,刘萍,晏涛,郦娟. 食品工业科技. 2020(20)
[2]重症新型布尼亚病毒感染的临床特征和疗效分析[J]. 肖玲燕,史东阳,刘永福,郑以山. 新发传染病电子杂志. 2020(01)
[3]罗非鱼湖病毒病研究进展[J]. 胡虎子,曾伟伟,王英英,王庆,尹纪元,李莹莹,周文礼,高彩霞,渠洋,王雅慧,李波. 病毒学报. 2020(01)
[4]猪圆环病毒3型荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 王阳,胡胜云,石玉佩,申贞彦,孙彤,周双海. 北京农学院学报. 2020(02)
[5]保温大棚池塘罗非鱼循环水高产高效养殖集成技术研究[J]. 文衍红,黄杰,郁蔚文,黄凯,罗福广. 养殖与饲料. 2019(11)
[6]实验动物常见支原体荧光定量PCR检测方法建立[J]. 辛闻婷,杨媛媛,王馨宇,吴东,李灵恩. 实验动物科学. 2019(05)
[7]罗非鱼无乳链球菌病的研究进展[J]. 苏友禄,刘婵,邓益琴,郭志勋,冯娟. 大连海洋大学学报. 2019(05)
[8]罗湖病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 吴凤雷,黄瑜,黄郁葱,蔡双虎,简纪常,汤菊芬. 广东海洋大学学报. 2019(05)
[9]罗非鱼罗湖病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 雷燕,肖洋,赵振峰,唐绍林,黎建斌,陈福艳. 广东海洋大学学报. 2019(03)
[10]MRI在原发性中枢神经系统淋巴瘤与多发性脑胶质瘤鉴别诊断中的临床意义[J]. 杨志成,冷珊珊,段文娟. 临床和实验医学杂志. 2019(05)
博士论文
[1]黄病毒复制缺陷病毒的构建及sfRNA产生机制研究[D]. 张秋艳.中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所) 2019
[2]赤点石斑神经坏死病毒感染GF-1和SSN-1细胞的microRNA组与转录组研究[D]. 陈文捷.华中农业大学 2017
[3]氡致人支气管上皮细胞恶性转化过程中p53介导的能量代谢改变[D]. 刘星.苏州大学 2016
[4]两种二十面体病毒MCMV、CarMV衣壳结构及MCMV复制位点的电镜三维重构研究[D]. 王春艳.浙江大学 2015
[5]H1和H3亚型流感病毒荧光RT-PCR及装甲RNA标准物质的研究和应用[D]. 乔彩霞.中国农业大学 2014
[6]RNA基因干扰技术抑制草鱼呼肠孤病毒复制的研究[D]. 马杰.华中农业大学 2013
[7]环介导等温扩增技术快速检测水产动物病原的研究[D]. 何琳.浙江大学 2012
[8]重组牛干扰素τ抗马传染性贫血病毒效果的研究[D]. 徐青元.中国农业科学院 2011
[9]三种嗜神经病毒的核酸检测方法和初步流行病学研究[D]. 曾志磊.重庆医科大学 2008
[10]上皮向间叶转化（EMT）在胰腺癌侵袭和转移过程中的发生及机制研究[D]. 殷涛.华中科技大学 2007
硕士论文
[1]三种温度条件下吉富罗非鱼对饲料的脂肪需要量及脂肪代谢研究[D]. 周梦馨.上海海洋大学 2018
[2]埃博拉病毒重组蛋白疫苗GP-Fc的构建及免疫原性研究[D]. 杨韧.北京工业大学 2017
[3]A型流感病毒M2蛋白跨膜区抑制自噬体成熟[D]. 谷琳琳.中国农业科学院 2017
[4]猪流行性腹泻病毒SYBR Green Ⅰ和Taq-Man荧光定量PCR检测方法的建立及应用[D]. 张田生.江西农业大学 2015
[5]降解肌酐为肌氨酸基因工程菌的构建[D]. 王滚.南华大学 2015
[6]蛋白质结构预测模型优化方法研究[D]. 张文轩.华中科技大学 2015
[7]锦鲤疱疹病毒诱导的细胞凋亡与抗病毒药物筛选[D]. 李俊超.华中农业大学 2014
[8]利用荧光定量PCR检测PCV2的方法建立及应用[D]. 郭慧娟.天津农学院 2014
[9]无乳链球菌诱导吉富罗非鱼sIgM、mIgD重链基因的克隆及表达分析[D]. 王培.广东海洋大学 2014
[10]土壤中茄链格孢半巢式和实时荧光定量PCR检测方法的建立[D]. 王倩.河北农业大学 2014
本文编号：3262845
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