龙头鱼ISSR-PCR反应体系的建立与优化

发布时间：2021-07-17 08:54

　　以Tris平衡酚-氯仿法提取的龙头鱼基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用单因素试验法,对影响PCR扩增体系的d NTPs、模板DNA、引物浓度和Taq DNA聚合酶4种试剂的用量作为独立因素进行优化,创建了最适合龙头鱼的ISSRPCR反应体系。结果表明:20μL的PCR反应液的组分和用量为含Mg2+的10×PCR Buffer 2.0μL,d NTPs2.5μL,Taq DNA聚合酶0.2μL,引物1.0μL,DNA模板1.4μL,双蒸水12.9μL时扩增条带最清晰。这一实验结果为龙头鱼后续开展ISSR遗传多样性分析奠定了基础。 

【文章来源】：科技风. 2020,(32)

【文章页数】：3 页

【部分图文】：

DNA模板浓度对ISSR-PCR的影响

d NTPs是进行PCR反应的重要原材料之一，d NTPs的浓度变化对PCR的扩增有着密不可分的关系。d NTPs浓度过高，会导致聚合酶错误掺入，产生非特异性扩增产物，过低则会造成扩增产物量少[19]。本实验设置的8个d NTPs浓度均能扩增出条带(图2)，条带的清晰程度肉眼难以区别。在降低经济成本与保证清晰度的前提下，建议将d NTPs浓度调整为2.5μL，此时扩增条带最清晰且拖带较少。2.3 Taq聚合酶浓度对ISSR-PCR的影响

Taq聚合酶浓度过高会引起非特异性扩增，浓度过低则PCR产物量减少[20]。本实验比较了0.5μL、0.4μL、0.3μL、0.2μL、0.1μL五个梯度的Taq DNA聚合酶浓度对ISSR-PCR效率的影响，结果表明五种浓度Taq DNA聚合酶均可扩增出条带，相较而言0.2μL和0.4μL时扩增条带更清晰(图3)，从经济成本角度选择0.2μL Taq DNA聚合酶作为龙头鱼ISSR-PCR实验最优选择。2.4 引物浓度对ISSR-PCR的影响

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3287857