凡纳滨对虾翻译控制肿瘤蛋白基因的克隆及其在对虾原代培养细胞中的表达研究
发布时间：2021-07-22 19:23
尽管国内外学者们在对虾细胞建系上进行了大量的探索和不懈的努力，但对虾细胞培养技术目前仍处于原代培养水平，永生性细胞系一直未成功建立。而对虾永生性细胞系的建立对于研究对虾病毒的致病机理和制备病毒疫苗等具有重要科学意义。在哺乳动物细胞中，致癌基因的过表达可成功实现细胞的永生性转化。翻译控制肿瘤蛋白（TCTP）是一种重要的细胞生长相关蛋白，具有促进细胞生长、抗凋亡和重编程作用。因此，本文拟克隆凡纳滨对虾的TCTP基因，构建真核表达载体，并通过脂质体法将其转染到对虾原代培养细胞中，过表达，分析其在对虾细胞的永生性转化中的作用，为对虾细胞的永生性转化奠定技术基础。本文首先通过RT-PCR技术成功克隆得到凡纳滨对虾TCTP基因编码框的cDNA全长，长度为507bp，编码168个氨基酸。以报告质粒pCX-eGFP为模板，PCR扩增得到加强型绿色荧光蛋白（eGFP）基因编码框。然后，以BamHI和EcoRI双酶切将TCTP基因定向插入真核表达质粒pcDNA3.1/V5-HisA，构建得到pcDNA3.1-TCTP重组质粒；以KpnI和BamHI双酶切将eGFP基因定向插入到pcDNA3.1-TCTP重...
【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TCTP蛋白结构示意图(A)及其与Mss4结构(B)的比较
34 的 PCR 扩增产物的琼脂扩增片段。phoresis analysis of PCer. A: Amplifying fragme行测序（华大基因公司v/）上进行序列比对，与。Lv-TCTP 基因的核酸和编码 168 个氨基酸。
图 2-3 Lv-TCTP 基因的核酸和氨基酸序列分析结果。Fig.2-3 Analysis of the nucleic acid and amino acid sequences of Lv-TCTP gene.3.2 去终止密码子的加强型绿色荧光蛋白（eGFP）基因片段克隆及其序列分析以 pCX-eGFP 质粒为模板，以 eGFP 特异性引物，进行 eGFP 基因 ORF（去TAA）的 PCR 扩增，对其 PCR 扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测的结果如图 2-3所示，约在 750 bp 处，有一条清晰的 PCR 产物条带，该条带的大小和 eGFP ORF的长度相符合。
【参考文献】：
期刊论文
[1]南美白对虾TCTP基因表达分析[J]. 黄华根,沈文英,吴文林. 泉州师范学院学报. 2013(02)
[2]申克孢子丝菌翻译控制肿瘤蛋白的结构分析与功能预测[J]. 黄怀球,钟毅,赵静,张静,孙九峰,张晓辉,袁立燕. 中山大学学报(医学科学版). 2012(04)
[3]凡纳滨对虾翻译控制肿瘤蛋白Fortilin的毕赤酵母表达及其对血细胞免疫反应的影响[J]. 周怡,张文兵,麦康森. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2012(Z1)
[4]CMV启动子与艾美耳球虫基因侧翼序列对黄色荧光蛋白表达调控作用的研究[J]. 李继东,丁林军,何生虎. 江西农业大学学报. 2009(06)
[5]Cloning, Expression and Characterization of Translationally Controlled Tumor Protein （TCTP） Gene from Flatfish Turbot （Scophthalmus maximus）[J]. WANG Jian, GUO Huarong, ZHANG Shicui, YIN Licheng, GUO Bin, and WANG Shaojie College of Marine Life Sciences, Ocean University of China, Qingdao 266003, P. R. China. Journal of Ocean University of China. 2008(02)
[6]EGFP基因在中国明对虾原代培养细胞中的导入和表达[J]. 张晓军,余黎明,李富花,相建海. 中国生物工程杂志. 2006(02)
[7]s-lap/GFP融合蛋白在Hela细胞中的表达与定位[J]. 宋忆淑,宋志宇,费向东,贺冰,李玉新. 吉林大学学报(医学版). 2005(01)
[8]中国对虾淋巴组织的长期原代培养和化学诱变初探[J]. 郎刚华,王勇,汪岷,陈西广. 青岛海洋大学学报(自然科学版). 2001(03)
[9]牙鲆鳃细胞与中国对虾淋巴细胞杂交细胞的体外培养[J]. 樊廷俊,史振平. 水产学报. 2001(01)
本文编号：3297746
【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TCTP蛋白结构示意图(A)及其与Mss4结构(B)的比较
34 的 PCR 扩增产物的琼脂扩增片段。phoresis analysis of PCer. A: Amplifying fragme行测序（华大基因公司v/）上进行序列比对，与。Lv-TCTP 基因的核酸和编码 168 个氨基酸。
图 2-3 Lv-TCTP 基因的核酸和氨基酸序列分析结果。Fig.2-3 Analysis of the nucleic acid and amino acid sequences of Lv-TCTP gene.3.2 去终止密码子的加强型绿色荧光蛋白（eGFP）基因片段克隆及其序列分析以 pCX-eGFP 质粒为模板，以 eGFP 特异性引物，进行 eGFP 基因 ORF（去TAA）的 PCR 扩增，对其 PCR 扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测的结果如图 2-3所示，约在 750 bp 处，有一条清晰的 PCR 产物条带，该条带的大小和 eGFP ORF的长度相符合。
【参考文献】：
期刊论文
[1]南美白对虾TCTP基因表达分析[J]. 黄华根,沈文英,吴文林. 泉州师范学院学报. 2013(02)
[2]申克孢子丝菌翻译控制肿瘤蛋白的结构分析与功能预测[J]. 黄怀球,钟毅,赵静,张静,孙九峰,张晓辉,袁立燕. 中山大学学报(医学科学版). 2012(04)
[3]凡纳滨对虾翻译控制肿瘤蛋白Fortilin的毕赤酵母表达及其对血细胞免疫反应的影响[J]. 周怡,张文兵,麦康森. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2012(Z1)
[4]CMV启动子与艾美耳球虫基因侧翼序列对黄色荧光蛋白表达调控作用的研究[J]. 李继东,丁林军,何生虎. 江西农业大学学报. 2009(06)
[5]Cloning, Expression and Characterization of Translationally Controlled Tumor Protein （TCTP） Gene from Flatfish Turbot （Scophthalmus maximus）[J]. WANG Jian, GUO Huarong, ZHANG Shicui, YIN Licheng, GUO Bin, and WANG Shaojie College of Marine Life Sciences, Ocean University of China, Qingdao 266003, P. R. China. Journal of Ocean University of China. 2008(02)
[6]EGFP基因在中国明对虾原代培养细胞中的导入和表达[J]. 张晓军,余黎明,李富花,相建海. 中国生物工程杂志. 2006(02)
[7]s-lap/GFP融合蛋白在Hela细胞中的表达与定位[J]. 宋忆淑,宋志宇,费向东,贺冰,李玉新. 吉林大学学报(医学版). 2005(01)
[8]中国对虾淋巴组织的长期原代培养和化学诱变初探[J]. 郎刚华,王勇,汪岷,陈西广. 青岛海洋大学学报(自然科学版). 2001(03)
[9]牙鲆鳃细胞与中国对虾淋巴细胞杂交细胞的体外培养[J]. 樊廷俊,史振平. 水产学报. 2001(01)
本文编号：3297746
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