荧光假单胞菌Fur调控蛋白及其功能研究
发布时间：2021-07-22 20:36
荧光假单胞菌是革兰氏阴性菌,是养殖鱼类常见病原之一。在前期研究中,我们自病鱼组织中分离到一株鱼类致病性荧光假单胞菌TSS,并发现铁吸收调节蛋白Fur（ferric uptake regulator）对该菌株的致病性至关重要。Fur是一个转录调控因子,通过识别和结合特定的DNA序列控制靶向基因的表达。本研究通过比较蛋白质组学手段系统分析了TSS野生株和fur敲除株的全蛋白表达谱差异,共鉴定出分属于不同功能类群的28个差异表达蛋白;针对其中四个蛋白,即TssP（VI型分泌系统蛋白）、PspA（丝氨酸蛋白酶）、OprF（外膜蛋白）和ClpP（ATP依赖的Clp蛋白酶水解亚基）,分别进行了基因敲除并获得了相应突变株;以大菱鲆为实验动物,对这四株突变菌株进行功能检测,发现oprF和clpP敲除株在抗宿主血清杀伤、侵染宿主组织和导致宿主死亡等三方面的能力均显著下降,相比之下,tssP和pspA突变株与野生株的致病性没有明显差异;大肠杆菌异源表达的重组OprF蛋白经纯化后作为亚单位疫苗免疫大菱鲆,可在受免鱼中引起特异性血清抗体的产生,并对TSS感染具有显著的免疫保护作用;另外发现,OprF抗体封闭致...
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院海洋研究所)山东省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Fur调控的细胞过程的概况
道发现来自不同生物体的 Fur 都可以与血红素发生结合。在大肠杆菌，一个血红素分子与 Fur 二聚体的紧密相互作用（Kd<1 μM）阻止了锌和锰与该金属调节蛋白的结合，表明了 Fur-血红素复合物在细菌代谢调节中具有潜在作用（Smith et al.,1996）。鱼腥藻 PCC 7120 的 FurA 可以等摩尔比特异性地结合血红素，这种不同类型的交互作用使 FurA 失去了对 DNA 的亲和力（Hernandez et al., 2004b）。与大肠杆菌蛋白不同，FurA 具有可以与血红素结合的半胱氨酸-脯氨酸调节基序。光谱学和突变分析证实了半胱氨酸是 Fe2+-血红素的一个轴向配位体，也证明了FurA 具有一个氧化还原依赖性的配体开关（Palleroni and Bradbury, 1993（）图 1.3）。因为 Fe2+-血红素相互作用满足基于血红素感应蛋白的所有特征，所以研究人员提出，血红素可能作为不同的环境中的蓝藻细菌的光合营养细胞和微需氧异形细胞的氧化还原信号。关于血红素是否也可以在其它厌氧呼吸的细菌中通过 Fur 间接调控氧气感应（Teixido et al., 2010; Yang et al., 2013）需要进一步的研究。
荧光假单胞菌 Fur 调控蛋白及其功能研究1 敲除株 TSS oprF 的构建prF 基因缺失片段的获得利用自杀性质粒 p7TS（Wang et al., 2009）构建基因缺失突变rlap PCR 法完成缺失片段的克隆。第一步 PCR 分别扩增出待缺失游序列，并且两个目的片段末端有小部分碱基重叠；第二步以第片段混合物为模板进行 PCR，通过其碱基重叠区域退火，扩增缺失片段。技术路线如图 3.1 所示：因敲除
【参考文献】：
期刊论文
[1]Pseudomonas fluorescens-like bacteria from the stomach:A microbiological and molecular study[J]. Saurabh Kumar Patel,Chandra Bhan Pratap,Ajay Kumar Verma,Ashok Kumar Jain,Vinod Kumar Dixit,Gopal Nath. World Journal of Gastroenterology. 2013(07)
[2]春季常见鱼病的诊断和防治措施[J]. 王春华. 渔业致富指南. 2012(01)
[3]罗非鱼荧光假单胞菌的分离鉴定[J]. 邓显文,谢芝勋,刘加波,谢志勤,谢丽基,庞耀珊. 广西农业科学. 2010(06)
[4]荧光假单胞菌灭活疫苗对草鱼的免疫保护效应[J]. 耿晓修,丁诗华,孙翰昌,谢继刚. 西南农业大学学报(自然科学版). 2006(01)
[5]春季淡水鱼类常见细菌性疾病的防治[J]. 章秋虎. 渔业致富指南. 2004(05)
[6]团头鲂细菌性败血症免疫研究[J]. 贺蓉,沙莎,唐波,张友昀,邓正兵. 西南农业大学学报(自然科学版). 2004(01)
[7]长毛对虾幼体荧光病的防治[J]. 徐国成,李士虎. 水产科技情报. 2002(06)
[8]大鲵赤皮病病原分离鉴定及防治试验[J]. 王高学,白占涛,张向前,张联丽. 西北农业大学学报. 1999(04)
[9]鱼病防治实用技术(连载)[J]. 汪建国. 科学养鱼. 1999(04)
本文编号：3297851
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院海洋研究所)山东省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Fur调控的细胞过程的概况
道发现来自不同生物体的 Fur 都可以与血红素发生结合。在大肠杆菌，一个血红素分子与 Fur 二聚体的紧密相互作用（Kd<1 μM）阻止了锌和锰与该金属调节蛋白的结合，表明了 Fur-血红素复合物在细菌代谢调节中具有潜在作用（Smith et al.,1996）。鱼腥藻 PCC 7120 的 FurA 可以等摩尔比特异性地结合血红素，这种不同类型的交互作用使 FurA 失去了对 DNA 的亲和力（Hernandez et al., 2004b）。与大肠杆菌蛋白不同，FurA 具有可以与血红素结合的半胱氨酸-脯氨酸调节基序。光谱学和突变分析证实了半胱氨酸是 Fe2+-血红素的一个轴向配位体，也证明了FurA 具有一个氧化还原依赖性的配体开关（Palleroni and Bradbury, 1993（）图 1.3）。因为 Fe2+-血红素相互作用满足基于血红素感应蛋白的所有特征，所以研究人员提出，血红素可能作为不同的环境中的蓝藻细菌的光合营养细胞和微需氧异形细胞的氧化还原信号。关于血红素是否也可以在其它厌氧呼吸的细菌中通过 Fur 间接调控氧气感应（Teixido et al., 2010; Yang et al., 2013）需要进一步的研究。
荧光假单胞菌 Fur 调控蛋白及其功能研究1 敲除株 TSS oprF 的构建prF 基因缺失片段的获得利用自杀性质粒 p7TS（Wang et al., 2009）构建基因缺失突变rlap PCR 法完成缺失片段的克隆。第一步 PCR 分别扩增出待缺失游序列，并且两个目的片段末端有小部分碱基重叠；第二步以第片段混合物为模板进行 PCR，通过其碱基重叠区域退火，扩增缺失片段。技术路线如图 3.1 所示：因敲除
【参考文献】：
期刊论文
[1]Pseudomonas fluorescens-like bacteria from the stomach:A microbiological and molecular study[J]. Saurabh Kumar Patel,Chandra Bhan Pratap,Ajay Kumar Verma,Ashok Kumar Jain,Vinod Kumar Dixit,Gopal Nath. World Journal of Gastroenterology. 2013(07)
[2]春季常见鱼病的诊断和防治措施[J]. 王春华. 渔业致富指南. 2012(01)
[3]罗非鱼荧光假单胞菌的分离鉴定[J]. 邓显文,谢芝勋,刘加波,谢志勤,谢丽基,庞耀珊. 广西农业科学. 2010(06)
[4]荧光假单胞菌灭活疫苗对草鱼的免疫保护效应[J]. 耿晓修,丁诗华,孙翰昌,谢继刚. 西南农业大学学报(自然科学版). 2006(01)
[5]春季淡水鱼类常见细菌性疾病的防治[J]. 章秋虎. 渔业致富指南. 2004(05)
[6]团头鲂细菌性败血症免疫研究[J]. 贺蓉,沙莎,唐波,张友昀,邓正兵. 西南农业大学学报(自然科学版). 2004(01)
[7]长毛对虾幼体荧光病的防治[J]. 徐国成,李士虎. 水产科技情报. 2002(06)
[8]大鲵赤皮病病原分离鉴定及防治试验[J]. 王高学,白占涛,张向前,张联丽. 西北农业大学学报. 1999(04)
[9]鱼病防治实用技术(连载)[J]. 汪建国. 科学养鱼. 1999(04)
本文编号：3297851
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