长牡蛎免疫致敏机制的初步研究
发布时间：2021-07-23 15:07
已有研究表明无脊椎动物中存在一定程度特异性的获得性免疫，称之为免疫致敏，但目前对其潜在机制的了解还非常有限。本研究采取分子、细胞生物学等手段，分析了长牡蛎免疫致敏现象的分子和细胞特征，探讨吞噬相关分子和信号通路及其与免疫致敏的关系，查明了长牡蛎血淋巴细胞和血清在免疫致敏过程中的作用。经灭活的灿烂弧菌初次刺激的牡蛎在遭受活的灿烂弧菌二次刺激时，其在细胞水平呈现出更强的免疫响应。灭活的灿烂弧菌初次刺激后，牡蛎总血淋巴细胞数量（THC）显著增加，新生的循环血淋巴细胞数量仅在24小时出现略微增加，血淋巴细胞的吞噬率在12小时上升至最高值。活的灿烂弧菌再次刺激后，牡蛎THC的增加幅度更加明显，同时更快地达到峰值（6小时），新生的循环血淋巴细胞数量在6小时显著增加，其增殖率较初次刺激时升高近4倍，血淋巴细胞的吞噬率在12小时显著增强并高于第一次刺激。同时，再次刺激后增强的血淋巴细胞吞噬作用对灿烂弧菌是高度特异的，能有效地区别鳗弧菌、溶珊瑚菌、耶罗维亚酵母和藤黄微球菌。在连续两次灿烂弧菌刺激后，长牡蛎造血相关基因CgRunx1和CgBMP7的最高表达量显著高于第一次灿烂弧菌刺激，而CgGATA3的表...
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院海洋研究所)山东省
【文章页数】：109 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
第一章 绪论
第一节 免疫记忆
一、免疫记忆及其特征
二、免疫记忆产生机理
第二节 免疫致敏——无脊椎动物中的——“免疫记忆”
一、无脊椎动物的免疫致敏现象
二、免疫致敏的机制研究
第三节 本研究的目的及意义
第二章 实验材料与方法
第一节 实验材料
一、实验动物与菌株
二、主要试剂
三、引物信息
四、主要仪器设备
第二节 实验方法
一、长牡蛎免疫刺激及样品收集
二、长牡蛎血淋巴细胞总数检测
三、长牡蛎新生血淋巴细胞数的检测
四、长牡蛎血细胞吞噬能力的测定
五、长牡蛎血淋巴细胞凋亡率的检测
六、长牡蛎组织总 RNA 的提取及 cDNA 的合成
七、基因克隆与序列分析
八、荧光实时定量 PCR 检测
九、蛋白的原核重组表达和纯化
十、多克隆抗体制备
十一、重组蛋白的菌结合活性检测
十二、重组蛋白的 PAMPs 结合活性检测
十三、免疫荧光（细胞定位）实验
十四、数据统计分析
第三章 实验结果
第一节 灿烂弧菌两次刺激前后长牡蛎免疫指标的变化
一、血淋巴细胞总数变化
二、新生血淋巴细胞数目变化
三、血淋巴细胞吞噬能力的变化
第二节 长牡蛎血淋巴细胞造血和吞噬作用相关基因的研究
一、连续遭受两次灿烂弧菌刺激后造血相关基因 mRNA 水平的变化
二、连续遭受两次灿烂弧菌刺激后吞噬相关基因 mRNA 水平的变化
三、吞噬相关基因的分子特征
四、吞噬相关基因 mRNA 在各组织中的表达模式
五、灿烂弧菌和不同 PAMPs 刺激后吞噬相关基因的表达变化
六、体外重组蛋白及多克隆抗体
七、吞噬相关蛋白对不同 PAMPs 和微生物的结合活性
八、CgToll 6 和 Cgintegrin 蛋白在血淋巴细胞吞噬中的作用
第三节 血淋巴转移后长牡蛎细胞免疫指标的变化
一、血清转移后长牡蛎细胞免疫指标的变化
二、血淋巴细胞转移后长牡蛎细胞免疫指标的变化
三、血清和血淋巴细胞共转移后长牡蛎细胞免疫指标的变化
第四章 讨论
第一节 灿烂弧菌的连续刺激能引发长牡蛎的免疫致敏现象
一、灿烂弧菌连续刺激能引发长牡蛎血淋巴细胞的快速增殖
二、灿烂弧菌连续刺激能引发长牡蛎血淋巴细胞吞噬能力的增强
第二节 血淋巴细胞增殖及其吞噬在长牡蛎免疫致敏过程中可能的作用机制
一、血细胞增殖在牡蛎免疫致敏中可能的作用机制
二、血细胞吞噬在牡蛎免疫致敏中可能的作用机制
三、模式识别受体 CgToll 6 在长牡蛎免疫致敏中的作用
四、血清分子 CgEcSOD 在长牡蛎免疫致敏中的作用
第三节 血清和血淋巴细胞在介导长牡蛎免疫致敏中的作用
第五章 结论
一、揭示了灿烂弧菌连续刺激引发长牡蛎的免疫致敏的细胞学特征
二、初步探明了长牡蛎免疫致敏可能的分子机制
三、血淋巴细胞可能在长牡蛎免疫致敏产生过程中起着关键性的作用
参考文献
作者简介
硕士期间完成和发表的论文
【参考文献】：
博士论文
[1]栉孔扇贝关键模式识别受体介导的免疫应答机制研究[D]. 杨嘉龙.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2011
本文编号：3299522
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院海洋研究所)山东省
【文章页数】：109 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
第一章 绪论
第一节 免疫记忆
一、免疫记忆及其特征
二、免疫记忆产生机理
第二节 免疫致敏——无脊椎动物中的——“免疫记忆”
一、无脊椎动物的免疫致敏现象
二、免疫致敏的机制研究
第三节 本研究的目的及意义
第二章 实验材料与方法
第一节 实验材料
一、实验动物与菌株
二、主要试剂
三、引物信息
四、主要仪器设备
第二节 实验方法
一、长牡蛎免疫刺激及样品收集
二、长牡蛎血淋巴细胞总数检测
三、长牡蛎新生血淋巴细胞数的检测
四、长牡蛎血细胞吞噬能力的测定
五、长牡蛎血淋巴细胞凋亡率的检测
六、长牡蛎组织总 RNA 的提取及 cDNA 的合成
七、基因克隆与序列分析
八、荧光实时定量 PCR 检测
九、蛋白的原核重组表达和纯化
十、多克隆抗体制备
十一、重组蛋白的菌结合活性检测
十二、重组蛋白的 PAMPs 结合活性检测
十三、免疫荧光（细胞定位）实验
十四、数据统计分析
第三章 实验结果
第一节 灿烂弧菌两次刺激前后长牡蛎免疫指标的变化
一、血淋巴细胞总数变化
二、新生血淋巴细胞数目变化
三、血淋巴细胞吞噬能力的变化
第二节 长牡蛎血淋巴细胞造血和吞噬作用相关基因的研究
一、连续遭受两次灿烂弧菌刺激后造血相关基因 mRNA 水平的变化
二、连续遭受两次灿烂弧菌刺激后吞噬相关基因 mRNA 水平的变化
三、吞噬相关基因的分子特征
四、吞噬相关基因 mRNA 在各组织中的表达模式
五、灿烂弧菌和不同 PAMPs 刺激后吞噬相关基因的表达变化
六、体外重组蛋白及多克隆抗体
七、吞噬相关蛋白对不同 PAMPs 和微生物的结合活性
八、CgToll 6 和 Cgintegrin 蛋白在血淋巴细胞吞噬中的作用
第三节 血淋巴转移后长牡蛎细胞免疫指标的变化
一、血清转移后长牡蛎细胞免疫指标的变化
二、血淋巴细胞转移后长牡蛎细胞免疫指标的变化
三、血清和血淋巴细胞共转移后长牡蛎细胞免疫指标的变化
第四章 讨论
第一节 灿烂弧菌的连续刺激能引发长牡蛎的免疫致敏现象
一、灿烂弧菌连续刺激能引发长牡蛎血淋巴细胞的快速增殖
二、灿烂弧菌连续刺激能引发长牡蛎血淋巴细胞吞噬能力的增强
第二节 血淋巴细胞增殖及其吞噬在长牡蛎免疫致敏过程中可能的作用机制
一、血细胞增殖在牡蛎免疫致敏中可能的作用机制
二、血细胞吞噬在牡蛎免疫致敏中可能的作用机制
三、模式识别受体 CgToll 6 在长牡蛎免疫致敏中的作用
四、血清分子 CgEcSOD 在长牡蛎免疫致敏中的作用
第三节 血清和血淋巴细胞在介导长牡蛎免疫致敏中的作用
第五章 结论
一、揭示了灿烂弧菌连续刺激引发长牡蛎的免疫致敏的细胞学特征
二、初步探明了长牡蛎免疫致敏可能的分子机制
三、血淋巴细胞可能在长牡蛎免疫致敏产生过程中起着关键性的作用
参考文献
作者简介
硕士期间完成和发表的论文
【参考文献】：
博士论文
[1]栉孔扇贝关键模式识别受体介导的免疫应答机制研究[D]. 杨嘉龙.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2011
本文编号：3299522
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3299522.html
