杀鱼爱德华氏菌HutZ抗逆性与致病性分析及受调控机制研究
发布时间：2021-07-27 11:43
杀鱼爱德华氏菌（Edwardsiella spicicida）之前又称迟缓爱德华氏菌,是海水养殖业的重要致病菌,可感染牙鲆、大菱鲆和罗非鱼等多种重要经济水产动物,严重影响了我国海水养殖业的健康发展。截止到目前,有关杀鱼爱德华氏菌的致病机制还尚未完全了解。铁是杀鱼爱德华氏菌引发宿主致病所不可或缺的,然而,在宿主体内大部分铁以血红素的形式存在,自由铁很少,因此,利用血红素释放铁的血红素摄取系统在杀鱼爱德华氏菌引发宿主致病过程中扮演着至关重要的作用。在前期对杀鱼爱德华氏菌组学研究中发现,一个注释为血红素利用蛋白的基因很可能参与了细菌的抗逆性和致病性。为了进一步探究和明确该基因的功能,本研究以杀鱼爱德华氏菌血红素利用蛋白HutZEp为对象,通过对HutZEp的功能检测及其受铁吸收调控因子（Ferric uptake regulator,Fur）的调控作用分析,阐述HutZEp在杀鱼爱德华氏菌抗逆和致病过程中的作用及其受调控机制,为杀鱼爱德华氏菌的防治提供理论支撑。主要研究内容和结果如下:（1）HutZEp蛋白结构功能分析。生物信息学分析表明HutZEp是一个与血红素利用相关的蛋白,它与大肠杆菌...
【文章来源】：河北农业大学河北省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－７．酸性条件下ＴＸＯｌ和ＴＸＯｌ?Ａ／７Ｗ／Ｚ生长分析
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【参考文献】：
期刊论文
[1]Fur/RyhB调控禽致病性大肠杆菌运动性机制的研究[J]. 涂健,蔡伟真,阮苑,宋祥军,邵颖,祁克宗. 畜牧兽医学报. 2020(02)
[2]肝螺杆菌CdtB基因缺失株的构建与验证[J]. 朱宸,曹舒扬,吴志浩,殷俊,朱立麒,张泉. 中国畜牧兽医. 2020(01)
[3]利用CRISPR/Cas9技术构建FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株[J]. 张红,胡晓霞,洛若愚,陈欢,李梦如,杨琅. 中国临床新医学. 2019(08)
[4]水产养殖病害特点及防治技术[J]. 胡军娜,马娟,余炜. 河南水产. 2019(04)
[5]Fur过表达对大肠杆菌血红素合成的影响[J]. 李蒙蒙,王雨萱,唐蕾. 食品与发酵工业. 2019(16)
[6]水产养殖病害流行特点及综合防治措施[J]. 林钢岭. 农民致富之友. 2019(05)
[7]细菌生物膜的特征及抗细菌生物膜策略[J]. 陈小楠,申元娜,李彭宇,邹祎晴,胡海燕. 药学学报. 2018(12)
[8]ToxR Is Required for Biofilm Formation and Motility of Vibrio Parahaemolyticus[J]. CHEN Long,QIU Yue,TANG Hao,HU Ling Fei,YANG Wen Hui,ZHU Xiao Jue,HUANG Xin Xiang,WANG Tang,ZHANG Yi Quan. Biomedical and Environmental Sciences. 2018(11)
[9]铁摄取调节子在细菌铁离子代谢中的调节及其机制[J]. 刘珈均,程安春,刘马峰. 中国生物化学与分子生物学报. 2018(06)
[10]染色体微阵列分析技术在超声异常胎儿产前诊断中的应用[J]. 胡婷,王嘉敏,张竹,朱红梅,刘洪倩,张雪梅,张海霞,杜泽,李玲萍,王和,刘珊玲. 中华医学遗传学杂志. 2017 (03)
博士论文
[1]盐胁迫下胡杨表达谱微阵列分析及差异表达基因的功能解析[D]. 丁明全.北京林业大学 2011
[2]迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella Tarda）LuxS/AI-2群体感应系统研究[D]. 张敏.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2009
[3]荧光假单胞菌抗铜基因簇的表达调控及其致病性分析[D]. 胡永华.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2009
硕士论文
[1]人源哺乳动物细胞重组抗体表达系统的构建及相关因子筛选[D]. 何曾安.江南大学 2017
[2]溶藻弧菌摄铁系统相关基因的克隆、表达及功能分析[D]. 薛丽丽.广东海洋大学 2014
[3]我国海水养殖污染问题与其治理研究[D]. 彭霈.中国海洋大学 2014
[4]霍乱弧菌HutX蛋白的提取和血红素结合能力研究[D]. 李君.第二军医大学 2013
[5]迟缓爱德华氏菌唾液酸酶的克隆表达与功能研究[D]. 靳仁娉.中国海洋大学 2012
[6]致病性迟缓爱德华氏菌的鉴定、PCR检测及esaC基因的功能鉴定[D]. 李杰.中国海洋大学 2008
本文编号：3305717
【文章来源】：河北农业大学河北省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－７．酸性条件下ＴＸＯｌ和ＴＸＯｌ?Ａ／７Ｗ／Ｚ生长分析
ｌ?ａｎｄ?ＴＸＯ?丨?ＡＡＫ／Ｚｍｏｂｉｌｉｔｙ．??２．３．８／７ＷＺ＆对杀鱼爱德华氏菌抗宿主血清杀菌能力的影响??为了检测ＡｗｒＺ￡／７是否在杀鱼爱德华氏菌抵抗宿主血清杀伤中起作用，将野生??株株ＴＸ０１和突变株ＴＸ０１Ａ；ｍ？Ｚ与未免疫牙鲆血清（或ＰＢＳ）在２３°Ｃ培养箱中??孵育１?ｈ，结果如２－１０?ａ图所示，野生株ＴＸ０１平均存活率为７７．０％，而突变株??ＴＸ０１Ａ／ｍ（Ｚ平均存活率只有５７．３％；?ＲＴ－ｑＰＣＲ检测在正常和血清压力条件下??印基因的表达情况，结果如图２－１０?ｂ所示，／２加Ｚ办在血清压力条件下的表达??量是正常条件下表达量的２．５倍。上述结果表明在杀鱼爱德华氏菌抵抗宿??主血清杀菌能力方面起着关键作用。??ａ?□?ＴＸＯｌ?ｂ??＾?ｉｎｎ?Ｈｉ?ＴＸ０＼ＡｈｕｔＺ?ｃ?＾￣１?＊＊??色?ＥＥＯ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?？§?Ｔ??ａｌ?２－?＿??Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｓｅｒｕｍ??图２－１０．?ＴＸＯｌ和ＴＸ０１Ａ／ｗ？Ｚ抗血清杀菌能力及血清压力下Ａ？／Ｚ印的表达量。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１０．?ＴＸＯｌ?ａｎｄ?ＴＸＯｌ?Ａ／？ｚ／／Ｚ?ａｎｔｉ－ｓｅｒｕｍ?ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ?ａｂｉｌｉｔｙ?ａｎｄ?ｈｕｔＺＥｐ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｕｎｄｅｒ?ｓｅｒｕｍ?ｐｒｅｓｓｕｒｅ．??图注：ａ：血清杀菌：ｂ：?ＲＴ－ｑＰＣＲ?分析。Ｌｅｇｅｎｄ：?ａ?：ｓｅｒａ?ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ；?ｂ：ＲＴ－ｑＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ．??Ｂ１??
?河北农业大学硕士学位（毕业）论文???２．３．９如泛办对杀鱼爱德华氏菌细胞粘附及胞内繁殖能力的影响??从上述实验得知／ｍ？Ｚ办的缺失对杀鱼爱德华氏菌的抗逆性方面（生物膜形成??能力、运动能力及抵抗宿主血清杀菌等）有着重要的影响，但的生理作用??还尚未确定。通过体外侵染细胞和体内侵染牙鲆组织实验进一步评估；ｎ＾Ｚ￡ｐ在杀??鱼爱德华氏菌致病机制中的作用。??为了检测是否在杀鱼爱德华氏菌与宿主细胞相互作用中起作用，我们??进行了细胞粘附能力检测，结果如图２－１１?ａ图所示，无论粘附ｌｈ还是２ｈ，突??变株ＴＸＯｌＡ／ｗ／Ｚ的粘附能力均弱于野生株ＴＸＯＩ。??根据己有数据显示，杀鱼爱德华氏菌能够在宿主细胞中存活和繁殖为??了研究／ｍ？Ｚ办是否在杀鱼爱德华氏菌胞内繁殖能力方面起作用，将ＴＸ０１和??ＴＸＯｌＡ／ｕｄＺ与ＦＧ细胞一起孵育２ｈ，庆大霉素处理后，继续孵育不同时间，通??过平板计数来研究野生株ＴＸ０１和突变株ＴＸＯＩＡ／＾Ｚ的胞内繁殖能力，结果如??图２－ｌｌｂ所示，在Ｏｈ时，二者胞内存活数量差不多，随着侵染时间的增加，虽??然二者胞内存活能力均有提高，但突变株ＴＸＯｌＡ／ｎｚ这的胞内存活能力远低于野??生株ＴＸ０１，在侵染８ｈ时最显著。??综上所述，／ｍ／Ｚ印的缺失明显削弱了杀鱼爱德华氏菌对宿主细胞的粘附和胞??内繁殖能力。??ａ?３?□?ＴＸ０１?ｂ?□?ＴＸ〇１??■?ＴＸＯｌＭｗｆＺ?■?ＴＸＯ＼ＮｉｕｔＺ?．ｊｌ??Ｔ?８－??＾２＂?＊?－〇?６－??Ｎ—？?丁?ｉ－Ｈ??Ｊｌ—Ｈ．．．?ＩＩ?．．．．〇，？?（１１Ｕ??１?ｈ?２ｈ?Ｏｈ?２ｈ?４ｈ?８ｈ??图２－１１
【参考文献】：
期刊论文
[1]Fur/RyhB调控禽致病性大肠杆菌运动性机制的研究[J]. 涂健,蔡伟真,阮苑,宋祥军,邵颖,祁克宗. 畜牧兽医学报. 2020(02)
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[3]利用CRISPR/Cas9技术构建FSTL1基因敲除的SiHa细胞稳定株[J]. 张红,胡晓霞,洛若愚,陈欢,李梦如,杨琅. 中国临床新医学. 2019(08)
[4]水产养殖病害特点及防治技术[J]. 胡军娜,马娟,余炜. 河南水产. 2019(04)
[5]Fur过表达对大肠杆菌血红素合成的影响[J]. 李蒙蒙,王雨萱,唐蕾. 食品与发酵工业. 2019(16)
[6]水产养殖病害流行特点及综合防治措施[J]. 林钢岭. 农民致富之友. 2019(05)
[7]细菌生物膜的特征及抗细菌生物膜策略[J]. 陈小楠,申元娜,李彭宇,邹祎晴,胡海燕. 药学学报. 2018(12)
[8]ToxR Is Required for Biofilm Formation and Motility of Vibrio Parahaemolyticus[J]. CHEN Long,QIU Yue,TANG Hao,HU Ling Fei,YANG Wen Hui,ZHU Xiao Jue,HUANG Xin Xiang,WANG Tang,ZHANG Yi Quan. Biomedical and Environmental Sciences. 2018(11)
[9]铁摄取调节子在细菌铁离子代谢中的调节及其机制[J]. 刘珈均,程安春,刘马峰. 中国生物化学与分子生物学报. 2018(06)
[10]染色体微阵列分析技术在超声异常胎儿产前诊断中的应用[J]. 胡婷,王嘉敏,张竹,朱红梅,刘洪倩,张雪梅,张海霞,杜泽,李玲萍,王和,刘珊玲. 中华医学遗传学杂志. 2017 (03)
博士论文
[1]盐胁迫下胡杨表达谱微阵列分析及差异表达基因的功能解析[D]. 丁明全.北京林业大学 2011
[2]迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella Tarda）LuxS/AI-2群体感应系统研究[D]. 张敏.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2009
[3]荧光假单胞菌抗铜基因簇的表达调控及其致病性分析[D]. 胡永华.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2009
硕士论文
[1]人源哺乳动物细胞重组抗体表达系统的构建及相关因子筛选[D]. 何曾安.江南大学 2017
[2]溶藻弧菌摄铁系统相关基因的克隆、表达及功能分析[D]. 薛丽丽.广东海洋大学 2014
[3]我国海水养殖污染问题与其治理研究[D]. 彭霈.中国海洋大学 2014
[4]霍乱弧菌HutX蛋白的提取和血红素结合能力研究[D]. 李君.第二军医大学 2013
[5]迟缓爱德华氏菌唾液酸酶的克隆表达与功能研究[D]. 靳仁娉.中国海洋大学 2012
[6]致病性迟缓爱德华氏菌的鉴定、PCR检测及esaC基因的功能鉴定[D]. 李杰.中国海洋大学 2008
本文编号：3305717
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