一株草鱼维氏气单胞菌的分离鉴定及毒力基因分析
发布时间：2021-08-03 19:27
为了鉴定贵州芩巩县某养殖场草鱼发病死亡的病原,本研究通过临床解剖观察、细菌分离培养、革兰氏染色镜检、生化鉴定、药敏试验、动物回归试验、16S rDNA与gyr B基因测序及系统分析进行鉴定。结果显示,本研究从发病草鱼体内分离到1株致病菌GZQG2019,分离菌在培养基中呈圆形、表面湿润光滑、边缘整齐半透明的灰白色菌落,菌落周围呈现β-溶血环;革兰氏镜检显示,分离菌呈两端钝圆短小阴性杆菌;16S rDNA、gyr B基因序列分析显示,分离菌与维氏气单胞菌聚为一支,同源性均在99%以上;药敏试验结果显示,在使用的20种抗菌药物中,该菌对四环素、丁胺卡那、多黏菌素B和头孢曲松等10种药物敏感,对苯唑西林、青霉素、阿莫西林和庆大霉素等8种药物中度敏感,对头孢氨苄、复方新诺明2种药物耐药;动物回归试验显示,该菌对健康草鱼具有强致病性;10种毒力基因扩增结果显示,分离菌携带气溶素、热不稳定性肠毒素、溶血素、核酶、丝氨酸蛋白酶、弹性蛋白酶和酯酶7种毒力基因。本试验成功分离到1株草鱼源维氏气单胞菌,具有较强毒力,且携带多种毒力因子;对四环素、丁胺卡那等药物敏感,对四环素、丁胺卡那等耐药,为维氏气单胞菌...
【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(03)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
图1 分离菌株β-溶血环
图1 分离菌株β-溶血环表2 分离菌株生化反应结果Table 2 Biochemical test results of the isolated strain 项目Items 结果Results 项目Items 结果Results 3% NaCl胨水 3% NaCl peptone water + 1% NaCl甘露醇 1% NaCl mannitol + 6% NaCl胨水 6% NaCl peptone water - 1% NaCl阿拉伯胶 1% NaCl arabic gum + 8% NaCl胨水 8% NaCl peptone water - 1% NaCl肌醇 1% NaCl inositol - 10% NaCl胨水 10% NaCl peptone water - 1% NaCl赖氨酸 1% NaCl lysine + 1% NaCl 氨基酸对照 1% NaCl amino acid control - 1% NaCl葡萄糖 1% NaCl glucose + 1% NaCl精氨酸双水解酶1% NaCl arginine dihydrolase + 1% NaCl葡磷胨水(VP)1% NaCl peptone water (VP) - 1% NaCl 精氨酸双水解酶对照1% NaCl arginine dihydrolase control + 1% NaCl蛋白胨水(靛基质)1% NaCl peptone water (indigo matrix) + 无盐胨水 No salt peptone water + 1% NaCl蔗糖 1% NaCl sucrose + +，阳性；-，阴性+,Positive;-,Negative
采用16S rDNA通用引物和gyr B基因特异性引物对分离菌株GZQG2019进行PCR扩增,产物经纯化后连接pMD19-T载体测序,16S rDNA通用引物扩增后获得大小为1 424 bp的序列,gyr B基因特异性引物扩增后获得大小为742 bp的序列(图3)。将测序结果与GenBank中参考菌株16S rDNA及gyr B基因序列进行同源性比对,发现分离菌株GZQG2019的16S rDNA和gyr B基因与维氏气单胞菌同源性均>99%。采用Mega 7.0软件对分离菌株与参考菌株16S rDNA及gyr B基因序列构建系统进化树,结果显示,菌株GZQG2019均与维氏气单胞菌聚为一支(图4、5)。结合分离菌株GZQG2019的形态观察、生理生化特性鉴定、16S rDNA及gyr B基因序列分析,最终可判定分离菌株GZQG2019为维氏气单胞菌。图4 分离菌株与参考株16S rDNA基因序列系统进化树
【参考文献】：
期刊论文
[1]草鱼致病性维氏气单胞菌的分离鉴定[J]. 覃华斌,袁富豪,杨映,谭淑雯,于辉,柯文杰,陈言峰. 水产科技情报. 2019(03)
[2]两株草鱼源维氏气单胞菌菌株的主要表型特征及致病力比较[J]. 任燕,高彩霞,曾伟伟,王庆,王英英,李莹莹,尹纪元,常藕琴,石存斌. 中国预防兽医学报. 2019(02)
[3]斑点叉尾鮰源致病性维氏气单胞菌的分离与生物学特性鉴定[J]. 田浪,温贵兰,张升波,杨佰启,李昌红,徐丽,林汉卿,管国丹. 中国畜牧兽医. 2018(11)
[4]草鱼源致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药物敏感性分析[J]. 高彩霞,任燕,王庆,曾伟伟,李莹莹,王英英,常藕琴,石存斌,张德锋,方珍珍. 安徽农业大学学报. 2018(03)
[5]维氏气单胞菌最新研究进展[J]. 康元环,张冬星,杨滨僮,张贺亮,孙武文,单晓枫,钱爱东. 中国人兽共患病学报. 2018(05)
[6]锦鲫致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 贾俊鹏,康元环,张冬星,陈龙,孙武文,张贺亮,崔冰冰,单晓枫,钱爱东. 中国预防兽医学报. 2018(01)
[7]罗非鱼竖鳞病病原维氏气单胞菌的分离鉴定与致病性研究[J]. 韦阳道,杨军,文衍红,司徒玲,刘霞,易弋. 中国畜牧兽医. 2016(11)
[8]52株不同淡水鱼类维氏气单胞菌耐药表型的分析[J]. 耿昕颖,葛铮,孔令聪,朱世馨,单晓枫,马红霞,高云航. 中国兽药杂志. 2015(06)
[9]草鱼2株气单胞菌的分离与鉴定[J]. 隗黎丽,王自蕊,杨竹青. 水产科学. 2013(06)
[10]白缘(鱼央)维氏气单胞菌的分离鉴定与药敏试验[J]. 杨泽晓,周亚,任冉阳,王印,姚学萍,杨水仙,汪开毓. 中国畜牧兽医. 2012(02)
硕士论文
[1]草鱼出血性疾病病原体的鉴定、致病性及免疫防治研究[D]. 曹笑楠.河南师范大学 2018
本文编号：3320197
【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(03)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
图1 分离菌株β-溶血环
图1 分离菌株β-溶血环表2 分离菌株生化反应结果Table 2 Biochemical test results of the isolated strain 项目Items 结果Results 项目Items 结果Results 3% NaCl胨水 3% NaCl peptone water + 1% NaCl甘露醇 1% NaCl mannitol + 6% NaCl胨水 6% NaCl peptone water - 1% NaCl阿拉伯胶 1% NaCl arabic gum + 8% NaCl胨水 8% NaCl peptone water - 1% NaCl肌醇 1% NaCl inositol - 10% NaCl胨水 10% NaCl peptone water - 1% NaCl赖氨酸 1% NaCl lysine + 1% NaCl 氨基酸对照 1% NaCl amino acid control - 1% NaCl葡萄糖 1% NaCl glucose + 1% NaCl精氨酸双水解酶1% NaCl arginine dihydrolase + 1% NaCl葡磷胨水(VP)1% NaCl peptone water (VP) - 1% NaCl 精氨酸双水解酶对照1% NaCl arginine dihydrolase control + 1% NaCl蛋白胨水(靛基质)1% NaCl peptone water (indigo matrix) + 无盐胨水 No salt peptone water + 1% NaCl蔗糖 1% NaCl sucrose + +，阳性；-，阴性+,Positive;-,Negative
采用16S rDNA通用引物和gyr B基因特异性引物对分离菌株GZQG2019进行PCR扩增,产物经纯化后连接pMD19-T载体测序,16S rDNA通用引物扩增后获得大小为1 424 bp的序列,gyr B基因特异性引物扩增后获得大小为742 bp的序列(图3)。将测序结果与GenBank中参考菌株16S rDNA及gyr B基因序列进行同源性比对,发现分离菌株GZQG2019的16S rDNA和gyr B基因与维氏气单胞菌同源性均>99%。采用Mega 7.0软件对分离菌株与参考菌株16S rDNA及gyr B基因序列构建系统进化树,结果显示,菌株GZQG2019均与维氏气单胞菌聚为一支(图4、5)。结合分离菌株GZQG2019的形态观察、生理生化特性鉴定、16S rDNA及gyr B基因序列分析,最终可判定分离菌株GZQG2019为维氏气单胞菌。图4 分离菌株与参考株16S rDNA基因序列系统进化树
【参考文献】：
期刊论文
[1]草鱼致病性维氏气单胞菌的分离鉴定[J]. 覃华斌,袁富豪,杨映,谭淑雯,于辉,柯文杰,陈言峰. 水产科技情报. 2019(03)
[2]两株草鱼源维氏气单胞菌菌株的主要表型特征及致病力比较[J]. 任燕,高彩霞,曾伟伟,王庆,王英英,李莹莹,尹纪元,常藕琴,石存斌. 中国预防兽医学报. 2019(02)
[3]斑点叉尾鮰源致病性维氏气单胞菌的分离与生物学特性鉴定[J]. 田浪,温贵兰,张升波,杨佰启,李昌红,徐丽,林汉卿,管国丹. 中国畜牧兽医. 2018(11)
[4]草鱼源致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药物敏感性分析[J]. 高彩霞,任燕,王庆,曾伟伟,李莹莹,王英英,常藕琴,石存斌,张德锋,方珍珍. 安徽农业大学学报. 2018(03)
[5]维氏气单胞菌最新研究进展[J]. 康元环,张冬星,杨滨僮,张贺亮,孙武文,单晓枫,钱爱东. 中国人兽共患病学报. 2018(05)
[6]锦鲫致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 贾俊鹏,康元环,张冬星,陈龙,孙武文,张贺亮,崔冰冰,单晓枫,钱爱东. 中国预防兽医学报. 2018(01)
[7]罗非鱼竖鳞病病原维氏气单胞菌的分离鉴定与致病性研究[J]. 韦阳道,杨军,文衍红,司徒玲,刘霞,易弋. 中国畜牧兽医. 2016(11)
[8]52株不同淡水鱼类维氏气单胞菌耐药表型的分析[J]. 耿昕颖,葛铮,孔令聪,朱世馨,单晓枫,马红霞,高云航. 中国兽药杂志. 2015(06)
[9]草鱼2株气单胞菌的分离与鉴定[J]. 隗黎丽,王自蕊,杨竹青. 水产科学. 2013(06)
[10]白缘(鱼央)维氏气单胞菌的分离鉴定与药敏试验[J]. 杨泽晓,周亚,任冉阳,王印,姚学萍,杨水仙,汪开毓. 中国畜牧兽医. 2012(02)
硕士论文
[1]草鱼出血性疾病病原体的鉴定、致病性及免疫防治研究[D]. 曹笑楠.河南师范大学 2018
本文编号：3320197
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3320197.html
