哈维氏弧菌单克隆抗体制备及快速检测方法的开发

发布时间：2021-08-04 06:17

　　哈维氏弧菌（Vbrio harveyi）是水产养殖业中一种常见的条件致病菌,可导致多种水产养殖品种大量死亡,造成巨大的经济损失。传统的富集培养以及分子生物学检测方法操作复杂且检测时间较长,无法应用于基层单位现场检测。因此,迫切需要建立一种快速、简单的方法对V.harveyi进行监测,以便在病害暴发早期采取有效措施,减少经济损失。本课题基于单克隆抗体制备技术,开发一种快速检测V.harveyi的方法。首先,以甲醛灭活的V.harveyi作为免疫原制备用于检测的单克隆抗体。分别采用PEG融合和电融合两种方法进行细胞融合。经筛选及亚克隆后,成功获得两株可特异性分泌抗V.harveyi单克隆抗体的杂交瘤细胞4D9和2B9。将筛选获得的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔诱导腹水的产生,以蛋白G纯化腹水获得单克隆抗体,经亚型鉴定两种抗体均为IgG1。其次,制备25 nm胶体金颗粒用于纯化的单克隆抗体标记。最后,进行两种抗V.harveyi单克隆抗体的配对试验并进行免疫层析试纸条的制备。由于两种单抗亚型相同,很可能针对相同抗原决定簇,不能同时应用于夹心法制备试纸条。因此,改用一种单克隆抗体与V.hareyi多克... 

【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．２胶体金结构示意图??Ｆｉｇ．?１．２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｃｏｌｌｏｉｄａｌ?ｇｏｌｄ．??

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本文编号：3321170