草鱼IL-17A/F1的表达和分泌及相关机理研究

发布时间：2021-08-11 20:12

　　Th17细胞作为一类CD4⁺效应T细胞,以其分泌白细胞介素17（IL-17）而著名。由于Th17细胞在自身免疫、宿主防御、肠炎及肿瘤等生理或病理过程中发挥重要作用,IL-17的产生及生物学功能受到愈来愈多的重视。在哺乳动物中,IL-17可以通过诱导趋化因子募集单核细胞、树突状细胞和淋巴细胞等免疫细胞并将它们靶向到粘膜表面,同时诱导能够直接杀死入侵病原菌的抗菌肽产生,为宿主防御做出了重要贡献。相应地,鱼类IL-17的生物学功能也得到了初步鉴定,如课题组已证明草鱼IL-17A/F1可以诱导多种细胞因子的表达,特别是通过诱导CXCL8招募免疫细胞,提示草鱼IL-17A/F1发挥了类似的宿主防御功能。但是,鱼类IL-17A/F1分泌产生的特征和机制还未见报道。为此,本论文以草鱼头肾白细胞（Head Kidney Leukocytes,HKLs）为细胞模型,经IL-21、IL-6、IL-1β和TGF-β1等细胞因子处理,研究草鱼中IL-17A/F1的表达分泌特征和机制。结果显示,TGF-β1可以抑制IL-17A/F1的基因表达,而IL-21、IL-6和IL-1β均能时间依赖... 

【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 Th17细胞的起源及其重要功能
        1.1.1 辅助性T(Th)细胞简介
        1.1.2 Th17细胞的特征性细胞因子及其功能
        1.1.3 哺乳动物中诱导Th17细胞分化的关键因子
    1.2 IL-17家族成员及其免疫功能
        1.2.1 IL-17的发现
        1.2.2 IL-17的家族成员
        1.2.3 IL-17受体家族
        1.2.4 IL-17的信号转导与免疫相关功能
    1.3 硬骨鱼中Th17细胞及IL-17家族的研究进展
    1.4 本文研究意义及内容
第二章 草鱼头肾白细胞中细胞因子调节IL-17A/F1及其受体的基因表达和相关信号通路
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法与操作
        2.2.1 草鱼头肾白细胞(HKLs)的分离及培养
        2.2.2 不同细胞因子和信号通路抑制剂处理HKLs
        2.2.3 总RNA提取
        2.2.4 cDNA模板的制备
        2.2.5 实时荧光定量PCR
        2.2.6 数据统计与分析
    2.3 实验结果分析
        2.3.1 IL-21对草鱼IL-17A/F1及其受体IL-17RA、IL-17RCmRNA表达的影响和相关信号通路
        2.3.2 IL-6刺激草鱼IL-17A/F1及其受体IL-17RA、IL-17RCmRNA的表达和相关信号通路
        2.3.3 IL-1β诱导IL-17A/F1及其受体IL-17RA、IL-17RCmRNA的表达分析和相关信号通路
        2.3.4 TGF-β1抑制IL-17A/F1及其受体IL-17RA、IL-17RCmRNA的表达
    2.4 讨论
第三章 不同细胞因子的联合作用对草鱼头肾白细胞中IL-17A/F1基因表达的影响
    3.1 实验材料
    3.2 实验方法与操作
        3.2.1 草鱼头肾白细胞(HKLs)的分离及培养
        3.2.2 使用不同的细胞因子处理HKLs
        3.2.3 RNA提取及cDNA模板的制备
        3.2.4 实时荧光定量PCR
        3.2.5 数据统计与分析
    3.3 实验结果分析
        3.3.1 IL-21与IL-1β的联合作用对IL-17A/F1基因表达的影响
        3.3.2 IL-21与TGF-β1的联合作用对IL-17A/F1基因表达的影响
    3.4 讨论
第四章 不同细胞因子处理和体内外炎症条件下草鱼IL-17A/F1的分泌检测
    4.1 实验材料
        4.1.1 IL-17A/F1菌株
        4.1.2 实验中主要溶液的配制
        4.1.3 草鱼
    4.2 实验方法与操作
        4.2.1 IL-17A/F1重组蛋白的真核表达与纯化
        4.2.2 草鱼IL-17A/F1多克隆抗体的制备
        4.2.3 蛋白质免疫印迹法
        4.2.4 利用棋盘法建立草鱼IL-17A/F1竞争-抑制酶连免疫吸附实验方法
        4.2.5 草鱼头肾淋巴细胞(HKLs)的分选及培养
        4.2.6 使用不同的细胞因子处理HKLs
        4.2.7 嗜水气单胞菌的培养
        4.2.8 嗜水气单胞菌感染草鱼
        4.2.9 ELISA方法检测IL-17A/F1的分泌
        4.2.10 数据统计与分析
    4.3 实验结果分析
        4.3.1 草鱼IL-17A/F1多克隆抗体具有特异性
        4.3.2 草鱼IL-17A/F1竞争-抑制酶连免疫吸附实验方法建立
        4.3.3 不同细胞因子处理对草鱼头肾白细胞分泌IL-17A/F1的影响
        4.3.4 体内外炎症条件下草鱼IL-17A/F1的分泌
    4.4 讨论
第五章 结论与展望
致谢
参考文献
攻读硕士期间取得的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]IL-17的信号传导及功能研究[J]. 施沛青,朱书,钱友存.  中国细胞生物学学报. 2011(04)



本文编号：3336819