牙鲆性腺相关miR-200b及dazl、wt1a基因的鉴定与表达

发布时间：2021-08-12 03:37

　　牙鲆（Paralichthys olivaceus）中已有不少关于性腺发育和分化相关基因的鉴定和功能分析报道,但此类基因的挖掘多集中于这些编码基因的表达规律和功能分析,对其转录后水平调控尤其是microRNA（mi RNA）的研究鲜有报道。本实验室先前已建立了牙鲆精卵巢miRNA文库,并通过第二代测序（NGS）技术和生物信息学方法鉴定了141个成熟miRNA,筛选出一批在牙鲆雌雄性腺中差异或特异表达的miRNA。在此基础上,本研究挑选了1个表达量较高且在精卵巢中显著差异表达的mi RNA-200b,进一步采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和原位杂交技术分析了pol-miR-200b在牙鲆性腺中的表达,并克隆和鉴定了其中和生殖相关的dazl和wt1a基因,并利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法分析了温度、外源性激素对pol-miR-200b、dazl和wt1a基因表达的影响。该研究对进一步阐述miRNA-靶基因在牙鲆性腺分化和发育中的作用提供了理论基础。首先,提取牙鲆成鱼精卵巢总RNA,并采用RT-qPCR法检测了miRNA-200b在牙鲆精卵巢中的表达情况,结果表明:po... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：96 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图0-1microRNA的发生过程

封片。。量检测测 RNA，28S 条带的亮度约为 18S 条带亮度的两有或颜色较暗，证明 RNA 质量良好；用 NANOD，测得样品值在 1.8-2.0 之间，证明提取 RNA 纯度iR-200b 在不同组织中的定量表达过实时荧光定量 PCR 法检测了牙鲆 pol-miR-200b 况（图 1-1）。由图中可看出 pol-miR-200b 基因在高，约为精巢的 6 倍。

27图 1-2 牙鲆 pol-miR-200b 基因在牙鲆成鱼各组织中的定位表达Fig 1-2 Localization and expression of pol-miR-200b gene in adult fish of Japanese flounder4 讨论本实验中，通过设计颈环引物运用实时荧光定量 PCR 法检测发现：在牙鲆精卵巢中 pol-miR-200b 表达有差异，且卵巢表达量显著高于精巢。这种情况表明它在牙鲆性腺发育和分化过程中可能扮演着重要的角色。miR-200b 通过 Ascl2调控胚胎发育和肿瘤发生[89]，它参与胚胎干细胞的增殖、分化、凋亡等生物功能[90]。此外，本实验室前期已通过高通量测序并根据测序读数的丰度得出


本文编号：3337504