草鱼CRH-BP基因cDNA全长克隆与表达分析

发布时间：2021-09-01 03:11

　　草鱼促肾上腺皮质激素释放激素结合蛋白（CRH-BP）是37KDa的分泌糖蛋白,对CHR诱导的脑垂体促肾上腺皮质激素（Adernoocrtioctorpic Homrone,ACTH）的释放起到抑制作用,在动物应激、妊娠反应、精神疾病中发挥了重要作用。本研究以草鱼为材料,克隆了草鱼CRH-BP基因的全长cDNA序列,对健康草鱼的心、肝、脾、肾、头肾、脑、皮、鳃8个组织进行了组织差异表达分析,对草鱼在冷、热应激条件下脑和头肾的组织表达进行了分析。本文的主要研究结果如下：1、根据GenBank中鱼类CRH-BP基因序列的保守区设计引物,扩增出草鱼CRH-BP基因的部分序列。经克隆测序验证为草鱼CRH-BP基因的中间片段后,根据中间片段序列设计3’端和5’端特异性引物。通过RACE技术分别获得草鱼CRH-BP基因3’端和5’端序列,利用拼接技术得到CRH-BP基因全长cDNA序列。确定为目的基因后,再根据已知序列设计3"端和5’端特异性引物,分别进行3’RACE克隆和5’RACE克隆,经序列拼接获得草鱼CRH-BP基因全长cDNA序列。结果显示CRH-BP基因cDNA全长为1324bp,开放阅... 

【文章来源】：湖南农业大学湖南省

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 CRH-BP基因的研究进展
        1.1.1 促肾上腺皮质激素释放激素家族
        1.1.2 CRH-BP基因的克隆与表达
        1.1.3 CRH-BP在机体内的功能
        1.1.4 CRH-BP与鱼类应激
    1.2 鱼类应激与相关基因的研究进展
        1.2.1 应激的概念
        1.2.2 应激对鱼体的影响
        1.2.3 应激相关基因
        1.2.4 免疫增强剂
    1.3 研究目的与意义
第二章 草鱼CRH-BP基因cDNA全长克隆与序列分析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 药品及试剂
        2.1.3 主要实验仪器设备
        2.1.4 引物设计
    2.2 实验方法
        2.2.1 动物材料获得
        2.2.2 总RNA的提取
        2.2.3 草鱼CRH-BP基因cDNA中间片段的扩增
        2.2.4 草鱼CRH-BP基因部分片段克隆
        2.2.5 CRH-BP 3'端和5'端片段扩增
        2.2.6 CRH-BP 3'端和5'端克隆、测序
        2.2.7 草鱼CRH-BP基因全长cDNA序列拼接及分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 总RNA提取
        2.3.2 PCR扩增结果
        2.3.3 CRH-BP基因序列分析
        2.3.4 草鱼CRH-BP氨基酸序列分析
    2.4 讨论
第三章 草鱼CRH-BP基因组织表达
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 药品及试剂
        3.1.3 仪器设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 引物设计
        3.2.2 应激处理
        3.2.3 RNA提取
        3.2.4 半定量RT-PCR
        3.2.5 荧光定量PCR
    3.3 结果与分析
        3.3.1 RT-PCR测定正常情况下草鱼各组织CRH-BP基因表达量
        3.3.2 劳光定量PCR检测应激情况下草鱼CRH-BP的表达情况
    3.4 讨论
结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3376167