日本蟳精子获取和超低温冷冻保存技术研究
发布时间：2021-09-02 19:29
本文比较了胰酶消化法、网搓法和机械研磨法3种方法对获得游离日本蟳精子的效果。对获得的精子进行超低温冷冻保存,用曙红Y进行染色,检测精子的存活率。使用7种不同稀释液、不同浓度的二甲基亚砜（DMSO）、甘油（GLY）、1,2-丙二醇（PG）为抗冻保护剂,在6种不同的降温程序下,对日本蟳精子进行超低温冷冻保存,后在不同的温度下解冻复苏精子。实验结果表明:3种精子获取方法中以搓洗法的实验效果最好,胰酶消化法的效果次之,最差的是机械研磨法。其中搓洗法中以500目的筛绢效果最好,精子密度达2.56×1013个/mL。日本蟳精子冷冻保存实验结果表明,稀释液以去钙人工海水、抗冻保护剂以5%DMSO、平衡时间20 min、降温程序P-1（0℃平衡20 min;-5℃/min降至-80℃;-80℃平衡5 min;-20℃/min降至-180℃;然后置于液氮中保存）,水浴解冻37.5℃的效果最好,精子存活率最高。
【文章来源】：中国海洋大学学报(自然科学版). 2020,50(08)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
不同平衡时间对日本蟳精子超低温冷冻保存的存活率
如图4所示,程序1的冷冻保存效果最好,达84.53%;其次为程序3、程序2,精子的存活率分别为83.13%、82.41%。效果最差的是程序4,存活率仅为63.23%,其次是程序5、程序6,精子存活率为64.77%、66.88%。实验结果表明,在精子超低温冷冻保存中,在0～-80℃的降温过程中需要一个缓冲的时间段。2.2.5 复苏条件对日本蟳精子超低温冷冻保存的影响
如图5所示,不同复苏条件下,冻精存活率效果最好的是水浴37.5 ℃,精子存活率可达87.83%,其次是35 ℃水浴解冻,存活率85.45%。40和30 ℃的效果较接近,分别为82.12%、80.22%。效果最差的是24 ℃室温条件下的解冻,存活率为78.20%。3 讨论
【参考文献】：
期刊论文
[1]6种蟹类DNA条形码鉴定技术研究[J]. 王娜泠,胡则辉,卞光明,王跃斌,胡成硕,柴学军. 安徽农业科学. 2017(26)
[2]3种对虾精子超低温冷冻保存技术研究[J]. 王文琪,杨敬昆,徐世宏,刘清华,李军. 海洋科学. 2017(09)
[3]5种蟹类线粒体Cyt b基因序列分析及其系统发育[J]. 王娜泠,胡则辉,卞光明,柴学军. 浙江海洋大学学报(自然科学版). 2017(04)
[4]凡纳滨对虾精液制备及精子质量评价的初步研究[J]. 张彬,韦嫔媛,熊建华,陈晓汉,赵永贞,谢达祥. 西南农业学报. 2014(06)
[5]中国沿海日本蟳地理群体的形态学变异研究[J]. 郑伟,贾翠华,韩志强. 浙江海洋学院学报(自然科学版). 2013(06)
[6]南美白对虾精子超低温冷冻保存技术研究[J]. 杨春玲,赵永贞,陈秀荔,李咏梅,彭敏,杨彦豪,何苹萍,陈晓汉. 南方农业学报. 2013(08)
[7]中国沿海日本蟳4个地理群体的形态差异比较分析[J]. 丁金强,刘萍,李健,王清印,高保全,陈萍. 中国水产科学. 2012(04)
[8]日本蟳精子超低温冷冻保存技术的研究[J]. 许星鸿,阎斌伦,徐加涛,徐国成,浦寅芳,许建和. 水产科学. 2010(10)
[9]日本蟳人工育苗技术研究[J]. 许星鸿,徐加涛,阎斌伦,徐国成,赵新生. 黑龙江水产. 2009(05)
[10]几种化学因子对白缘鱼央精子活力的影响[J]. 柴毅,李罗新,张彦宁,陈丽. 长江大学学报(自然科学版)农学卷. 2009(02)
硕士论文
[1]凡纳滨对虾精巢组织细胞的培养及精荚低温保存方法的建立[D]. 赵晶.广西大学 2014
[2]中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）精子低温保存的研究[D]. 陈东华.华东师范大学 2006
本文编号：3379596
【文章来源】：中国海洋大学学报(自然科学版). 2020,50(08)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
不同平衡时间对日本蟳精子超低温冷冻保存的存活率
如图4所示,程序1的冷冻保存效果最好,达84.53%;其次为程序3、程序2,精子的存活率分别为83.13%、82.41%。效果最差的是程序4,存活率仅为63.23%,其次是程序5、程序6,精子存活率为64.77%、66.88%。实验结果表明,在精子超低温冷冻保存中,在0～-80℃的降温过程中需要一个缓冲的时间段。2.2.5 复苏条件对日本蟳精子超低温冷冻保存的影响
如图5所示,不同复苏条件下,冻精存活率效果最好的是水浴37.5 ℃,精子存活率可达87.83%,其次是35 ℃水浴解冻,存活率85.45%。40和30 ℃的效果较接近,分别为82.12%、80.22%。效果最差的是24 ℃室温条件下的解冻,存活率为78.20%。3 讨论
【参考文献】：
期刊论文
[1]6种蟹类DNA条形码鉴定技术研究[J]. 王娜泠,胡则辉,卞光明,王跃斌,胡成硕,柴学军. 安徽农业科学. 2017(26)
[2]3种对虾精子超低温冷冻保存技术研究[J]. 王文琪,杨敬昆,徐世宏,刘清华,李军. 海洋科学. 2017(09)
[3]5种蟹类线粒体Cyt b基因序列分析及其系统发育[J]. 王娜泠,胡则辉,卞光明,柴学军. 浙江海洋大学学报(自然科学版). 2017(04)
[4]凡纳滨对虾精液制备及精子质量评价的初步研究[J]. 张彬,韦嫔媛,熊建华,陈晓汉,赵永贞,谢达祥. 西南农业学报. 2014(06)
[5]中国沿海日本蟳地理群体的形态学变异研究[J]. 郑伟,贾翠华,韩志强. 浙江海洋学院学报(自然科学版). 2013(06)
[6]南美白对虾精子超低温冷冻保存技术研究[J]. 杨春玲,赵永贞,陈秀荔,李咏梅,彭敏,杨彦豪,何苹萍,陈晓汉. 南方农业学报. 2013(08)
[7]中国沿海日本蟳4个地理群体的形态差异比较分析[J]. 丁金强,刘萍,李健,王清印,高保全,陈萍. 中国水产科学. 2012(04)
[8]日本蟳精子超低温冷冻保存技术的研究[J]. 许星鸿,阎斌伦,徐加涛,徐国成,浦寅芳,许建和. 水产科学. 2010(10)
[9]日本蟳人工育苗技术研究[J]. 许星鸿,徐加涛,阎斌伦,徐国成,赵新生. 黑龙江水产. 2009(05)
[10]几种化学因子对白缘鱼央精子活力的影响[J]. 柴毅,李罗新,张彦宁,陈丽. 长江大学学报(自然科学版)农学卷. 2009(02)
硕士论文
[1]凡纳滨对虾精巢组织细胞的培养及精荚低温保存方法的建立[D]. 赵晶.广西大学 2014
[2]中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）精子低温保存的研究[D]. 陈东华.华东师范大学 2006
本文编号：3379596
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