迟缓爱德华氏菌EsaB/EsaL/EsaM调控Ⅲ型分泌系统输送器蛋白和效应分子的分泌
发布时间：2021-09-19 19:11
迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）是一类感染宿主范围广泛的革兰氏阴性致病菌,引起鱼类的爱德华氏菌病,对水产养殖业造成严重经济损失。Ⅲ型分泌系统（Type Ⅲ secretion system,T3SS）是细菌重要的毒力因子分泌系统,细菌通过Ⅲ型分泌系统将毒力蛋白直接输入宿主细胞,干扰正常的细胞活动,促进细菌在细胞内复制和繁殖。本研究以迟缓爱德华氏菌Ⅲ型分泌系统调控蛋白EsaB/EsaL/EsaM为研究对象,围绕EsaL如何控制Ⅲ型分泌系统底物分泌展开研究,为阐明迟缓爱德华氏菌Ⅲ型分泌系统的分子致病机理及研制弱毒疫苗奠定基础。研究发现EsaL不是Ⅲ型分泌系统的分泌蛋白,其主要分布于细菌膜相。esaL缺失后,输送器蛋白EseB/EseC/EseD分泌显著减少,说明EsaL促进输送器蛋白分泌。改变环境条件,如Ca2+浓度和pH,不影响EsaL对输送器蛋白分泌的促进作用。然而,EsaL对效应分子分泌的控制作用随环境因子改变而变化:当Ca2+浓度增高或降低时,EsaL不影响效应分子的分泌;当pH为酸性条件时,EsaL促进效应分子分泌,中性条件下则不影响效应分子的分泌。报道显示...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
迟缓爱德华氏菌感染过程示意图：1-4阶段，胃肠炎；1-6阶段，肠外感染（引自Leungetal2012）
锚定于外膜的蛋白 SctC 和锚定于内膜的蛋白 SctD、SctJ 在(neck)接合(Marlovits et al 2004, Schraidt and Marlovits 2011)。SctC 形同的外环(outer ring, OR1 and OR2)；内环也有两个，SctD 和 SctJ 构环(inner ring, IR1)，SctD 胞质氨基端构成最内部环状结构(IR2) (Marll 2004)。SctC 与 II 型分泌系统分泌素(secretin)具有同源性(Michiels et al niga et al 1994)，和分泌素家族其他成员类似，SctC 也需要脂蛋白(lipopro助以正确定位和装配(Crago and Koronakis 1998, Daefler and Russel 1rghout et al 2004)。SctD 和 SctJ 构成内膜环状结构(Marlovits et al 2004)自依靠一个跨膜螺旋锚定在膜上，此外，SctJ 脂化的氨基端也帮助其膜(Yip et al 2005)。位于基体中心的环状内腔结构(inner rod)由 SctI 蛋Marlovits et al 2004)，此结构为突出细胞外的针状纤维(needle filament)作用。
迟缓爱德华氏菌 EsaB/EsaL/EsaM 调控 III 型分泌系统输送器蛋白和效应分子的分泌 PBS 洗涤后重悬于 Reagent 3 (Bio-Rad)。细胞质相用三氯乙酸-丙酮集蛋白，重悬于 Reagent 3。膜相和质相蛋白经 Bradford 法测定浓度等量蛋白”取样、进行 Western Blot。结果与分析 ΔesaL 缺失 EsaL 的 40-366 位氨基酸在 esaL 侧翼序列设计引物扩得 esaL-check 片段长 941 bp，如图 2.1 所选取 2-3 个克隆测序。Blast 序列比对结果表明 ΔesaL 缺失 118-1098 40-366 位氨基酸。ΔesaL 是正确合框的突变株。
本文编号：3402175
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
迟缓爱德华氏菌感染过程示意图：1-4阶段，胃肠炎；1-6阶段，肠外感染（引自Leungetal2012）
锚定于外膜的蛋白 SctC 和锚定于内膜的蛋白 SctD、SctJ 在(neck)接合(Marlovits et al 2004, Schraidt and Marlovits 2011)。SctC 形同的外环(outer ring, OR1 and OR2)；内环也有两个，SctD 和 SctJ 构环(inner ring, IR1)，SctD 胞质氨基端构成最内部环状结构(IR2) (Marll 2004)。SctC 与 II 型分泌系统分泌素(secretin)具有同源性(Michiels et al niga et al 1994)，和分泌素家族其他成员类似，SctC 也需要脂蛋白(lipopro助以正确定位和装配(Crago and Koronakis 1998, Daefler and Russel 1rghout et al 2004)。SctD 和 SctJ 构成内膜环状结构(Marlovits et al 2004)自依靠一个跨膜螺旋锚定在膜上，此外，SctJ 脂化的氨基端也帮助其膜(Yip et al 2005)。位于基体中心的环状内腔结构(inner rod)由 SctI 蛋Marlovits et al 2004)，此结构为突出细胞外的针状纤维(needle filament)作用。
迟缓爱德华氏菌 EsaB/EsaL/EsaM 调控 III 型分泌系统输送器蛋白和效应分子的分泌 PBS 洗涤后重悬于 Reagent 3 (Bio-Rad)。细胞质相用三氯乙酸-丙酮集蛋白，重悬于 Reagent 3。膜相和质相蛋白经 Bradford 法测定浓度等量蛋白”取样、进行 Western Blot。结果与分析 ΔesaL 缺失 EsaL 的 40-366 位氨基酸在 esaL 侧翼序列设计引物扩得 esaL-check 片段长 941 bp，如图 2.1 所选取 2-3 个克隆测序。Blast 序列比对结果表明 ΔesaL 缺失 118-1098 40-366 位氨基酸。ΔesaL 是正确合框的突变株。
本文编号：3402175
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