实验用斑马鱼常见病菌的分离检测及其致病性研究

发布时间：2021-10-06 18:15

　　斑马鱼（Danio rerio, Zebrafish）又称蓝条鱼、花条鱼等,原产于南亚,是一种常见的热带观赏鱼。近年来,随着现代生命科技的不断深入研究,斑马鱼作为一种新型的脊椎动物模式生物,被广泛地应用于发育遗传学、环境毒理学及人类疾病模型与新药筛选等生命科学相关领域,但其在细菌质量控制方面与小鼠等法规标准化的实验动物仍存在较大差距。在实验室人工饲养条件下,病原菌是干扰斑马鱼健康状态的重要病原,为了有效的预防与控制细菌性病原对斑马鱼健康状态的干扰,以确保其用于科学实验的质量,如何建立快速准确的病原菌检测方法己成为了实验用斑马鱼研究与应用的重要课题之一。本研究以本实验室（上海实验动物研究中心斑马鱼实验室）自然发病且具有典型病症的成年斑马鱼作为实验研究样本,并以该实验室健康斑马鱼以及选自上海南方模式研究中心、上海万商花鸟市场水族馆的健康成鱼作为实验对照,从病鱼病灶组织及对照组相应组织部位病原菌并进行纯培养后,共获得8种优势菌株,并先后采用了形态观察、生化鉴定及PCR筛选的方法对所分离得到的8种细菌进行了结果分析,得出结论1-8菌分别对应为：假单胞菌属、弧菌属、温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、类... 

【文章来源】：东华大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 前言
    1.2 斑马鱼概述及其实验动物化进程
        1.2.1 形态特征
        1.2.2 习性与生长
        1.2.3 斑马鱼的研究起源与发展
        1.2.4 斑马鱼作为模式生物的优势
    1.3 斑马鱼常见疾病的研究进展
        1.3.1 寄生虫疾病
        1.3.2 病毒性疾病
        1.3.3 细菌性疾病
    1.4 实验用斑马鱼的细菌质量控制
        1.4.1 实验用斑马鱼的细菌学监测
        1.4.2 实验用斑马鱼常见病原菌监测项目
        1.4.3 实验用斑马鱼细菌检测流程
        1.4.4 实验用斑马鱼细菌检测中的生物安全控制与预防
    1.5 鱼类细菌性疾病的检测方法概述
        1.5.1 传统检测技术
        1.5.2 免疫学检测技术
        1.5.3 微量多项试验鉴定系统
        1.5.4 分子生物学检测技术
    1.6 鱼类疾病的诊断研究方法
        1.6.1 疾病的观察诊断
        1.6.2 病原菌分离鉴定
        1.6.3 组织病理学研究
    1.7 本课题的研究内容及目的与意义
        1.7.1 研究内容
        1.7.2 目的与意义
第二章 自然条件下发病斑马鱼的细菌性病原分离与鉴定
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 主要实验试剂
        2.2.3 主要实验仪器与设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 实验整体技术路线框架图
        2.3.2 病原菌的分离培养
        2.3.3 菌落的形态观察及生化鉴定
        2.3.4 细菌的PCR筛选鉴定
        2.3.5 人工感染预实验及致病性初判
    2.4 实验结果
        2.4.1 菌落形态特征
        2.4.2 菌落生化鉴定结果
        2.4.3 细菌PCR筛选结果
        2.4.4 病原菌致病性预实验结果
    2.5 小结与讨论
第三章 致病性嗜水气单胞菌感染斑马鱼的毒力特性及组织病理学研究
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验动物
        3.2.2 主要实验试剂
        3.2.3 主要实验仪器与设备
    3.3 实验方法
        3.3.1 嗜水气单胞菌特异性引物设计及PCR扩增
        3.3.2 PCR产物回收及测序
        3.3.3 嗜水气单胞菌致病性实验
        3.3.4 组织切片的制作与观察
        3.3.5 致病菌回归感染实验
    3.4 实验结果
        3.4.1 嗜水气单胞菌特异性基因扩增结果
        3.4.2 PCR产物测序结果及同源性分析
        3.4.3 平板计数结果
        3.4.4 人工感染实验结果
        3.4.5 组织病理学观察结果分析
        3.4.6 致病菌回归感染实验结果分析
    3.5 小结与讨论
第四章 结论与展望
参考文献
课题来源
致谢
攻读硕士期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
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[2]中国斑马鱼研究发展历程及现状[J]. 贾顺姬,孟安明.  遗传. 2012(09)
[3]实验用鱼遗传质量控制及标准化[J]. 孙德明,王天奇,朱晓红,殷昆仑,岳秉飞,崔宗斌,孙荣泽,张博.  遗传. 2012(09)
[4]集约化养殖常见细菌性鱼病及预防[J]. 戴良,张誉瀚.  黑龙江水产. 2012(03)
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[6]鱼类疾病的检查、诊断方法[J]. 何洪船.  渔业致富指南. 2012(03)
[7]刺激隐核虫病[J]. 陈爱平,江育林,钱冬,陈昌福,李安兴,黄捷,杨冰.  中国水产. 2011(08)
[8]实验动物细菌检测中的生物安全控制与预防[J]. 钟女奇,赵勇,洪迅,黄芝瑛.  实验动物科学. 2011(03)
[9]鱼赤皮病的防治[J]. 王桂香.  农家参谋. 2011(05)
[10]鱼类细菌性烂鳃病的防治技术[J]. 祁保霞,武迎红.  畜牧兽医科技信息. 2011(02)



本文编号：3420511