注射和浸泡免疫疫苗后牙鲆免疫相关基因表达的变化研究

发布时间：2021-10-09 18:56

　　免疫接种疫苗是防治鱼类细菌性、病毒性疾病的有效方法。目前，疫苗免疫方式主要以注射、浸泡等方法为主，对于免疫效果的评价则除了通过鱼类血清及黏液抗体水平变化、酶（超氧化物歧化酶、溶菌酶、碱性磷酸酶等）活、淋巴细胞数量、吞噬作用、补体活性等指标来判定外，从基因水平对疫苗免疫效果进行研究也越来越受到关注。本论文利用实验室保存的鳗弧菌（Vibrio anguillarum）菌种，制备了福尔马林全菌灭活疫苗，采用注射和浸泡两种方式分别免疫牙鲆，应用实时荧光定量PCR法检测了免疫后牙鲆17种免疫相关基因表达的变化。论文主要内容如下：实验将健康牙鲆分为四组，每组60尾，第一组浸泡于浓度为1×108CFU/mL灭活疫苗菌液中，连续充气浸泡30min；第二组浸泡于海水中30min，作为浸泡组对照；第三组腹腔注射浓度为1×108CFU/mL的鳗弧菌灭活疫苗，每尾0.1mL；第四组腹腔注射0.1mLPBS，作为注射组对照。于免疫后0h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、96h、7d、14d十个时间点取样，每组取5尾，分别剪取牙鲆脾脏、头肾和鳃3种组织，提取总mRNA并反转录为cDNA，Primer ... 

【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 渔用疫苗及其应用
        1.1.1 渔用疫苗的类型
        1.1.2 渔用疫苗的接种方式
        1.1.3 疫苗免疫效果的评价机制
    1.2 鱼类免疫相关基因
        1.2.1 Toll 样受体（TLRs）及其信号通路
        1.2.2 细胞因子
        1.2.3 主要组织相容性复合体（MHC）
        1.2.4 T 细胞表面标志
        1.2.5 免疫球蛋白（Ig）
        1.2.6 其他免疫相关分子
    1.3 本研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 试剂与仪器
        2.1.2 实验动物
    2.2 实验方法
        2.2.1 鳗弧菌全菌灭活疫苗的制备
        2.2.2 牙鲆的免疫及取样
        2.2.3 总 RNA 的提取及质量检测
        2.2.4 cDNA 第一链的合成
        2.2.5 荧光定量 PCR 所用引物的设计与验证
        2.2.6 荧光定量 PCR 检测
        2.2.7 数据处理及分析
3 结果
    3.1 荧光定量 PCR 所用引物的获得
    3.2 TLR2 在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.3 TLR5M 在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.4 MyD88 在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.5 NF-κB 在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.6 IL-1β在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.7 TNF α在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.8 IL-6 在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.9 IFNγ在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.10 CXC 在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.11 MHCⅠ在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.12 MHCⅡ在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.13 CD4 在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.14 CD8 在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.15 IgM 在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.16 C3 在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.17 c 型溶菌酶在脾脏、头肾和鳃中的表达
    3.18 HSP70 在脾脏、头肾和鳃中的表达
4 讨论
    4.1 TLR 信号通路 4 种基因的表达分析
    4.2 细胞因子类相关基因的表达分析
    4.3 细胞表面分子相关基因的表达分析
    4.4 免疫球蛋白 IgM 基因的表达分析
    4.5 补体 C3 基因的表达分析
    4.6 其他免疫相关基因的表达分析
5 总结
参考文献
致谢
个人简历
硕士期间发表文章


【参考文献】：
期刊论文
[1]疫苗在水产养殖病害防治中的作用及应用前景(连载一)[J]. 王玉堂.  中国水产. 2013(03)
[2]水产口服疫苗研究进展[J]. 黄钧,施金谷,陈明,黄艳华.  广西畜牧兽医. 2013(01)
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[4]斜带石斑鱼浸泡免疫哈维氏弧菌灭活疫苗后MHC-Ⅱ类分子的表达变化[J]. 王庆,吴光辉,巩华,刘永奎,刘春,石存斌,吴淑勤.  广东农业科学. 2010(12)
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[6]鱼类免疫球蛋白的研究进展[J]. 侯月娥,冯娟,杨清华,于博,宁章勇,孔小明.  黑龙江畜牧兽医. 2010(17)
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博士论文
[1]半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）TLR9及其信号传导相关基因的克隆与表达[D]. 于燕.中国海洋大学 2009

硕士论文
[1]鲤鱼MyD88基因的分子克隆及功能的初步研究[D]. 郑琳琳.山东师范大学 2010
[2]MHC-Ⅱ类分子在鲤鱼黏膜免疫中的作用[D]. 张彦.山东师范大学 2010
[3]海豚链球菌（Streptococcus iniae）疫苗对淡、海水养殖鱼类的保护性试验[D]. 张生.西南大学 2007



本文编号：3426830