大黄鱼follistatin基因时空表达分析

发布时间：2021-10-12 00:48

　　卵泡抑素（Follistatin，Fst）为首先分离于哺乳动物卵泡液中的糖基化单链多肽，可以通过与activin蛋白的结合抑制促卵泡激素（follicle stimulating hormone，FSH）的分泌。卵泡抑素不仅可以阻碍activin蛋白的作用，还能降低包括myostatin（MSTN）、GDF-9、bone morphogenetic proteins （BMPs）在内的其它TGF-β家族成员功能的发挥。通过与这些TGF-β家族成员的结合，卵泡抑素广泛参与了生物体多种生理功能的调控，包括繁殖、生长发育、神经诱导、渗透压调节、肌细胞生成和免疫调节。作为一个编码多功能调控蛋白的基因，fst在多种高等脊椎动物中得到了发现，并被证实广泛表达于生物体的各个组织。然而，报道鱼类fst基因结构、表达模式及功能的研究至今仍然有限。为了进一步研究fst基因在硬骨鱼体内发挥的作用，我们使用Real-Time PCR技术分析和检测了不同发育阶段及性别大黄鱼fst基因的表达，以及大黄鱼幼鱼不同饥饿及再投喂阶段各组织fst基因的表达。研究结果表明，fst基因在大黄鱼胚胎发育的原肠胚期（9h pos... 

【文章来源】：宁波大学浙江省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 综述
    1.1 fst 基因的发现及分子结构
    1.2 fst 基因生物学作用的研究
        1.2.1 fst 基因作用的分子生物学机制
        1.2.2 fst 基因的各种生物学功能
    1.3 fst 基因在硬骨鱼类中的进化
        1.3.1 硬骨鱼进化树分析中两类 fst 基因的发现
        1.3.2 硬骨鱼 fst 基因染色体定位与进化机制
        1.3.3 硬骨鱼两类 fst 基因的不均等进化
    1.4 fst 基因表达情况的研究
        1.4.1 fst 基因的表达与疾病的关系
        1.4.2 fst 基因在鱼类体内的表达
            1.4.2.1 fst 基因在斑马鱼和大西洋鲑鱼体内的表达差异分析
            1.4.2.2 fst 基因在斑马鱼和大西洋鲑鱼胚胎发育时期的表达
            1.4.2.3 fst 基因在不同肌肉组织中表达的研究
    1.5 fst 基因与 MSTN 基因间的关系及其在水产养殖业中的应用
2 大黄鱼个体发育早期阶段 fst 基因的表达
    2.1 前言
    2.2 样品采集与实验设计
    2.3 主要试剂
        2.3.1 RNA 操作相关试剂
        2.3.2 分子克隆相关试剂
        2.3.3 普通 PCR 及 Real-time PCR 扩增相关试剂
    2.4 实验方法
        2.4.1 总 RNA 的提取
            2.4.1.1 总 RNA 抽提注意事项
            2.4.1.2 总 RNA 抽提方法
            2.4.1.3 总 RNA 去除 DNA 污染
            2.4.1.4 总 RNA 完整性的检测
            2.4.1.5 总 RNA 浓度、纯度的检测
        2.4.2 cDNA 第一链的合成
        2.4.3 β-actin 及 fst 基因的定量引物设计
        2.4.4 标准质粒的构建
            2.4.4.1 β-actin 及 fst 基因普通 PCR 的扩增和检测
            2.4.4.2 普通 PCR 产物回收与纯化
            2.4.4.3 感受态细胞的制备
            2.4.4.4 β-actin 及 fst 基因 PCR 产物与载体的连接
            2.4.4.5 转化和阳性克隆的筛选
            2.4.4.6 测序
            2.4.4.7 β-actin 及 fst 基因重组质粒提取
            2.4.4.8 β-actin 及 fst 基因重组质粒质粒浓度检测及稀释
        2.4.5 Real-time PCR 扩增
        2.4.6 数据处理
    2.5 实验结果
        2.5.1 RNA 的提取
        2.5.2 标准质粒的构建
            2.5.2.1 标准质粒的检测
            2.5.2.2 标准质粒浓度检测及稀释
        2.5.3 Real-time PCR 标准曲线的构建
            2.5.3.1 通过 Real-time PCR 检测 10 倍梯度稀释的标准质粒
            2.5.3.2 β-actin 基因及 fst 基因标准曲线扩增效率一致性检测
        2.5.4 大黄鱼个体发育早期阶段 fst 基因的表达
    2.6 讨论
3 大黄鱼 fst 基因组织特异性表达
    3.1 前言
    3.2 样品采集与实验设计
    3.3 主要试剂
        3.3.1 RNA 操作相关试剂
        3.3.2 普通 PCR 及 Real-time PCR 扩增相关试剂
    3.4 实验方法
        3.4.1 总 RNA 的提取
        3.4.2 cDNA 第一链的合成
        3.4.3 β-actin 及 fst 基因的定量引物设计
        3.4.4 Real-time PCR 扩增
        3.4.5 数据处理
    3.5 实验结果
        3.5.1 不同年龄大黄鱼 fst 基因组织特异性表达
        3.5.2 不同性别大黄鱼 fst 基因组织特异性表达
    3.6 讨论
4 大黄鱼不同饥饿阶段 fst 基因的组织表达
    4.1 前言
    4.2 样品采集与实验设计
    4.3 主要试剂
        4.3.1 RNA 操作相关试剂
        4.3.2 普通 PCR 及 Real-time PCR 扩增相关试剂
    4.4 实验方法
        4.4.1 总 RNA 的提取
        4.4.2 cDNA 第一链的合成
        4.4.3 β-actin 及 fst 基因的定量引物设计
        4.4.4 Real-time PCR 扩增
        4.4.5 数据处理
    4.5 实验结果
        4.5.1 不同饥饿阶段脑组织 fst 基因表达
        4.5.2 不同饥饿阶段心组织 fst 基因表达
        4.5.3 不同饥饿阶段肝组织 fst 基因表达
        4.5.4 不同饥饿阶段肾组织 fst 基因表达
        4.5.5 不同饥饿阶段脾组织 fst 基因表达
        4.5.6 不同饥饿阶段肌肉组织 fst 基因表达
        4.5.7 不同饥饿阶段性腺组织 fst 基因表达
        4.5.8 不同饥饿阶段鳃组织 fst 基因表达
        4.5.9 不同饥饿阶段眼组织 fst 基因表达
        4.5.10 不同饥饿阶段肠组织 fst 基因表达
    4.6 讨论
5 结论
参考文献
在学研究成果
致谢



本文编号：3431562