尼罗罗非鱼的Galectin-8基因的原核表达及条件优化
发布时间：2021-10-18 08:32
Galectin-8属于S型凝集素,是一种内源性凝集素,具有高亲力,含β-半乳糖苷,可识别重要的病原分子[1]。该蛋白质有2个功能结构域,均提供该家族中其他蛋白质类似的保守序列[2]。该研究基于尼罗罗非鱼Galectin-8 NCBI上发表的基因序列,利用primer5.0设计1对引物,构建尼罗罗非鱼Galectin-8基因的原核表达载体,将重组后的质粒pGEX-4T-1-Galectin-8导入大肠杆菌中,通过PCR、连接、转化等,进行原核表达。对影响因素进行条件优化,使用优化后的浓度、时间、温度条件表达Galectin-8重组蛋白能得到最优表达量。Western blot检测纯化后的重组蛋白,结果显示,重组蛋白可以很好地结合GST-Tag标签的单克隆抗体,实验进一步证明罗非鱼Galectin-8的重组蛋白被成功表达,为罗非鱼Galectin-8后续相关功能的研究奠定了基础。
【文章来源】：安徽农学通报. 2020,26(05)
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
Galectin-8基因克隆
重组Galectin-8的质粒BamHI和XhoI酶切，在891bp处有1条大小接近的条带，与pGEX-4T载体在4969bp处有1条大小一致的条带，且插入的片段测序比对后同样显示是Galectin-8，表明pGEX-4T-Galectin-8被成功构建成原核表达载体。2.3 大肠杆菌的诱导表达
只有诱导的菌株在59kD的位置有条带，未诱导的对照组则无此条带（图3）。GST标签的PGEX-4T-1空载体大小是26kD，而Galectin-8预测的蛋白分子量为33kD，重组后的蛋白大小为59kD，该分子量与实验结果一致，从而证明重组Galectin-8蛋白表达成功。2.4 大肠杆菌诱导表达条件优化
【参考文献】：
期刊论文
[1]尼罗罗非鱼TGF-β1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 余艳玲,冯鹏霏,潘传燕,陈晓汉,林勇,张永德,罗洪林. 江苏农业学报. 2019(06)
[2]尼罗罗非鱼PPARδ的原核表达及其多抗制备和纯化[J]. 潘传燕,冯鹏霏,张永德,罗洪林. 福建农业学报. 2019(09)
[3]尼罗罗非鱼补体3基因片段的原核表达及条件优化[J]. 牛金中,黄瑜,汤菊芬,鲁义善,汪志文,郑琦,蔡佳,简纪常. 广东海洋大学学报. 2018(02)
[4]大弹涂鱼（Boleophthalmus pectinirostris）Gal-8L基因序列及其细菌凝集活性的鉴定[J]. 梁亚芳,史雨红,苗亮,陈炯. 海洋与湖沼. 2018(02)
[5]罗非鱼常见疾病及防治[J]. 黄纪兵,肖鹤. 科学养鱼. 2017(10)
[6]尼罗罗非鱼NCCRP-1基因的原核表达及条件优化[J]. 黄瑜,牛金中,汤菊芬,鲁义善,汪志文,郑琦,蔡佳,简纪常. 基因组学与应用生物学. 2018(09)
[7]罗非鱼源无乳链球菌灭活疫苗免疫效果的研究[J]. 朱洁莲,高婷婷,钟孝俊,刘广锦,姚火春. 中国兽医科学. 2017(05)
[8]魁蚶（Scapharca broughtonii）半乳糖凝集素（SbGal）基因cDNA的克隆及表达分析[J]. 郑利兵,吴彪,刘志鸿,周丽青,孙秀俊,田吉腾,杨爱国,郑言鑫. 海洋与湖沼. 2015(05)
[9]galectin-3在子宫内膜病变中表达的研究[J]. 张岩,佟盛春,王永来,赵润秋. 中国医科大学学报. 2008(05)
[10]半乳糖凝集素-1的融合克隆及纯化[J]. 王晓辉,张浩,杨智洪,叶棋浓. 生物技术通讯. 2008(01)
硕士论文
[1]血浆半乳糖凝集素-3水平与多囊卵巢综合征中慢性炎症和胰岛素抵抗的相关性研究[D]. 吴锐.重庆医科大学 2018
[2]Galectin-4表达失调与肝细胞癌发生发展及相关分子机制初步研究[D]. 陈灿灿.福建医科大学 2017
[3]无乳链球菌和海豚链球菌灭活疫苗对罗非鱼的免疫效果[D]. 付天增.山东农业大学 2017
[4]罗非鱼源无乳链球菌嵌合型亚单位疫苗与DNA疫苗的研制及免疫效果评价[D]. 李桂欢.广东海洋大学 2014
[5]中国罗非鱼出口贸易国际竞争力研究[D]. 王斌.江南大学 2011
本文编号：3442531
【文章来源】：安徽农学通报. 2020,26(05)
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
Galectin-8基因克隆
重组Galectin-8的质粒BamHI和XhoI酶切，在891bp处有1条大小接近的条带，与pGEX-4T载体在4969bp处有1条大小一致的条带，且插入的片段测序比对后同样显示是Galectin-8，表明pGEX-4T-Galectin-8被成功构建成原核表达载体。2.3 大肠杆菌的诱导表达
只有诱导的菌株在59kD的位置有条带，未诱导的对照组则无此条带（图3）。GST标签的PGEX-4T-1空载体大小是26kD，而Galectin-8预测的蛋白分子量为33kD，重组后的蛋白大小为59kD，该分子量与实验结果一致，从而证明重组Galectin-8蛋白表达成功。2.4 大肠杆菌诱导表达条件优化
【参考文献】：
期刊论文
[1]尼罗罗非鱼TGF-β1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 余艳玲,冯鹏霏,潘传燕,陈晓汉,林勇,张永德,罗洪林. 江苏农业学报. 2019(06)
[2]尼罗罗非鱼PPARδ的原核表达及其多抗制备和纯化[J]. 潘传燕,冯鹏霏,张永德,罗洪林. 福建农业学报. 2019(09)
[3]尼罗罗非鱼补体3基因片段的原核表达及条件优化[J]. 牛金中,黄瑜,汤菊芬,鲁义善,汪志文,郑琦,蔡佳,简纪常. 广东海洋大学学报. 2018(02)
[4]大弹涂鱼（Boleophthalmus pectinirostris）Gal-8L基因序列及其细菌凝集活性的鉴定[J]. 梁亚芳,史雨红,苗亮,陈炯. 海洋与湖沼. 2018(02)
[5]罗非鱼常见疾病及防治[J]. 黄纪兵,肖鹤. 科学养鱼. 2017(10)
[6]尼罗罗非鱼NCCRP-1基因的原核表达及条件优化[J]. 黄瑜,牛金中,汤菊芬,鲁义善,汪志文,郑琦,蔡佳,简纪常. 基因组学与应用生物学. 2018(09)
[7]罗非鱼源无乳链球菌灭活疫苗免疫效果的研究[J]. 朱洁莲,高婷婷,钟孝俊,刘广锦,姚火春. 中国兽医科学. 2017(05)
[8]魁蚶（Scapharca broughtonii）半乳糖凝集素（SbGal）基因cDNA的克隆及表达分析[J]. 郑利兵,吴彪,刘志鸿,周丽青,孙秀俊,田吉腾,杨爱国,郑言鑫. 海洋与湖沼. 2015(05)
[9]galectin-3在子宫内膜病变中表达的研究[J]. 张岩,佟盛春,王永来,赵润秋. 中国医科大学学报. 2008(05)
[10]半乳糖凝集素-1的融合克隆及纯化[J]. 王晓辉,张浩,杨智洪,叶棋浓. 生物技术通讯. 2008(01)
硕士论文
[1]血浆半乳糖凝集素-3水平与多囊卵巢综合征中慢性炎症和胰岛素抵抗的相关性研究[D]. 吴锐.重庆医科大学 2018
[2]Galectin-4表达失调与肝细胞癌发生发展及相关分子机制初步研究[D]. 陈灿灿.福建医科大学 2017
[3]无乳链球菌和海豚链球菌灭活疫苗对罗非鱼的免疫效果[D]. 付天增.山东农业大学 2017
[4]罗非鱼源无乳链球菌嵌合型亚单位疫苗与DNA疫苗的研制及免疫效果评价[D]. 李桂欢.广东海洋大学 2014
[5]中国罗非鱼出口贸易国际竞争力研究[D]. 王斌.江南大学 2011
本文编号：3442531
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