文昌鱼PAO基因的鉴定、表达和功能研究

发布时间：2021-10-20 06:40

　　多胺氧化酶（Polyamine oxidase, PAO）是单体的可溶性蛋白，FAD分子作为辅酶与PAO蛋白非共价结合,可以催化多胺和乙酰多胺的的氧化。因为多胺是细胞生长和分化的基础调节者，它们的体内平衡对细胞生命是非常重要的。酵母菌的多胺氧化酶（PAO）可以氧化精胺（Spermine，Spm）、N1-乙酰精胺（N1-acetylSpm）和N1-乙酰亚精胺（N1-acetylSpd）。在脊椎动物里，存在两种不同的酶，即精胺氧化酶（Spermine oxidase，SMO）和乙酰多胺氧化酶（N1-acetylpolyamine oxidase，APAO），可以特异性地分别催化精胺和N-乙酰精胺以及N-乙酰亚精胺的氧化。目前，在非脊椎动物中没有关于PAO功能的研究，所以现在急需非脊椎动物PAO结构和功能研究。头索动物文昌鱼，是介于脊椎动物与无脊椎动物之间的一个过渡物种，一直以来被认为是脊椎动物的祖先，也是研究脊椎动物起源和进化的重要模式生物。本文首次克隆得到了青岛文昌鱼（Branchiostoma japonicum）的PAO基因（Bjpao），并对其进行了相关生物信息学分析和功能研究。首... 

【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1 多胺氧化酶蛋白
        1.1 多胺的代谢
        1.2 多胺氧化酶蛋白及其氧化模式
        1.3 多胺氧化酶的功能
        1.4 多胺氧化酶的进化
    2 文昌鱼
        2.1 文昌鱼概述
        2.4 文昌鱼的起源与进化
    3 研究目的和技术路线
        3.1 研究目的
        3.2 技术路线
第二章 文昌鱼 PAO 基因的鉴定、表达和功能研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 青岛文昌鱼
            2.1.2 重要化学试剂
            2.1.3 重要仪器设备
            2.1.4 常用培养基配方
            2.1.5 常用溶液制备
            2.1.6 质粒和菌株
            2.1.7 引物合成及 DNA 测序
        2.2 实验方法
            2.2.1 青岛文昌鱼 PAO 基因的克隆
            2.2.2 序列分析
            2.2.3 实时荧光定量 PCR
            2.2.4 Bjpao 表达载体构建
            2.2.5 重组蛋白 BjPAO 表达和纯化
            2.2.6 定点突变实验
            2.2.7 Western blotting 检测重组蛋白 BjPAO 及其突变体
            2.2.8 青岛文昌鱼 rBjPAO 及其突变体的酶活测定
            2.2.9 青岛文昌鱼 rBjPAO 及其突变体的 Km 和 Vmax 值
    3 结果
        3.1 青岛文昌鱼 PAO 基因的序列
        3.2 多序列比对与分子系统发育分析
        3.3 青岛文昌鱼 PAO 基因结构分析
        3.4 青岛文昌鱼 Bjpao 的组织特异性表达
        3.5 青岛文昌鱼 rBjPAO 的表达、纯化和复性
        3.6 定点突变实验
        3.7 青岛文昌鱼 rBjPAO 及其突变体的 Western blot 鉴定
        3.8 青岛文昌鱼 rBjPAO 及其突变体的酶活测定
        3.9 青岛文昌鱼 rBjPAO 及其突变体的 Km 和 Vmax 值的测定
    4 讨论
参考文献
致谢
作者简介
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本文编号：3446431