水产病原菌粘附相关基因的鉴定与功能研究

发布时间：2021-10-22 04:51

　　病原菌对宿主组织表面或细胞的粘附是其感染早期的关键步骤。对许多致病菌而言,首先要通过粘附素粘附到宿主的敏感受体,在机体局部产生毒素或侵入宿主表皮,最终渗透到宿主内部,引发疾病。粘附已被视为致病菌重要的毒力因子之一。国内外关于致病菌粘附的研究主要集中在人类致病菌上,水产养殖中致病菌粘附的研究还较为缺乏,对水产动物病原菌粘附机制的研究还鲜有报道。本文首先以海水养殖业中重要的致病菌河流弧菌为研究对象,采用转座子标签技术构建了河流弧菌粘附缺陷突变体库,采用间接ELISA技术筛选得到5株突变株,菌液PCR鉴定为转座子插入引起的突变。进一步采用染色体步移技术扩增转座子插入位点侧翼序列。通过序列分析,其中19号、23号、60号三个突变株插入位点分别为还原型NO转录调控因子基因、乙二醛酶基因、和β-1,4-甘露聚糖酶基因,而34号突变株的突变基因未找到同源序列,88号突变株没有获得得插入位点侧翼序列。本研究还对突变株进行趋化、成膜等生物学性状的研究,结果表明,突变株对大黄鱼表皮粘液的趋化能力和生物膜形成能力与野生株相比都有显著性差异,其中,23号突变株趋化能力最弱,而19号突变株生物膜形成能力最弱。其... 

【文章来源】：集美大学福建省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 弧菌及弧菌病的研究进展
        1.1.1 概述
        1.1.2 致病机理
    1.2 河流弧菌的研究进展
        1.2.1 概述
        1.2.2 河流弧菌研究现状
    1.3 嗜水气单胞菌研究进展
        1.3.1 概述
        1.3.2 嗜水气单胞菌毒力因子
    1.4 细菌粘附研究进展
        1.4.1 粘附作用
        1.4.3 细菌粘附研究概况
    1.5 转座子及转座诱变技术
        1.5.1 转座子
        1.5.2 转座标签技术
    1.6 主要研究内容和研究意义
        1.6.1 河流弧菌粘附缺陷突变体库的构建和突变株的筛选
        1.6.2 河流弧菌粘附相关基因的克隆与鉴定
        1.6.3 河流弧菌粘附相关基因功能研究
        1.6.4 嗜水气单胞菌粘附相关基因的功能研究
第2章 河流弧菌粘附缺陷突变株的筛选
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细菌及质粒
        2.1.2 培养基及培养方法
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 实验动物
    2.2 实验方法
        2.2.1 突变库的构建
        2.2.2 河流弧菌粘附缺陷突变株的筛选
        2.2.3 突变菌株的PCR鉴定
        2.2.4 基因组步移技术扩增转座子插入位点侧翼序列
        2.2.5 突变株生物性状分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 质粒的提取及转化受体菌E.coli Sm10
        2.3.2 ELISA方法筛选河流弧菌粘附缺陷突变株
        2.3.3 基因组DNA提取
        2.3.4 突变菌株的PCR鉴定
        2.3.5 转座子插入位点侧翼序列分析
        2.3.6 生物学性状分析结果
    2.4 讨论
第3章 嗜水气单胞菌粘附相关基因的功能分析
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验细菌及质粒
        3.1.2 培养基及培养方法
        3.1.3 实验试剂
        3.1.4 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 嗜水气单胞菌粘附缺陷突变体库的构建和突变株的筛选
        3.2.2 补偿株的构建
    3.3 实验结果
        3.3.1 基因组DNA及表达载体pACYC184提取结果
        3.3.2 目的基因扩增及测序测定
        3.3.3 目的基因及表达载体双酶切
        3.3.4 重组质粒鉴定结果
        3.3.5 western blot鉴定结果
        3.3.6 运动性
        3.3.7 体外粘附实验
        3.3.8 生物膜形成实验
    3.4 讨论
第4章 小结与展望
    4.1 主要结论
    4.2 展望
致谢
参考文献



本文编号：3450419