褐鳟LEAP-2成熟肽在大肠杆菌中的融合表达

发布时间：2021-10-22 14:32

　　开发抗菌肽作为饲料添加剂,可避免耐药性产生和药物残留等问题,对褐鳟养殖业健康绿色发展具有重要意义。通过原核表达途径获得褐鳟LEAP-2成熟肽融合表达蛋白,利用同源克隆方法,从褐鳟肝脏组织中克隆得到LEAP-2基因ORF序列,分析其氨基酸序列和蛋白质结构,与其他物种比对并作同源性分析,构建重组表达质粒pET32a-mLEAP-2,原核表达。结果表明,褐鳟LEAP-2基因ORF全长291 bp,编码96个氨基酸,其中氨基端信号肽由27个残基组成,成熟肽含有41个残基;根据比对结果发现,在羧基端存在多个保守氨基酸残基,其中包括4个高度保守半胱氨酸残基,4个半胱氨酸残基之间可形成两对二硫键,推测其与LEAP-2抗菌活性有关;同源性分析显示褐鳟LEAP-2在进化上相对保守,氨基酸序列与大西洋鲑、虹鳟（LEAP-2A）、红点鲑同源性均在94%以上;SDS-PAGE电泳分析显示得到的重组蛋白分子质量约为22.61 ku,与预期一致。研究结果有利于进一步探究褐鳟LEAP-2基因功能,为抗菌肽在养殖上的应用提供理论基础。 

【文章来源】：东北农业大学学报. 2020,51(04)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

褐鳟LEAP-2氨基酸序列系统进化树

含重组表达质粒pET32a-mLEAP-2大肠杆菌BL21(DE3）被培养至OD值约为0.5后，通过IPTG诱导，对诱导0、1、2、3、4、5、6 h菌体总蛋白作SDS-PAGE电泳分析，同时取诱导4 h菌体，经超声破碎后将获得沉淀和上清分别作SDS-PAGE电泳分析。结果如图6所示，含重组质粒菌体总蛋白在相对分子质量约22.61 ku处有蛋白条带，与预期相符，而在含pET32a空质粒菌体总蛋白上未见该条带，表明重组蛋白得到有效表达。另外，在菌体经超声破碎后离心得到上清和沉淀中均存在目的条带，表明trxA-mLEAP-2融合蛋白除以可溶性蛋白形式表达外，还存在于包涵体中。图6 重组蛋白表达SDS-PAGE电泳分析

重组蛋白表达SDS-PAGE电泳分析

【参考文献】：
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本文编号：3451296