长牡蛎酪氨酸酶基因家族的克

发布时间：2021-11-04 23:43

　　本论文以我国重要的海水养殖贝类长牡蛎（Crassostrea gigas；又称太平洋牡蛎）为研究对象，克隆了一个长牡蛎酪氨酸酶基因，分析了其组织表达特性以及进化地位，并开展了长牡蛎基因家族的分类、系统进化研究。本文的研究内容和主要研究结果如下：1长牡蛎酪氨酸酶基因CgTyr2的克隆及其特性分析以长牡蛎成贝为实验材料，利用长牡蛎基因组数据库，设计引物，得到中心片段后，经过3’RACE和5’RACE，从长牡蛎外套膜中扩增出酪氨酸酶CgTyr2全长基因。长牡蛎酪氨酸酶基因CgTyr2的cDNA全长为2563bp，开放阅读框2100bp。编码299个蛋白质，分子量为77.4KDa，理论等电点为-3.3。BLAST分析表明，长牡蛎酪氨酸序列与已知贝类的酪氨酸酶基因具有较高的同源性。系统发育分析显示，血蓝蛋白是由原始的酪氨酸酶基因复制并伴随功能分化形成的。长牡蛎以及其他软体动物的酪氨酸酶基因家族的形成可能是由酪氨酸酶在软体动物分化形成前后复制得到。荧光定量PCR分析显示，长牡蛎酪氨酸酶基因CgTyr2在各个组织中都有表达，其中外套膜外层表达量最高，可能与长牡蛎角质层的形成以及贝壳着色有关。2长牡蛎... 

【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 酪氨酸酶概述
        1.1 酪氨酸酶的分布
        1.2 酪氨酸酶的理化性质和活性中心
        1.3 酪氨酸酶的生理作用
        1.4 酪氨酸酶催化生成黑色素的反应过程
        1.5 酪氨酸酶的应用和发展方向
            1.5.1 在环境保护方面的应用
            1.5.2 酪氨酸酶在美容保健和医药领域的应用
            1.5.3 在食品加工与储藏方面的应用
            1.5.4 在制备生物传感器方面的应用
            1.5.5 在有机合成方面的应用
    2 分子系统发生分析及在酪氨酸酶进化分析中的应用
        2.1 分子系统学的研究意义及发展简史
            2.1.1 分子系统学及相关概念
            2.1.2 分子系统学的研究意义
            2.1.3 分子系统学的发展简史
            2.1.4 分子系统学的研究方法
        2.2 分子系统进化树的构建过程
        2.3 分子系统进化树的构建方法
        2.4 酪氨酸酶基因家族的分类及系统发生分析
            2.4.1 酪氨酸酶的分类
            2.4.2 酪氨酸酶基因家族的系统发生分析
    3 贝类壳色遗传育种
        3.1 双壳贝类概述及经济价值
        3.2 贝类壳色遗传育种
    4 本研究目的
第二章 长牡蛎酪氨酸酶基因 CgTyr2 的全长克隆、表达及序列分析
    1 引言
    2 实验材料与方法
        2.1 实验所用引物
        2.2 主要化学试剂及试剂配置
            2.2.1 试剂来源
            2.2.2 主要试剂的配置
        2.3 实验动物
        2.4 实验前操作
        2.5 长牡蛎各组织的分离
        2.6 长牡蛎总 RNA 的提取过程
        2.7 第一链 cDNA 的合成及检测
            2.7.1 第一链 cDNA 的合成
            2.7.2 反转录检测
        2.8 长牡蛎酪氨酸酶基因 CgTyr2 核心片段的获得
        2.9 长牡蛎酪氨酸酶基因 CgTyr23’ RACE
        2.10 长牡蛎酪氨酸酶基因 CgTyr25’ RACE
        2.11 长牡蛎酪氨酸酶基因 CgTyr2 的结构和特性分析
        2.12 长牡蛎酪氨酸酶基因 CgTyr2 进化树构建
        2.13 长牡蛎酪氨酸酶基因 CgTyr2 的组织特异性表达
            2.13.1 不同组织 cDNA 的获得
            2.13.2 定量 RT-PCR
    3 实验结果分析与讨论
        3.1 长牡蛎酪氨酸酶基因 CgTyr2 cDNA 序列分析
        3.2 酪氨酸酶序列系统进化树分析
        3.3 酪氨酸酶基因在长牡蛎不同组织中的定量分析
第三章 长牡蛎部分酪氨酸酶基因家族中心片段的克隆
    1 材料与方法
        1.1 实验所用引物
        1.2 长牡蛎酪氨酸酶基因 14TYR，16TYR，75TYR，26TYR 核心片段获得
    2 结果与讨论
第四章 长牡蛎酪氨酸酶基因家族的分类和系统发生分析
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 酪氨酸酶氨基酸序列的获得
        2.2 长牡蛎酪氨酸酶基因家族结构分析
        2.3 长牡蛎酪氨酸酶基因家族氨基酸序列分析
        2.4 长牡蛎酪氨酸酶基因家族进化分析
    3 结果与分析
        3.1 长牡蛎酪氨酸酶基因家族所在 Scaffold 分析
        3.2 长牡蛎酪氨酸酶基因家族的分类与保守区域分析
        3.3 长牡蛎酪氨酸酶基因家族的进化分析
    4 讨论
参考文献
致谢
个人简历
硕士期间学术成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]海鲜之珍品——牡蛎[J]. 欧阳军.  养生月刊. 2012(10)
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博士论文
[1]鳅超科鱼类分子系统发育研究[D]. 唐琼英.华中农业大学 2005

硕士论文
[1]中国沿海头足类DNA条形码与分子系统发育研究[D]. 代丽娜.中国海洋大学 2012
[2]中国蛤蜊群体遗传结构与蛤蜊科贝类系统发育研究[D]. 倪乐海.中国海洋大学 2011
[3]香樟果实酪氨酸酶的分离、纯化和性质分析[D]. 张晓晴.江南大学 2008
[4]蓖麻蚕和天蚕线粒体DNA部分序列的测定和系统发生研究[D]. 刘玲玲.西南农业大学 2005



本文编号：3476635