可口革囊星虫体壁总RNA提取的有效方法

发布时间：2021-11-06 17:16

　　为了从可口革囊星虫体壁中提取高质量的RNA,以便深入开展分子生物学研究。采用改良Trizol法、Trizol法和十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法3种方法提取可口革囊星虫体壁中总RNA,并通过琼脂糖凝胶电泳比较不同方法提取总RNA的效果。结果表明:改良Trizol法提取的总RNA经电泳后能看到清晰完整的28S r RNA、18S rRNA和5S rRNA条带,无拖尾现象;而Trizol法和CTAB法提取的总RNA电泳条带完整性较差,缺少28S rRNA。传统的Trizol法和CTAB法不适用于可口革囊星虫体壁总RNA的提取;改良Trizol法提取的总RNA电泳条带清晰、完整性好,质量符合cDNA合成、RT-PCR扩增等后续实验要求,适用于提取可口革囊星虫体壁总RNA。 

【文章来源】：中国农学通报. 2020,36(08)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

可口革囊星虫体壁总RNA的RT-PCR检测

以可口革囊星虫体壁为试验材料，分别采用Trizol法、CTAB法、改良Trizol法提取其总RNA，利用1.2%的普通琼脂糖凝胶电泳检测所提RNA的完整性。结果表明，采用Trizol法和CTAB法提取的星虫体壁总RNA经检测后仅观察到18S rRNA条带，说明RNA已有部分降解，完整性较差，若用于逆转录反应，很难得到高质量的cDNA；采用改良Trizol法提取的总RNA经检测后得到的28S rRNA、18S rRNA条带清晰，带与带之间无明显的弥散现象，且无明显的DNA等杂质污染（见图1），说明改良Trizol法提取的总RNA完整性较好，符合分子生物学实验要求，可以很好地解决海洋无脊椎动物因富含多糖和蛋白质等物质而带来的总RNA提取易降解的问题。2.2 RT-PCR检测

【参考文献】：
期刊论文
[1]可口革囊星虫高密度养殖技术[J]. 莫新.  科学养鱼. 2017(01)
[2]3种烟草RNA高效提取方法的比较[J]. 张震彪,宋希云,郭新梅.  中国农学通报. 2016(30)
[3]广西两种星虫营养及生物质量比较分析[J]. 梁川,刘小玲.  轻工科技. 2016(01)
[4]可口革囊星虫（Phascolosoma esculenta）重组铁蛋白富集Pb2+等重金属特性和功能研究[J]. 初双双,张云云,苏倡,王颖,陈丽萍,周君,张迪骏,司开学,苏秀榕.  海洋与湖沼. 2015(06)
[5]可口革囊星虫Phasolosma esculenta体腔液的抗菌活性研究[J]. 梁倩蓉,于曙光,刘顺,王国良,郑晓叶,彭雪美惠,周素明.  海洋学研究. 2015(02)
[6]海洋无脊椎动物组织总RNA提取方法的探讨[J]. 冯政夫,王琳,李文侠,部凡,胡彦江,朱伟.  海洋科学. 2014(11)
[7]大黄总RNA提取方法的研究[J]. 程小丽,魏胜利,刘春生,张晓芹.  时珍国医国药. 2014(05)
[8]茶梅花瓣总RNA提取方法的比较和分析[J]. 吴田,蓝增全.  中国农学通报. 2013(28)
[9]Trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA[J]. 吴凯朝,黄诚梅,李杨瑞,杨丽涛,吴建明.  南方农业学报. 2012(12)
[10]RNA分子的生物学功能[J]. 马沛勤,王玲丽.  生物学通报. 2012(01)



本文编号：3480220