WSSV-VP28融合蛋白的免疫效果及F 0 -ATP合酶cDNA的克隆
发布时间：2021-11-07 13:07
对虾白斑综合征病毒（WSSV）是对对虾养殖业产生巨大危害的病毒，目前还未发现有效的治疗措施。为了寻找对该病毒的有效防控方法，本文构建了三种含VP28的融合蛋白并研究其对凡纳滨对虾的保护作用，在最后一节内容中，克隆了与WSSV感染过程相关的F0-ATP合酶序列的全长，以上研究为后续实验的开展提供基础。1.针对VP28C和Hsp70p这两段目的基因，设计引物，经过PCR扩增分别得到了目的基因，经双酶切和连接反应，成功的将这两个片段克隆至载体pBAD/gⅢA中。通过转化反应，将构建的重组载体导入到感受态细胞Top10中。将大肠杆菌进行大量的培养后，添加一定浓度的诱导剂，使构建的融合蛋白在大肠杆菌内得到了成功的表达，利用SDS-PAGE和Western-blot对表达的蛋白进行了验证。通过Co2+亲和层析和超滤技术获得纯化的目的蛋白获得了浓度较高的纯化蛋白。通过肌肉注射的方式将蛋白注射到对虾体内，采用病料投喂方式进行凡纳滨对虾感染，结果表明，构建的融合蛋白对对虾有一定的保护作用。通过荧光定量实验，检测了对虾体内与免疫反应相关的几种基因的表达量的变化，结果发现，注射蛋白的对虾组与对照组相比，其免...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组载体pBAD/gIIIA-vp28c菌落PCR鉴定M:DNA分子量标准DL2000;1:空白对照;2:菌落PCR鉴定VP28C
体 pBAD/gIIIA-Hsp70pL2000；1：空白对照；tion of pBAD/gIIIA-Hsp7000；Lane 1：control；L载体 pBAD/gIIIA-vp28C1：空白对照；2~3：pBPCR 鉴定 of pBAD/gIIIA-vp28C-H
组载体 pBAD/gIIIA-vp28C1：空白对照；2~3：pBAPCR 鉴定n of pBAD/gIIIA-vp28C-Hs000；Lane 1：control；Lavp28C-Hsp70p 的表达时间的菌液在诱导表达完后进行 SDS-PAGE 电泳，表达蛋白（图 1-4）,与理
【参考文献】：
期刊论文
[1]脊尾白虾（Exopalaemon carinicauda）ferritin基因克隆及表达分析[J]. 李美玉,李健,刘萍,李吉涛. 海洋与湖沼. 2012(02)
[2]p38 MAPK信号通路与疼痛的关系[J]. 张涛,杨承祥,王汉兵. 中国疼痛医学杂志. 2012(03)
[3]线粒体ATP合酶基因组成及生化机制研究进展[J]. 张吉斌,刘月平,方美英. 中国畜牧杂志. 2010(07)
[4]对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP19的单克隆抗体制备及其定位[J]. 姜有声,战文斌,程顺峰,王世表. 中国水产科学. 2009(01)
[5]WSSV-VP39基因克隆与结构分析[J]. 刘庆慧,韩文君,杨冰,黄倢. 海洋水产研究. 2007(05)
[6]对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP19的融合表达及其抗病毒感染作用[J]. 贾启军,孟小林,徐进平,王健,鲁伟. Virologica Sinica. 2006(06)
[7]对虾白斑综合症病毒结构蛋白质VP24的定位研究[J]. 谢希贤,杨丰. 厦门大学学报(自然科学版). 2006(03)
[8]ATP合酶：一个最小的蛋白质分子转动马达[J]. 杨福愉. 医学分子生物学杂志. 2005(04)
[9]WSSV具蛋白酶活性肽段的检测[J]. 刘庆慧,黄倢,贾佩峤,王清印. 中国水产科学. 2004(06)
[10]热休克蛋白研究进展[J]. 曲凌云,孙修勤,相建海,洪旭光,张进兴. 海洋科学进展. 2004(03)
硕士论文
[1]WSSV-VP90、VP39与WSSV及宿主蛋白的作用[D]. 李倩.上海海洋大学 2012
本文编号：3481908
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组载体pBAD/gIIIA-vp28c菌落PCR鉴定M:DNA分子量标准DL2000;1:空白对照;2:菌落PCR鉴定VP28C
体 pBAD/gIIIA-Hsp70pL2000；1：空白对照；tion of pBAD/gIIIA-Hsp7000；Lane 1：control；L载体 pBAD/gIIIA-vp28C1：空白对照；2~3：pBPCR 鉴定 of pBAD/gIIIA-vp28C-H
组载体 pBAD/gIIIA-vp28C1：空白对照；2~3：pBAPCR 鉴定n of pBAD/gIIIA-vp28C-Hs000；Lane 1：control；Lavp28C-Hsp70p 的表达时间的菌液在诱导表达完后进行 SDS-PAGE 电泳，表达蛋白（图 1-4）,与理
【参考文献】：
期刊论文
[1]脊尾白虾（Exopalaemon carinicauda）ferritin基因克隆及表达分析[J]. 李美玉,李健,刘萍,李吉涛. 海洋与湖沼. 2012(02)
[2]p38 MAPK信号通路与疼痛的关系[J]. 张涛,杨承祥,王汉兵. 中国疼痛医学杂志. 2012(03)
[3]线粒体ATP合酶基因组成及生化机制研究进展[J]. 张吉斌,刘月平,方美英. 中国畜牧杂志. 2010(07)
[4]对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP19的单克隆抗体制备及其定位[J]. 姜有声,战文斌,程顺峰,王世表. 中国水产科学. 2009(01)
[5]WSSV-VP39基因克隆与结构分析[J]. 刘庆慧,韩文君,杨冰,黄倢. 海洋水产研究. 2007(05)
[6]对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP19的融合表达及其抗病毒感染作用[J]. 贾启军,孟小林,徐进平,王健,鲁伟. Virologica Sinica. 2006(06)
[7]对虾白斑综合症病毒结构蛋白质VP24的定位研究[J]. 谢希贤,杨丰. 厦门大学学报(自然科学版). 2006(03)
[8]ATP合酶：一个最小的蛋白质分子转动马达[J]. 杨福愉. 医学分子生物学杂志. 2005(04)
[9]WSSV具蛋白酶活性肽段的检测[J]. 刘庆慧,黄倢,贾佩峤,王清印. 中国水产科学. 2004(06)
[10]热休克蛋白研究进展[J]. 曲凌云,孙修勤,相建海,洪旭光,张进兴. 海洋科学进展. 2004(03)
硕士论文
[1]WSSV-VP90、VP39与WSSV及宿主蛋白的作用[D]. 李倩.上海海洋大学 2012
本文编号：3481908
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