尼罗罗非鱼CD22基因的克隆表达和功能研究
发布时间：2021-11-08 07:07
尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）是世界以及我国南方区域养殖的重要淡水鱼类之一。近年来随着我国水产养殖规模的扩大,罗非鱼病毒性和细菌性疾病多发,造成了严重的经济损失,严重影响该养殖业的发展,因此免疫防治成为解决这些病害问题的重要突破口。CD22属是唾液酸结合免疫球蛋白样凝集（Sigles）家族成员,为I型跨蛋白。该基因表达在成熟的B细胞膜上。CD22的细胞内域包括免疫受体酪氨酸活化基序（Immunoreceptor tyrosine-based activation motif,ITAM）和免疫受体酪氨酸抑制基序（Immunoreceptor tyrosine-based inhibition motifs,ITIM）。CD22是一个黏附类的信号分子,与细胞间相互作用有关,在B细胞的转导过程中起重要作用。本研究克隆的CD22基因开放阅读框序列,对比其表达特征及功能进行了分析。研究结果如下:1.本论文探索尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）CD22在免疫应答中的作用。根据NCBI上公布的罗非鱼CD22基因（记为On-CD22）（Gen Bank登...
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
On-CD22基因克隆Fig.2-1CloningofOn-CD22
尼罗罗非鱼CD22基因的克隆表达和功能研究16图2-3On-CD22氨基酸序列保守结构域Fig.2-3ConservativedomainwithinaminoacidsequenceofOn-CD222.4.2二级结构和三级结构预测使用在线软件ExPASy中的SOPMA程序预测On-CD22蛋白的二级结构，分析结果显示（图2-4）,该蛋白以无规则卷曲为主，其中α-螺旋占总链的6.74%，无规则卷曲占总链的52.53%，β-转角占总链的3.37%，延伸链占总链的37.36%。利用在线软件SWISS-MODEL对On-CD22蛋白进行同源模建，获其三级结构模型，其最佳模型是5vKm.1.A（图2-5），序列一致性为30.71%；另一模型是5lf5.1A,序列一致性为22.04%。图2-4On-CD22蛋白二级结构预测Fig.2-4PredictedsecondarystructureofOn-CD22图注：蓝色：α-螺；红色：β-转角；绿色：延伸链；紫色：无规则卷曲；Note：Blue：α-helix；Red：β-extend；Purple：randomcoil；Green：Extensionchain
广东海洋大学硕士学位论文17图2-5On-CD22蛋白跨膜区三维结构Fig.2-5Thethree-dimensionalstructuresoftransmembraneregionofOn-CD222.4.3On-CD22序列同源比对及进化分析利用MegAlign软件将克隆得到的On-CD22基因序列与伯氏朴丽鱼、斑马拟丽鱼、大黄鱼、尼加拉瓜湖始丽鱼、布氏新亮鲷、奥利亚罗非鱼、小家鼠、奈里朴丽鱼、智人等与该基因序列进行相似性比对，其中尼罗罗非鱼与奥利亚罗非鱼序列相似性高达96.53%,与奈里朴丽鱼序列相似性为54.78%（表2-4）。利用MEGA7.0软件采用邻接法构建罗非鱼CD22基因系统进化树，结果显示尼罗罗非鱼与奥利亚罗非鱼的亲缘性最近，其次是奈里朴丽鱼，而与小家鼠和智人等物种相距最远。其他物种的CD22氨基酸序列的邻接法系统进化树（图2-6）罗非鱼与奥利亚罗非鱼的CD22聚为1支，有较高的同源性。表2-4序列相似性Table2-4similaritysequence物种序列号序列相似性Maylandiazebra斑马拟丽鱼XP_004566890.189.57%Larimichthyscrocea大黄鱼XP_019112342.254.7%Haplochromisburtoni伯氏朴丽鱼XP_005943881.190.12%Archocentruscentrarchus尼加拉瓜湖始丽鱼XP_030605075.172.01%Neolamprologusbrichardi布氏新亮鲷XP_006794956.190.12%Oreochromisaureus奥利亚罗非鱼XP_031588969.196.53%Musmusculus小家鼠XP_006539553.132.5%Haplochromisnyererei奈里朴丽鱼XP_005743322.190.12%Homosapiens智人NP_001265346.131.07%
【参考文献】：
期刊论文
[1]B细胞骨免疫在牙周炎中的作用[J]. 林晓萍,韩亚琨. 口腔疾病防治. 2020(04)
[2]紫红笛鲷血细胞发生研究[J]. 钟爱华,牟毅,高航,王文鸿. 水产科学. 2020(01)
[3]尼罗罗非鱼TGF-β1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 余艳玲,冯鹏霏,潘传燕,陈晓汉,林勇,张永德,罗洪林. 江苏农业学报. 2019(06)
[4]尼罗罗非鱼PPARδ的原核表达及其多抗制备和纯化[J]. 潘传燕,冯鹏霏,张永德,罗洪林. 福建农业学报. 2019(09)
[5]唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-9在多种疾病中作用机制的研究进展[J]. 曹玲,袁小亮. 赣南医学院学报. 2019(05)
[6]中华鲟免疫分子CD22的克隆及生物信息学挖掘[J]. 来璇,金钰婷,金语嫣,廖志勇. 现代农业科技. 2019(09)
[7]Siglecs家族在脓毒症中的研究进展[J]. 褚萨萨,尤娜,汪茂荣. 中华实验和临床感染病杂志(电子版). 2018(05)
[8]鱼类免疫系统的研究进展[J]. 张媛媛,宋理平. 河北渔业. 2018(02)
[9]人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测[J]. 黄滔,曹玉祥,张志坚,周兴路,魏慧君,吴志浩. 皖南医学院学报. 2018(01)
[10]唾液酸黏附素Siglec-1在疾病中作用的研究进展[J]. 李克雷,李想,丛喆,薛婧. 中国比较医学杂志. 2017(12)
博士论文
[1]鲆鲽鱼IgM+B细胞内吞作用及其调控机制研究[D]. 李逸群.中国科学院大学(中国科学院海洋研究所) 2018
[2]鳜B淋巴细胞的发生和T淋巴细胞受体基因的克隆[D]. 田敬云.中国科学院研究生院（水生生物研究所） 2007
[3]大菱鲆（Scophthalmus maximus）5种趋化因子的克隆、鉴定及表达分析[D]. 刘洋.中国海洋大学 2007
[4]牙鲆鲆淋巴细胞的免疫反应动力学研究[D]. 乌日琴.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2003
硕士论文
[1]NF-κB信号通路在B细胞恶性淋巴瘤中的发病机理和靶向治疗进展[D]. 曾劲舟.南昌大学 2017
[2]无乳链球菌和海豚链球菌灭活疫苗对罗非鱼的免疫效果[D]. 付天增.山东农业大学 2017
[3]CD22信号异常在免疫相关性全血细胞减少症发病机制中作用的研究[D]. 武晓静.天津医科大学 2015
[4]无乳链球菌诱导吉富罗非鱼sIgM、mIgD重链基因的克隆及表达分析[D]. 王培.广东海洋大学 2014
[5]罗非鱼免疫记忆及体外淋巴细胞增殖的研究[D]. 庞碧剑.广东海洋大学 2012
[6]中国罗非鱼出口贸易国际竞争力研究[D]. 王斌.江南大学 2011
[7]牙鲆免疫系统的结构及其部分免疫细胞的功能研究[D]. 王卫卫.中国海洋大学 2009
本文编号：3483246
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
On-CD22基因克隆Fig.2-1CloningofOn-CD22
尼罗罗非鱼CD22基因的克隆表达和功能研究16图2-3On-CD22氨基酸序列保守结构域Fig.2-3ConservativedomainwithinaminoacidsequenceofOn-CD222.4.2二级结构和三级结构预测使用在线软件ExPASy中的SOPMA程序预测On-CD22蛋白的二级结构，分析结果显示（图2-4）,该蛋白以无规则卷曲为主，其中α-螺旋占总链的6.74%，无规则卷曲占总链的52.53%，β-转角占总链的3.37%，延伸链占总链的37.36%。利用在线软件SWISS-MODEL对On-CD22蛋白进行同源模建，获其三级结构模型，其最佳模型是5vKm.1.A（图2-5），序列一致性为30.71%；另一模型是5lf5.1A,序列一致性为22.04%。图2-4On-CD22蛋白二级结构预测Fig.2-4PredictedsecondarystructureofOn-CD22图注：蓝色：α-螺；红色：β-转角；绿色：延伸链；紫色：无规则卷曲；Note：Blue：α-helix；Red：β-extend；Purple：randomcoil；Green：Extensionchain
广东海洋大学硕士学位论文17图2-5On-CD22蛋白跨膜区三维结构Fig.2-5Thethree-dimensionalstructuresoftransmembraneregionofOn-CD222.4.3On-CD22序列同源比对及进化分析利用MegAlign软件将克隆得到的On-CD22基因序列与伯氏朴丽鱼、斑马拟丽鱼、大黄鱼、尼加拉瓜湖始丽鱼、布氏新亮鲷、奥利亚罗非鱼、小家鼠、奈里朴丽鱼、智人等与该基因序列进行相似性比对，其中尼罗罗非鱼与奥利亚罗非鱼序列相似性高达96.53%,与奈里朴丽鱼序列相似性为54.78%（表2-4）。利用MEGA7.0软件采用邻接法构建罗非鱼CD22基因系统进化树，结果显示尼罗罗非鱼与奥利亚罗非鱼的亲缘性最近，其次是奈里朴丽鱼，而与小家鼠和智人等物种相距最远。其他物种的CD22氨基酸序列的邻接法系统进化树（图2-6）罗非鱼与奥利亚罗非鱼的CD22聚为1支，有较高的同源性。表2-4序列相似性Table2-4similaritysequence物种序列号序列相似性Maylandiazebra斑马拟丽鱼XP_004566890.189.57%Larimichthyscrocea大黄鱼XP_019112342.254.7%Haplochromisburtoni伯氏朴丽鱼XP_005943881.190.12%Archocentruscentrarchus尼加拉瓜湖始丽鱼XP_030605075.172.01%Neolamprologusbrichardi布氏新亮鲷XP_006794956.190.12%Oreochromisaureus奥利亚罗非鱼XP_031588969.196.53%Musmusculus小家鼠XP_006539553.132.5%Haplochromisnyererei奈里朴丽鱼XP_005743322.190.12%Homosapiens智人NP_001265346.131.07%
【参考文献】：
期刊论文
[1]B细胞骨免疫在牙周炎中的作用[J]. 林晓萍,韩亚琨. 口腔疾病防治. 2020(04)
[2]紫红笛鲷血细胞发生研究[J]. 钟爱华,牟毅,高航,王文鸿. 水产科学. 2020(01)
[3]尼罗罗非鱼TGF-β1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 余艳玲,冯鹏霏,潘传燕,陈晓汉,林勇,张永德,罗洪林. 江苏农业学报. 2019(06)
[4]尼罗罗非鱼PPARδ的原核表达及其多抗制备和纯化[J]. 潘传燕,冯鹏霏,张永德,罗洪林. 福建农业学报. 2019(09)
[5]唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-9在多种疾病中作用机制的研究进展[J]. 曹玲,袁小亮. 赣南医学院学报. 2019(05)
[6]中华鲟免疫分子CD22的克隆及生物信息学挖掘[J]. 来璇,金钰婷,金语嫣,廖志勇. 现代农业科技. 2019(09)
[7]Siglecs家族在脓毒症中的研究进展[J]. 褚萨萨,尤娜,汪茂荣. 中华实验和临床感染病杂志(电子版). 2018(05)
[8]鱼类免疫系统的研究进展[J]. 张媛媛,宋理平. 河北渔业. 2018(02)
[9]人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测[J]. 黄滔,曹玉祥,张志坚,周兴路,魏慧君,吴志浩. 皖南医学院学报. 2018(01)
[10]唾液酸黏附素Siglec-1在疾病中作用的研究进展[J]. 李克雷,李想,丛喆,薛婧. 中国比较医学杂志. 2017(12)
博士论文
[1]鲆鲽鱼IgM+B细胞内吞作用及其调控机制研究[D]. 李逸群.中国科学院大学(中国科学院海洋研究所) 2018
[2]鳜B淋巴细胞的发生和T淋巴细胞受体基因的克隆[D]. 田敬云.中国科学院研究生院（水生生物研究所） 2007
[3]大菱鲆（Scophthalmus maximus）5种趋化因子的克隆、鉴定及表达分析[D]. 刘洋.中国海洋大学 2007
[4]牙鲆鲆淋巴细胞的免疫反应动力学研究[D]. 乌日琴.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2003
硕士论文
[1]NF-κB信号通路在B细胞恶性淋巴瘤中的发病机理和靶向治疗进展[D]. 曾劲舟.南昌大学 2017
[2]无乳链球菌和海豚链球菌灭活疫苗对罗非鱼的免疫效果[D]. 付天增.山东农业大学 2017
[3]CD22信号异常在免疫相关性全血细胞减少症发病机制中作用的研究[D]. 武晓静.天津医科大学 2015
[4]无乳链球菌诱导吉富罗非鱼sIgM、mIgD重链基因的克隆及表达分析[D]. 王培.广东海洋大学 2014
[5]罗非鱼免疫记忆及体外淋巴细胞增殖的研究[D]. 庞碧剑.广东海洋大学 2012
[6]中国罗非鱼出口贸易国际竞争力研究[D]. 王斌.江南大学 2011
[7]牙鲆免疫系统的结构及其部分免疫细胞的功能研究[D]. 王卫卫.中国海洋大学 2009
本文编号：3483246
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