海洋源益生芽孢杆菌的筛
发布时间：2021-11-10 08:03
在水产养殖中由于抗微生物药物的滥用造成耐药病原大量出现、养殖环境不断恶化、水产品药物残留量超标等一系列问题。因而,抗生素替代品的研发受到了广泛的关注。现在,许多关于益生菌的研究报道表明其在水产养殖中不仅在一定程度上可以替代抗生素,还可以发挥许多益生作用,例如,促进鱼类生长、提高饵料效率、改善肠道菌群、增强免疫力、拮抗病原及改善水质等等。因此,安全、有效的益生菌株的筛选及应用对于水产养殖业的可持续发展至关重要。本论文通过体外实验研究了环境分离菌株及消化道分离菌株的益生特性（胞外酶产生谱、病原菌拮抗谱）及其对胃肠道内环境的耐受力,同时依据体外实验结果选取分离株Bacillus G024 （分离自水体环境）、Bacillus M001（分离自牙鲆消化道）进行体内实验,研究了其对实验动物大菱鲆的生长、免疫、抗病力、肠道菌群结构的影响。1.海洋源产胞外酶细菌的分离鉴定本研究从牙鲆（Paralichthys olivaceus）、大菱鲆（S. maximus）、点带石斑鱼（E.coioides）、斑鰶（Konosirus punctatus）消化道及海参露天养殖池的海水和底泥中分离细菌,分别用脱脂...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：188 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略符号
引言
第一篇 文献综述
第一章 水产益生菌研究进展
摘要
1 前言
2 益生菌的基础理论及发展
2.1 益生菌的定义
2.2 益生菌的种类
2.3 益生菌的作用机理
3 益生菌的筛选
3.1 益生菌益生特性的验证
3.2 益生菌的动物安全性评价
3.3 益生菌株对消化道内环境耐受能力的评价
4 水产益生菌的应用前景
第二章 鱼类肠道菌群研究进展
摘要
1 前言
2 鱼类肠道菌群的概念
3 鱼类肠道菌群的形成及结构
3.1 鱼类肠道菌群的形成
3.2 鱼类肠道菌群的结构
3.3 鱼类肠道菌群结构的影响因素
4 鱼类肠道菌群的功能
4.1 生物拮抗作用
4.2 免疫调节作用
4.3 营养作用
4.4 消化道菌群与疾病暴发的关联
5 鱼类肠道菌群的研究手段
6 今后的科研方向
6.1 仔稚鱼期消化道微生物区系的研究
6.2 采用微生态学手段防控鱼类疾病
6.3 检测环境质量
7 本文的研究目的及论文的基本框架
7.1 本文的研究目的和意义
7.2 本研究的主要内容和技术路线
第二篇 实验研究
第三章 海洋源产胞外酶细菌的分离、鉴定
摘要
前言
1 材料与方法
1.1 分离产胞外酶菌株的样品来源
1.2 海洋源细菌的分离
1.3 纯化后海洋源细菌的产胞外酶特性验证
1.4 产胞外酶菌株的革兰氏染色及形态学观察
1.5 部分产胞外酶菌株的16S r1RNA基因的PCR扩增及遗传进化系分析
1.6 已鉴定产胞外酶菌株对水产动物常用药物的耐药性检测
2 结果
2.1 海水鱼类消化道及海水、底泥样本中细菌的分离
2.2 纯化后细菌的产胞外酶特性
2.3 产胞外酶菌株的革兰氏染色结果及形态学特征
2.4 产胞外酶菌株的遗传进化系分析结果
2.5 已鉴定产胞外酶菌株的耐药性特征
3 讨论
4 本章小结
ABASTRACT
第四章 产胞外酶芽孢杆菌对水产病原菌拮抗效果的评价
摘要
前言
1 材料与方法
1.1 牛津杯法验证测试菌株对水产病原菌的抑制作用
1.2 扫描电镜观察测试菌株G024、N004对水产病原菌的抑制效果
2 结果
2.1 测试菌株对水产病原菌的抑菌谱
2.2 测试菌株G024、N004无细胞培养上清对指示菌株的影响
3 讨论
4 本章小结
ABSTRACT
第五章 潜在益生芽孢杆菌的生长特性、消化道内环境耐受力及动物安全性研究
摘要
前言
1 材料与方法
1.1 测试菌株生长特性的评价
1.2 测试菌株生长曲线测定
1.3 胆盐浓度对测试菌株生长影响的评价
1.4 测试菌株对人工胃液的耐受力的评价
1.5 测试菌株溶血特性的评价
1.6 测试菌株卵磷脂酶活性特征的评价
1.7 测试菌株生物被膜形成能力的评价
1.8 测试菌株质粒提取
1.9 对鱼的安全性试验
1.10 数据分析
2 结果
2.1 温度、pH值、盐度对测试菌株生长的影响
2.2 测试菌株的生长曲线
2.3 胆盐浓度对测试菌株生长的影响
2.4 人工胃液对测试菌株存活率的影响
2.5 测试菌株的溶血特性
2.6 测试菌株的卵磷脂酶活性特征
2.7 测试菌株生物被膜形成特征
2.8 测试菌株的质粒提取结果
2.9 测试菌株的动物安全性
3 讨论
4 本章小结
ABSTRACT
第六章 潜在益生芽孢杆菌G024和M001对大菱鲆的生长、消化酶活力、天然免疫水平、消化道菌群结构及抗病力的影响
摘要
前言
1 材料与方法
1.1 实验设计(大菱鲆饲养试验)
1.2 实验饵料制备
1.3 菌株G024、M001对大菱鲆生长影响的评价
1.4 样品采集及处理
1.5 大菱鲆肝胰脏、胃、肠道消化酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)活力的测定
1.6 大菱鲆血清免疫学指标及其它生理学指标的测定
1.7 攻毒实验
1.8 PCR-DGGE技术分析大菱鲆消化道菌群结构
1.9 数据分析
2 结果
2.1 潜在益生芽孢杆菌G024、M001对大菱鲆生长的影响
2.2 潜在益生芽孢杆菌G024、M001对大菱鲆肝胰脏、胃、肠道消化酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)活力的影响
2.3 潜在益生芽孢杆菌G024、M001对大菱鲆血清免疫学指标的影响
2.4 潜在益生芽孢杆菌G024、M001对大菱鲆抗病力的影响
2.5 潜在益生芽孢杆菌G024、M001对大菱鲆消化道菌群结构的影响
3 讨论
4 本章小结
ABSTRACT
第七章 全文结论及创新点
全文结论
创新点
参考文献
附录
附表1 产酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶)菌株的基本特性
附表2 本博士论文中测序基因的BLAST比对结果
攻读学位期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]2株鱼源芽孢杆菌的生物学特性研究[J]. 马如龙,杨红玲,孙云章,叶继丹,张春晓,林文燕. 水产科学. 2010(09)
[2]草鱼和青鱼消化酶的分布特性[J]. 刘忠义,王璋. 淡水渔业. 2006(01)
[3]微生态调节剂对提高中国对虾抗病力的研究[J]. 吴垠,王斌,祝国芹,桂远明,康白,文姝,孔庆友. 中国微生态学杂志. 1996(01)
[4]微生态调节剂对鲤生长及肠道菌群的影响[J]. 王斌,陈营,毛连菊,桂远明,康白,文姝,孔庆友. 中国微生态学杂志. 1996(01)
[5]双歧杆菌生态制剂在中国对虾育苗生产中的应用[J]. 邹向阳. 中国微生态学杂志. 1995(01)
[6]微生态学的崛起与观念革命[J]. 康白. 中国微生态学杂志. 1993(01)
[7]复方回春生对鲤暴发性肝炎治疗效果的初步研究报告[J]. 桂远明,吴垠,祝国芹,康白,蒋寒青,孔庆友,贺向荣. 中国微生态学杂志. 1992(02)
[8]微生态制剂—活菌制剂现状[J]. 陈婷梅,张德纯. 中国微生态学杂志. 1992(01)
[9]仔鳗生态失调死亡率与肠道微生态系重调整的研究[J]. 王经邦,洪黎民. 中国微生态学杂志. 1991(03)
[10]仔鳗肠道微生态的重建与嗜食性研究[J]. 王经邦,洪黎民. 中国微生态学杂志. 1991(01)
博士论文
[1]鳗弧菌Ⅵ型分泌系统（T6SS）的功能及调控研究[D]. 郝彬.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2012
[2]两株鳗弧菌全基因组序列测定及转录组比较分析[D]. 李贵阳.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2011
本文编号：3486895
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：188 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略符号
引言
第一篇 文献综述
第一章 水产益生菌研究进展
摘要
1 前言
2 益生菌的基础理论及发展
2.1 益生菌的定义
2.2 益生菌的种类
2.3 益生菌的作用机理
3 益生菌的筛选
3.1 益生菌益生特性的验证
3.2 益生菌的动物安全性评价
3.3 益生菌株对消化道内环境耐受能力的评价
4 水产益生菌的应用前景
第二章 鱼类肠道菌群研究进展
摘要
1 前言
2 鱼类肠道菌群的概念
3 鱼类肠道菌群的形成及结构
3.1 鱼类肠道菌群的形成
3.2 鱼类肠道菌群的结构
3.3 鱼类肠道菌群结构的影响因素
4 鱼类肠道菌群的功能
4.1 生物拮抗作用
4.2 免疫调节作用
4.3 营养作用
4.4 消化道菌群与疾病暴发的关联
5 鱼类肠道菌群的研究手段
6 今后的科研方向
6.1 仔稚鱼期消化道微生物区系的研究
6.2 采用微生态学手段防控鱼类疾病
6.3 检测环境质量
7 本文的研究目的及论文的基本框架
7.1 本文的研究目的和意义
7.2 本研究的主要内容和技术路线
第二篇 实验研究
第三章 海洋源产胞外酶细菌的分离、鉴定
摘要
前言
1 材料与方法
1.1 分离产胞外酶菌株的样品来源
1.2 海洋源细菌的分离
1.3 纯化后海洋源细菌的产胞外酶特性验证
1.4 产胞外酶菌株的革兰氏染色及形态学观察
1.5 部分产胞外酶菌株的16S r1RNA基因的PCR扩增及遗传进化系分析
1.6 已鉴定产胞外酶菌株对水产动物常用药物的耐药性检测
2 结果
2.1 海水鱼类消化道及海水、底泥样本中细菌的分离
2.2 纯化后细菌的产胞外酶特性
2.3 产胞外酶菌株的革兰氏染色结果及形态学特征
2.4 产胞外酶菌株的遗传进化系分析结果
2.5 已鉴定产胞外酶菌株的耐药性特征
3 讨论
4 本章小结
ABASTRACT
第四章 产胞外酶芽孢杆菌对水产病原菌拮抗效果的评价
摘要
前言
1 材料与方法
1.1 牛津杯法验证测试菌株对水产病原菌的抑制作用
1.2 扫描电镜观察测试菌株G024、N004对水产病原菌的抑制效果
2 结果
2.1 测试菌株对水产病原菌的抑菌谱
2.2 测试菌株G024、N004无细胞培养上清对指示菌株的影响
3 讨论
4 本章小结
ABSTRACT
第五章 潜在益生芽孢杆菌的生长特性、消化道内环境耐受力及动物安全性研究
摘要
前言
1 材料与方法
1.1 测试菌株生长特性的评价
1.2 测试菌株生长曲线测定
1.3 胆盐浓度对测试菌株生长影响的评价
1.4 测试菌株对人工胃液的耐受力的评价
1.5 测试菌株溶血特性的评价
1.6 测试菌株卵磷脂酶活性特征的评价
1.7 测试菌株生物被膜形成能力的评价
1.8 测试菌株质粒提取
1.9 对鱼的安全性试验
1.10 数据分析
2 结果
2.1 温度、pH值、盐度对测试菌株生长的影响
2.2 测试菌株的生长曲线
2.3 胆盐浓度对测试菌株生长的影响
2.4 人工胃液对测试菌株存活率的影响
2.5 测试菌株的溶血特性
2.6 测试菌株的卵磷脂酶活性特征
2.7 测试菌株生物被膜形成特征
2.8 测试菌株的质粒提取结果
2.9 测试菌株的动物安全性
3 讨论
4 本章小结
ABSTRACT
第六章 潜在益生芽孢杆菌G024和M001对大菱鲆的生长、消化酶活力、天然免疫水平、消化道菌群结构及抗病力的影响
摘要
前言
1 材料与方法
1.1 实验设计(大菱鲆饲养试验)
1.2 实验饵料制备
1.3 菌株G024、M001对大菱鲆生长影响的评价
1.4 样品采集及处理
1.5 大菱鲆肝胰脏、胃、肠道消化酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)活力的测定
1.6 大菱鲆血清免疫学指标及其它生理学指标的测定
1.7 攻毒实验
1.8 PCR-DGGE技术分析大菱鲆消化道菌群结构
1.9 数据分析
2 结果
2.1 潜在益生芽孢杆菌G024、M001对大菱鲆生长的影响
2.2 潜在益生芽孢杆菌G024、M001对大菱鲆肝胰脏、胃、肠道消化酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)活力的影响
2.3 潜在益生芽孢杆菌G024、M001对大菱鲆血清免疫学指标的影响
2.4 潜在益生芽孢杆菌G024、M001对大菱鲆抗病力的影响
2.5 潜在益生芽孢杆菌G024、M001对大菱鲆消化道菌群结构的影响
3 讨论
4 本章小结
ABSTRACT
第七章 全文结论及创新点
全文结论
创新点
参考文献
附录
附表1 产酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶)菌株的基本特性
附表2 本博士论文中测序基因的BLAST比对结果
攻读学位期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]2株鱼源芽孢杆菌的生物学特性研究[J]. 马如龙,杨红玲,孙云章,叶继丹,张春晓,林文燕. 水产科学. 2010(09)
[2]草鱼和青鱼消化酶的分布特性[J]. 刘忠义,王璋. 淡水渔业. 2006(01)
[3]微生态调节剂对提高中国对虾抗病力的研究[J]. 吴垠,王斌,祝国芹,桂远明,康白,文姝,孔庆友. 中国微生态学杂志. 1996(01)
[4]微生态调节剂对鲤生长及肠道菌群的影响[J]. 王斌,陈营,毛连菊,桂远明,康白,文姝,孔庆友. 中国微生态学杂志. 1996(01)
[5]双歧杆菌生态制剂在中国对虾育苗生产中的应用[J]. 邹向阳. 中国微生态学杂志. 1995(01)
[6]微生态学的崛起与观念革命[J]. 康白. 中国微生态学杂志. 1993(01)
[7]复方回春生对鲤暴发性肝炎治疗效果的初步研究报告[J]. 桂远明,吴垠,祝国芹,康白,蒋寒青,孔庆友,贺向荣. 中国微生态学杂志. 1992(02)
[8]微生态制剂—活菌制剂现状[J]. 陈婷梅,张德纯. 中国微生态学杂志. 1992(01)
[9]仔鳗生态失调死亡率与肠道微生态系重调整的研究[J]. 王经邦,洪黎民. 中国微生态学杂志. 1991(03)
[10]仔鳗肠道微生态的重建与嗜食性研究[J]. 王经邦,洪黎民. 中国微生态学杂志. 1991(01)
博士论文
[1]鳗弧菌Ⅵ型分泌系统（T6SS）的功能及调控研究[D]. 郝彬.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2012
[2]两株鳗弧菌全基因组序列测定及转录组比较分析[D]. 李贵阳.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2011
本文编号：3486895
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