半滑舌鳎源美人鱼发光杆菌的分离鉴定及致病性研究
发布时间：2021-11-10 23:02
探究引起半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis Gunther）发病死亡的原因及其病原菌的药敏特性,为生产中有效防治该病提供理论依据。于2018年从天津市某养殖场患病半滑舌鳎中分离得到3株优势菌,回归感染实验证实菌株PSC0601对半滑舌鳎具有致病性。通过肉眼观察可见半滑舌鳎腹腔严重肿胀,腹部两侧肌肉出血,解剖后可见半滑舌鳎肠道、肝脏等组织器官亦有大量出血。经API鉴定系统和16S rDNA序列分析鉴定该菌株为美人鱼发光杆菌美人鱼亚种（Photobacterium damselae subsp.damselae）。该菌在绵羊血平板上呈现β型溶血,人工回归感染实验结果显示该菌对半滑舌鳎的半数致死量(LD50)为1.5×104 CFU/g。对48种抗菌药物的药敏实验结果表明,菌株PSC0601对氟苯尼考、氯霉素、阿莫西林、阿奇霉素、壮观霉素、头孢哌酮等20种药物具有较高敏感性。研究结果表明,美人鱼发光杆菌美人鱼亚种对半滑舌鳎具有较强致病性,可导致肝脏、肠道等器官发生出血性坏死,引发鱼类死亡。本文通过对该菌的药物敏感性进行研究,以期...
【文章来源】：中国海洋大学学报(自然科学版). 2020,50(06)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
PSC0601菌株革兰氏染色
分别从患病半滑舌鳎肝脏和肠道分离得到3株优势菌, 经过人工感染预试验证实其中优势菌PSC0601为致病菌,其他2株菌PSC0602、PSC0603均不致病。在2216E琼脂平板上25 ℃培养 24 h后, PSC0601菌株的菌落为圆形, 乳白色, 表面光滑湿润, 边缘光滑, 菌落直径 1～2 mm。病原菌在绵羊血平板上呈现典型的 β 型溶血(见图1),病原菌进行革兰氏染色,在镜下观察,呈球杆状革兰氏阴性菌(见图2箭头所示)。图2 PSC0601菌株革兰氏染色
采用通用引物扩增所分离菌株的 16S rDNA 基因,测序结果经过去除载体序列和拼接后,PSC0601菌株16S rDNA 基因的片段为1 454 bp,在NCBI数据库中进行Blast比对,结果显示PSC0601菌株与美人鱼发光杆菌的同源性最高,均都达到99%,所以不能以此直接区分PSC0601菌株为美人鱼亚种或杀鱼亚种,还要通过生理生化特性进行分析才能确定其为美人鱼亚种或杀鱼亚种。在GenBank 数据库中选取同源性较高的美人鱼杆菌菌株和不同亲缘关系的菌株的16S rDNA序列,利用 MEGA 7.0 软件构建系统发育树(见图3),进行系统进化分析,结果发现PSC0601菌株与美人鱼发光杆菌的2个亚种处为同一分支,进一步证明PSC0601菌株为美人鱼发光杆菌。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Isolation and Identification of Photobacterium damselae subsp.damselae（PDD） from Tongue Sole[J]. Yang Nan,Zhang Zhiqiang,Wu Tonglei,Zhu Jianxin,Fu Yanfang,Han Hongsheng,Wang Hongbin,Shi Qiumei,Gao Guisheng. Animal Husbandry and Feed Science. 2018(02)
[2]中草药对美人鱼发光杆菌的体外抑菌试验[J]. 王洪彬,李永慧,吴同垒,张召兴,张志强,高桂生,史秋梅. 黑龙江畜牧兽医. 2018(06)
[3]大菱鲆源美人鱼发光杆菌杀鱼亚种的分离鉴定[J]. 吴同垒,张志强,李巧玲,潘晓艺,张艳英,高桂生,史秋梅. 中国兽医学报. 2018(02)
[4]卵形鲳鲹Tf、TNFα和C-Lys的组织分布及对美人鱼发光杆菌感染的响应[J]. 宋沙沙,马红玲,冯娟,苏友禄,程长洪,郭志勋. 南方水产科学. 2017(02)
[5]条石鲷（Oplegnathus fasciatus）源美人鱼发光杆菌杀鱼亚种（Photobacterium damselae subsp.piscicida）的分离鉴定[J]. 王庚申,许文军,谢建军,汪玮,施慧. 渔业科学进展. 2017(02)
[6]细菌rDNA分类鉴定的方法学研究[J]. 鲁辛辛,黄艳飞,田晓波. 中华检验医学杂志. 2006(05)
本文编号：3488112
【文章来源】：中国海洋大学学报(自然科学版). 2020,50(06)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
PSC0601菌株革兰氏染色
分别从患病半滑舌鳎肝脏和肠道分离得到3株优势菌, 经过人工感染预试验证实其中优势菌PSC0601为致病菌,其他2株菌PSC0602、PSC0603均不致病。在2216E琼脂平板上25 ℃培养 24 h后, PSC0601菌株的菌落为圆形, 乳白色, 表面光滑湿润, 边缘光滑, 菌落直径 1～2 mm。病原菌在绵羊血平板上呈现典型的 β 型溶血(见图1),病原菌进行革兰氏染色,在镜下观察,呈球杆状革兰氏阴性菌(见图2箭头所示)。图2 PSC0601菌株革兰氏染色
采用通用引物扩增所分离菌株的 16S rDNA 基因,测序结果经过去除载体序列和拼接后,PSC0601菌株16S rDNA 基因的片段为1 454 bp,在NCBI数据库中进行Blast比对,结果显示PSC0601菌株与美人鱼发光杆菌的同源性最高,均都达到99%,所以不能以此直接区分PSC0601菌株为美人鱼亚种或杀鱼亚种,还要通过生理生化特性进行分析才能确定其为美人鱼亚种或杀鱼亚种。在GenBank 数据库中选取同源性较高的美人鱼杆菌菌株和不同亲缘关系的菌株的16S rDNA序列,利用 MEGA 7.0 软件构建系统发育树(见图3),进行系统进化分析,结果发现PSC0601菌株与美人鱼发光杆菌的2个亚种处为同一分支,进一步证明PSC0601菌株为美人鱼发光杆菌。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Isolation and Identification of Photobacterium damselae subsp.damselae（PDD） from Tongue Sole[J]. Yang Nan,Zhang Zhiqiang,Wu Tonglei,Zhu Jianxin,Fu Yanfang,Han Hongsheng,Wang Hongbin,Shi Qiumei,Gao Guisheng. Animal Husbandry and Feed Science. 2018(02)
[2]中草药对美人鱼发光杆菌的体外抑菌试验[J]. 王洪彬,李永慧,吴同垒,张召兴,张志强,高桂生,史秋梅. 黑龙江畜牧兽医. 2018(06)
[3]大菱鲆源美人鱼发光杆菌杀鱼亚种的分离鉴定[J]. 吴同垒,张志强,李巧玲,潘晓艺,张艳英,高桂生,史秋梅. 中国兽医学报. 2018(02)
[4]卵形鲳鲹Tf、TNFα和C-Lys的组织分布及对美人鱼发光杆菌感染的响应[J]. 宋沙沙,马红玲,冯娟,苏友禄,程长洪,郭志勋. 南方水产科学. 2017(02)
[5]条石鲷（Oplegnathus fasciatus）源美人鱼发光杆菌杀鱼亚种（Photobacterium damselae subsp.piscicida）的分离鉴定[J]. 王庚申,许文军,谢建军,汪玮,施慧. 渔业科学进展. 2017(02)
[6]细菌rDNA分类鉴定的方法学研究[J]. 鲁辛辛,黄艳飞,田晓波. 中华检验医学杂志. 2006(05)
本文编号：3488112
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3488112.html
