致病性副溶血弧菌VP0630株的分离鉴定及其对凡纳滨对虾免疫酶活力的影响
发布时间：2021-11-10 23:49
为分析天津地区养殖凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei暴发性死亡的原因,采用生理生化法、16S rRNA基因序列分析及AP4套式PCR方法对从患病凡纳滨对虾（体长5～6 cm）肝胰腺中分离得到的优势菌VP0630进行了病原菌分离鉴定和致病性研究,采用注射感染法对凡纳滨对虾进行攻毒试验,试验设对照组和感染组,每组设3个平行,每个平行各30尾对虾,感染组每尾虾注射3×107 CFU/mL的副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus 25μL,分别于注射后3、6、9、12、24、48、72、96 h时,检测凡纳滨对虾体内免疫酶活力的变化情况。结果表明:经鉴定,优势菌株VP0630属于致病性副溶血弧菌,理化特性鉴定概率为99%,pir毒力基因检测呈阳性;注射感染试验显示,对虾96 h时的累积死亡率达78.37%;酶活力检测显示,对照组对虾血清和肝胰腺中溶菌酶（LYS）、酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（SOD）、碱性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（ACP）和总抗氧化能力（T-AOC）6种酶活力在0～96 h时无显著性变化（P>0.05）,而...
【文章来源】：大连海洋大学学报. 2020,35(04)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
VP0630菌株AP4 PCR扩增结果
为研究菌株VP0630的致病性,利用AP4套式PCR方法对分离菌株进一步开展毒力基因pir检测,检测结果如图2所示。套式PCR结果显示,两轮扩增产物均为阳性,表明菌株VP0630为致病性副溶血弧菌。2.2 人工感染试验
从表3可见:对照组血清中6种酶活力在3～96 h时无显著性差异(P>0.05),感染组6种酶活力均呈现先升高后降低的趋势;感染组LYS和T-AOC酶活力在12 h时达到最高, 96 h时酶活力降到最低且与对照组无显著性差异(P>0.05);感染组ALP酶活力在12 h时达到最高,72 h时酶活力降到最低且与对照组无显著性差异(P>0.05);感染组ACP酶活力在9 h时达到最高,96 h时降到最低且显著低于对照组水平(P<0.05);SOD和PO酶活力在6 h时达到最高,之后逐渐降低,96 h时降到最低且与对照组无显著性差异(P>0.05)。表3 注射副溶血弧菌后凡纳滨对虾血清中6种酶活力的变化Tab.3 Change in activities of six enzymes in serum of Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei challenged with Vibrio parahaemolyticus 组别group 时间/htime 溶菌酶/(U·L-1)LYS 碱性磷酸酶/(U·L-1)ALP 酸性磷酸酶/(U·L-1)ACP 超氧化物酶/(U·mL-1)SOD 酚氧化物酶/(U·L-1)PO 总抗氧化能力/(U·mL-1)T-AOC 对照组control group 3 4.04±0.17g 48.00±1.17e 7.55±0.20bc 132.07±3.42c 26.09±1.09c 14.25±0.35e 6 4.00±0.15g 47.68±1.79e 7.70±0.25bc 131.00±4.24c 26.11±1.17c 14.85±0.21e 9 4.07±0.15g 49.12±0.99e 7.65±0.30bc 133.07±3.07c 25.75±1.95c 14.65±0.17e 12 4.06±0.10g 49.50±1.05 e 7.60±0.15bc 131.57±3.50c 26.55±1.05c 14.69±0.21e 24 4.06±0.12g 49.09±1.21e 7.50±0.15bc 130.07±2.97c 26.47±1.11c 14.35±0.35e 48 4.08±0.16g 49.28±1.27e 7.45±0.17bc 131.67±3.21c 25.11±1.47c 14.45±0.27e 72 4.05±0.13g 47.68±1.71e 7.52±0.22bc 130.07±3.57c 26.61±0.97c 14.52±0.32e 96 3.98±0.19g 49.08±1.06e 7.48±0.18bc 129.07±4.21c 26.21±1.09c 14.50±0.31e 感染组infected group 3 5.18±0.32de 60.68±3.39cd 7.84±0.47b 142.40±8.26bc 25.95±2.22c 19.10±1.00bc 6 5.96±0.21bc 64.56±2.22bc 9.27±0.31a 162.13±5.41a 34.79±2.06a 19.60±0.65abc 9 6.42±0.20ab 70.01±2.14ab 10.09±0.30a 150.01±5.22ab 34.65±1.40a 20.43±0.63ab 12 6.70±0.30a 72.40±3.14a 10.04±0.43a 158.32±7.65ab 33.38±1.45a 21.51±0.92a 24 5.54±0.21cd 64.33±2.22bc 8.26±0.31b 148.28±5.41ab 31.07±1.45ab 17.93±0.63cd 48 4.76±0.22ef 59.21±2.30cd 6.80±0.32cd 145.17±5.61ab 28.24±1.51bc 16.14±0.68de 72 4.18±0.21fg 51.34±2.22e 6.22±0.31de 140.66±5.41bc 24.91±1.45c 15.57±0.65e 96 4.01±0.20g 55.41±2.14de 5.67±0.30e 129.86±5.22c 23.33±1.40c 15.72±0.63e 注:同列中标有不同字母者表示组间有显著性差异(P<0.05),标有相同字母者表示组间无显著性差异(P>0.05),下同Note:The means with different letters within the same column are significantly different in the groups at the 0.05 probability level, and the means with the same letter within the same column are not significant differences, et sequentia
【参考文献】：
期刊论文
[1]凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病（AHPND）病原分离鉴定及其致病性分析[J]. 贾丹,史成银,黄倢,张庆利,万晓媛,许华,刘冉阳,王海波,郭程程,谢国驷. 渔业科学进展. 2018(03)
[2]副溶血弧菌对凡纳滨对虾肝胰腺抗氧化酶活性和基因表达的影响[J]. 赵伟,王雷,刘梅,蒋克勇,齐灿灿,杨广,王宝杰. 中国水产科学. 2017(06)
[3]天津地区副溶血弧菌分离株血清型、部分毒力基因的分布和耐药性调查[J]. 徐赟霞,赵良炜,吴艳辉,张丽,崔露文. 天津农学院学报. 2017(03)
[4]墨吉明对虾c型溶菌酶基因的克隆及表达[J]. 史黎黎,周婷婷,李逸群,曾坤辉,陈兆明,王成桂,章双. 广东海洋大学学报. 2017(03)
[5]副溶血性弧菌的致病性、流行性及分子生物学检测技术研究进展[J]. 赵忠俊,于明明,王晓威,陈婕. 社区医学杂志. 2017(06)
[6]天津市南美白对虾养殖存在问题及发展对策[J]. 丁子元,包海岩,张振奎,李灏,邵蓬,郝俊. 农业与技术. 2017(02)
[7]感染溶藻弧菌对日本蟳肝胰腺免疫功能的影响[J]. 张萌萌,宁俊佳,徐善良,王春琳,王丹丽. 水产学报. 2015(12)
[8]鳗弧菌感染对斑节对虾免疫相关指标的影响[J]. 段亚飞,董宏标,王芸,刘青松,李华,张家松. 海洋科学. 2015(09)
[9]长丝鲈“突眼病”病原菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 张振国,姜巨峰,孙志景,郝爽,吴会民,冯守明. 大连海洋大学学报. 2014(06)
[10]副溶血弧菌对斑节对虾非特异性免疫酶活性的影响[J]. 段亚飞,张家松,董宏标,王芸,张真真. 水产学报. 2014(09)
本文编号：3488185
【文章来源】：大连海洋大学学报. 2020,35(04)北大核心CSCD
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【部分图文】：
VP0630菌株AP4 PCR扩增结果
为研究菌株VP0630的致病性,利用AP4套式PCR方法对分离菌株进一步开展毒力基因pir检测,检测结果如图2所示。套式PCR结果显示,两轮扩增产物均为阳性,表明菌株VP0630为致病性副溶血弧菌。2.2 人工感染试验
从表3可见:对照组血清中6种酶活力在3～96 h时无显著性差异(P>0.05),感染组6种酶活力均呈现先升高后降低的趋势;感染组LYS和T-AOC酶活力在12 h时达到最高, 96 h时酶活力降到最低且与对照组无显著性差异(P>0.05);感染组ALP酶活力在12 h时达到最高,72 h时酶活力降到最低且与对照组无显著性差异(P>0.05);感染组ACP酶活力在9 h时达到最高,96 h时降到最低且显著低于对照组水平(P<0.05);SOD和PO酶活力在6 h时达到最高,之后逐渐降低,96 h时降到最低且与对照组无显著性差异(P>0.05)。表3 注射副溶血弧菌后凡纳滨对虾血清中6种酶活力的变化Tab.3 Change in activities of six enzymes in serum of Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei challenged with Vibrio parahaemolyticus 组别group 时间/htime 溶菌酶/(U·L-1)LYS 碱性磷酸酶/(U·L-1)ALP 酸性磷酸酶/(U·L-1)ACP 超氧化物酶/(U·mL-1)SOD 酚氧化物酶/(U·L-1)PO 总抗氧化能力/(U·mL-1)T-AOC 对照组control group 3 4.04±0.17g 48.00±1.17e 7.55±0.20bc 132.07±3.42c 26.09±1.09c 14.25±0.35e 6 4.00±0.15g 47.68±1.79e 7.70±0.25bc 131.00±4.24c 26.11±1.17c 14.85±0.21e 9 4.07±0.15g 49.12±0.99e 7.65±0.30bc 133.07±3.07c 25.75±1.95c 14.65±0.17e 12 4.06±0.10g 49.50±1.05 e 7.60±0.15bc 131.57±3.50c 26.55±1.05c 14.69±0.21e 24 4.06±0.12g 49.09±1.21e 7.50±0.15bc 130.07±2.97c 26.47±1.11c 14.35±0.35e 48 4.08±0.16g 49.28±1.27e 7.45±0.17bc 131.67±3.21c 25.11±1.47c 14.45±0.27e 72 4.05±0.13g 47.68±1.71e 7.52±0.22bc 130.07±3.57c 26.61±0.97c 14.52±0.32e 96 3.98±0.19g 49.08±1.06e 7.48±0.18bc 129.07±4.21c 26.21±1.09c 14.50±0.31e 感染组infected group 3 5.18±0.32de 60.68±3.39cd 7.84±0.47b 142.40±8.26bc 25.95±2.22c 19.10±1.00bc 6 5.96±0.21bc 64.56±2.22bc 9.27±0.31a 162.13±5.41a 34.79±2.06a 19.60±0.65abc 9 6.42±0.20ab 70.01±2.14ab 10.09±0.30a 150.01±5.22ab 34.65±1.40a 20.43±0.63ab 12 6.70±0.30a 72.40±3.14a 10.04±0.43a 158.32±7.65ab 33.38±1.45a 21.51±0.92a 24 5.54±0.21cd 64.33±2.22bc 8.26±0.31b 148.28±5.41ab 31.07±1.45ab 17.93±0.63cd 48 4.76±0.22ef 59.21±2.30cd 6.80±0.32cd 145.17±5.61ab 28.24±1.51bc 16.14±0.68de 72 4.18±0.21fg 51.34±2.22e 6.22±0.31de 140.66±5.41bc 24.91±1.45c 15.57±0.65e 96 4.01±0.20g 55.41±2.14de 5.67±0.30e 129.86±5.22c 23.33±1.40c 15.72±0.63e 注:同列中标有不同字母者表示组间有显著性差异(P<0.05),标有相同字母者表示组间无显著性差异(P>0.05),下同Note:The means with different letters within the same column are significantly different in the groups at the 0.05 probability level, and the means with the same letter within the same column are not significant differences, et sequentia
【参考文献】：
期刊论文
[1]凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病（AHPND）病原分离鉴定及其致病性分析[J]. 贾丹,史成银,黄倢,张庆利,万晓媛,许华,刘冉阳,王海波,郭程程,谢国驷. 渔业科学进展. 2018(03)
[2]副溶血弧菌对凡纳滨对虾肝胰腺抗氧化酶活性和基因表达的影响[J]. 赵伟,王雷,刘梅,蒋克勇,齐灿灿,杨广,王宝杰. 中国水产科学. 2017(06)
[3]天津地区副溶血弧菌分离株血清型、部分毒力基因的分布和耐药性调查[J]. 徐赟霞,赵良炜,吴艳辉,张丽,崔露文. 天津农学院学报. 2017(03)
[4]墨吉明对虾c型溶菌酶基因的克隆及表达[J]. 史黎黎,周婷婷,李逸群,曾坤辉,陈兆明,王成桂,章双. 广东海洋大学学报. 2017(03)
[5]副溶血性弧菌的致病性、流行性及分子生物学检测技术研究进展[J]. 赵忠俊,于明明,王晓威,陈婕. 社区医学杂志. 2017(06)
[6]天津市南美白对虾养殖存在问题及发展对策[J]. 丁子元,包海岩,张振奎,李灏,邵蓬,郝俊. 农业与技术. 2017(02)
[7]感染溶藻弧菌对日本蟳肝胰腺免疫功能的影响[J]. 张萌萌,宁俊佳,徐善良,王春琳,王丹丽. 水产学报. 2015(12)
[8]鳗弧菌感染对斑节对虾免疫相关指标的影响[J]. 段亚飞,董宏标,王芸,刘青松,李华,张家松. 海洋科学. 2015(09)
[9]长丝鲈“突眼病”病原菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 张振国,姜巨峰,孙志景,郝爽,吴会民,冯守明. 大连海洋大学学报. 2014(06)
[10]副溶血弧菌对斑节对虾非特异性免疫酶活性的影响[J]. 段亚飞,张家松,董宏标,王芸,张真真. 水产学报. 2014(09)
本文编号：3488185
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