野生与养殖大鲵肠道微生物多样性分析及产酶活性研究
发布时间：2021-11-14 15:50
大鲵（Andrias davidianus）属两栖纲有尾目隐鳃鲵科,为国家二级保护动物,是两栖纲动物的最大物种,也是动物进化的“活化石”。大鲵属肉食性动物,食性主要为蛋白类食物。大鲵的生长发育及摄食种类受季节性影响较大,大鲵是两栖纲与爬行纲的过渡类群,其消化道结构复杂,肠道微生物组成多样。研究大鲵肠道微生物多样性及产酶活性不仅可以给野生大鲵保护提供依据,也可以为大鲵人工化养殖预防病害提供依据。本论文研究以野生大鲵与养殖大鲵两种样品为实验材料,通过微生物纯培养技术与免培养技术全面的分析两类生境下的大鲵肠道微生物的组成与群落多样性分析;通过微生物胞外酶研究方法对两种样品进行肠道细菌产胞外酶筛选。野生大鲵肠道微生物多样性及产酶活性分析采用纯培养技术分离野生大鲵肠道细菌,选用引物27F/1492R扩增后进行分子生物学鉴定。结果表明,野生大鲵分离到的86株肠道细菌可划分为2个门6个属,变形菌门（Proteobacteria,80.23%）:罗维登斯菌属,爱德华氏菌属,柠檬酸杆菌属;厚壁菌门（Firmicutes,19.77%）:漫游球菌属,芽孢杆菌属,赖氨酸芽孢菌属。应用胞外酶培养基筛选野生大鲵...
【文章来源】：陕西理工大学陕西省
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 大鲵
1.2 大鲵研究现状
1.3 肠道微生物研究现状
1.4 肠道细菌
1.5 古菌研究
1.6 微生物胞外酶
1.7 纯培养技术
1.8 免培养技术
第2章 野生大鲵肠道细菌多样性及产酶活性分析
2.1 材料与仪器
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验仪器
2.1.3 试剂
2.2 实验方法
2.2.1 野生大鲵肠道细菌纯培养多样性
2.2.1.1 肠道细菌分离培养
2.2.1.2 肠道细菌 16S rRNA扩增
2.2.1.3 肠道细菌 16S rRNA分子鉴定
2.2.2 野生大鲵肠道细菌纯培养产酶活性
2.2.3 野生大鲵肠道细菌免培养多样性
2.2.3.1 肠道细菌总DNA提取
2.2.3.2 肠道细菌总DNA的 16S rRNA扩增
2.2.3.3 大肠杆菌感受态DH5α 细胞制备及转化
2.2.3.4 阳性克隆子筛选及鉴定
2.2.4 野生大鲵肠道古菌免培养多样性
2.2.4.1 肠道古菌总DNA提取
2.2.4.2 肠道古菌总DNA的 16S rRNA扩增
2.2.4.3 阳性克隆子筛选及鉴定
2.3 结果和分析
2.3.1 野生大鲵肠道细菌纯培养多样性结果
2.3.1.1 肠道细菌分离结果
2.3.1.2 肠道细菌 16S rRNA扩增结果
2.3.1.3 肠道细菌 16S rRNA测序结果及系统发育构建
2.3.2 野生大鲵肠道细菌纯培养产酶活性结果
2.3.3 野生大鲵肠道细菌免培养多样性结果
2.3.3.1 肠道细菌总DNA提取结果
2.3.3.2 肠道细菌总DNA的 16S rRNA扩增结果
2.3.3.3 大肠杆菌感受态DH5α 转化结果
2.3.3.4 阳性克隆鉴定结果及系统发育构建
2.3.4 野生大鲵肠道古菌免培养多样性结果
2.3.4.1 肠道古菌总DNA提取结果
2.3.4.2 肠道古菌总DNA的 16S rRNA扩增结果
2.3.4.3 阳性克隆鉴定结果及系统发育构建
2.4 小结与讨论
第3章 人工养殖大鲵肠道细菌多样性及产酶活性分析
3.1 材料与仪器
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验仪器
3.1.3 试剂
3.2 实验方法
3.2.1 养殖大鲵肠道细菌纯培养多样性
3.2.1.1 肠道细菌分离培养
3.2.1.2 肠道细菌 16S rRNA扩增
3.2.1.3 肠道细菌 16S rRNA分子鉴定
3.2.2 养殖大鲵肠道细菌纯培养产酶活性
3.2.3 养殖大鲵肠道细菌免培养多样性
3.2.3.1 肠道细菌总DNA提取
3.2.3.2 肠道细菌总DNA的 16S rRNA扩增
3.2.3.3 大肠杆菌感受态细胞转化
3.2.3.4 阳性克隆子筛选及鉴定
3.3 结果与分析
3.3.1 养殖大鲵肠道细菌纯培养多样性结果
3.3.1.1 肠道细菌分离培养结果
3.3.1.2 肠道细菌 16S rRNA扩增结果
3.3.1.3 肠道细菌 16S rRNA测序结果及系统发育构建
3.3.2 养殖大鲵肠道细菌纯培养产酶活性结果
3.3.3 养殖大鲵肠道细菌免培养多样性结果
3.3.3.1 肠道细菌总DNA提取结果
3.3.3.2 大肠杆菌感受态DH5α 转化结果
3.3.3.3 肠道细菌总DNA的 16S rRNA扩增结果
3.3.3.4 阳性克隆鉴定结果及系统发育构建
3.4 小结与讨论
总结与讨论
参考文献
攻读硕士学位期间学术成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]木霉内切葡聚糖酶的研究现状及应用[J]. 李青青,黄晓梅,范金霞,陈秀玲,孙旭东,李东玉. 基因组学与应用生物学. 2015(10)
[2]微生物非培养技术在环境微生物领域的研究进展[J]. 梅冰,陆翔,王永乔,王静,张瑞,李显秋. 化学工程师. 2015(10)
[3]产蛋白酶嗜热菌Anoxybacillus sp.紫外诱变研究[J]. 应长青,洪心,李旭颖,郑宸,尹凡硕,谢辉,韩松,秦博. 哈尔滨医科大学学报. 2015(05)
[4]嗜热链球菌关键生产特性分子水平的研究进展[J]. 赵春雨,崔艳华,曲晓军,俞婷,张春玲. 中国乳品工业. 2015(10)
[5]脂肪酶的制备及其在皮革工业中的应用[J]. 周秀军,周利芳,周建民,隋喜龙. 西部皮革. 2015(20)
[6]“挂壁”法筛选常温稻秆腐解菌及其降解能力研究[J]. 韦中,徐春淼,郑海平,廖汉鹏,王世梅,沈其荣,徐阳春. 农业环境科学学报. 2015(10)
[7]红鳍东方鲀稚鱼肠道可培养细菌的多样性[J]. 李艳宇,任盟,张丛尧,王连顺,朱莹,马悦欣. 水产科学. 2015(10)
[8]蜡质芽孢杆菌AT31防治根结线虫的应用技术探讨[J]. 刘元兵,舒畅,高扬,夏长松,闫俊会,张雪雪. 农药科学与管理. 2015(10)
[9]基于16S rRNA基因序列分析家蚕肠道细菌的多样性[J]. 许刚,孙振丽,胡小龙,薛仁宇,曹广力,贡成良. 蚕业科学. 2015(04)
[10]产蛋白酶酵母菌的选育及酶学特性[J]. 徐亚男,史学伟,童军茂,谈思维,安洋洋,肖婧. 现代食品科技. 2015(10)
博士论文
[1]扬州鹅肠道微生物多样性及其受饲粮纤维水平的调控研究[D]. 刘蓓一.扬州大学 2012
硕士论文
[1]内蒙古锡林郭勒牧区健康家畜肠道菌群多样性研究[D]. 白娜.内蒙古农业大学 2014
[2]小菜蛾肠道菌群对宿主生长发育的影响[D]. 林美玲.福建农林大学 2014
[3]中国大鲵Sox2和Sox19基因cDNA全长克隆及其组织表达分析[D]. 何青.四川农业大学 2013
[4]南美白对虾专用益生菌研究[D]. 郝凯.西北农林科技大学 2013
[5]太湖养殖中华绒螯蟹肠道菌群多样性研究[D]. 狄盼盼.上海海洋大学 2013
[6]雪豹肠道菌群多样性研究[D]. 刘广帅.曲阜师范大学 2013
[7]饲喂不同纤维分解菌对鹅肠道菌群多样性的影响[D]. 马凤莲.吉林农业大学 2012
[8]羊胚胎胃肠道细菌分离与鉴定[D]. 于超.吉林农业大学 2012
[9]陕西省太白县大鲵资源调查及其变动情况分析[D]. 王启军.西北农林科技大学 2012
[10]几种常用实验动物与人肠道主要菌群多样性比较[D]. 李伟.西南大学 2011
本文编号：3494917
【文章来源】：陕西理工大学陕西省
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 大鲵
1.2 大鲵研究现状
1.3 肠道微生物研究现状
1.4 肠道细菌
1.5 古菌研究
1.6 微生物胞外酶
1.7 纯培养技术
1.8 免培养技术
第2章 野生大鲵肠道细菌多样性及产酶活性分析
2.1 材料与仪器
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验仪器
2.1.3 试剂
2.2 实验方法
2.2.1 野生大鲵肠道细菌纯培养多样性
2.2.1.1 肠道细菌分离培养
2.2.1.2 肠道细菌 16S rRNA扩增
2.2.1.3 肠道细菌 16S rRNA分子鉴定
2.2.2 野生大鲵肠道细菌纯培养产酶活性
2.2.3 野生大鲵肠道细菌免培养多样性
2.2.3.1 肠道细菌总DNA提取
2.2.3.2 肠道细菌总DNA的 16S rRNA扩增
2.2.3.3 大肠杆菌感受态DH5α 细胞制备及转化
2.2.3.4 阳性克隆子筛选及鉴定
2.2.4 野生大鲵肠道古菌免培养多样性
2.2.4.1 肠道古菌总DNA提取
2.2.4.2 肠道古菌总DNA的 16S rRNA扩增
2.2.4.3 阳性克隆子筛选及鉴定
2.3 结果和分析
2.3.1 野生大鲵肠道细菌纯培养多样性结果
2.3.1.1 肠道细菌分离结果
2.3.1.2 肠道细菌 16S rRNA扩增结果
2.3.1.3 肠道细菌 16S rRNA测序结果及系统发育构建
2.3.2 野生大鲵肠道细菌纯培养产酶活性结果
2.3.3 野生大鲵肠道细菌免培养多样性结果
2.3.3.1 肠道细菌总DNA提取结果
2.3.3.2 肠道细菌总DNA的 16S rRNA扩增结果
2.3.3.3 大肠杆菌感受态DH5α 转化结果
2.3.3.4 阳性克隆鉴定结果及系统发育构建
2.3.4 野生大鲵肠道古菌免培养多样性结果
2.3.4.1 肠道古菌总DNA提取结果
2.3.4.2 肠道古菌总DNA的 16S rRNA扩增结果
2.3.4.3 阳性克隆鉴定结果及系统发育构建
2.4 小结与讨论
第3章 人工养殖大鲵肠道细菌多样性及产酶活性分析
3.1 材料与仪器
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验仪器
3.1.3 试剂
3.2 实验方法
3.2.1 养殖大鲵肠道细菌纯培养多样性
3.2.1.1 肠道细菌分离培养
3.2.1.2 肠道细菌 16S rRNA扩增
3.2.1.3 肠道细菌 16S rRNA分子鉴定
3.2.2 养殖大鲵肠道细菌纯培养产酶活性
3.2.3 养殖大鲵肠道细菌免培养多样性
3.2.3.1 肠道细菌总DNA提取
3.2.3.2 肠道细菌总DNA的 16S rRNA扩增
3.2.3.3 大肠杆菌感受态细胞转化
3.2.3.4 阳性克隆子筛选及鉴定
3.3 结果与分析
3.3.1 养殖大鲵肠道细菌纯培养多样性结果
3.3.1.1 肠道细菌分离培养结果
3.3.1.2 肠道细菌 16S rRNA扩增结果
3.3.1.3 肠道细菌 16S rRNA测序结果及系统发育构建
3.3.2 养殖大鲵肠道细菌纯培养产酶活性结果
3.3.3 养殖大鲵肠道细菌免培养多样性结果
3.3.3.1 肠道细菌总DNA提取结果
3.3.3.2 大肠杆菌感受态DH5α 转化结果
3.3.3.3 肠道细菌总DNA的 16S rRNA扩增结果
3.3.3.4 阳性克隆鉴定结果及系统发育构建
3.4 小结与讨论
总结与讨论
参考文献
攻读硕士学位期间学术成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]木霉内切葡聚糖酶的研究现状及应用[J]. 李青青,黄晓梅,范金霞,陈秀玲,孙旭东,李东玉. 基因组学与应用生物学. 2015(10)
[2]微生物非培养技术在环境微生物领域的研究进展[J]. 梅冰,陆翔,王永乔,王静,张瑞,李显秋. 化学工程师. 2015(10)
[3]产蛋白酶嗜热菌Anoxybacillus sp.紫外诱变研究[J]. 应长青,洪心,李旭颖,郑宸,尹凡硕,谢辉,韩松,秦博. 哈尔滨医科大学学报. 2015(05)
[4]嗜热链球菌关键生产特性分子水平的研究进展[J]. 赵春雨,崔艳华,曲晓军,俞婷,张春玲. 中国乳品工业. 2015(10)
[5]脂肪酶的制备及其在皮革工业中的应用[J]. 周秀军,周利芳,周建民,隋喜龙. 西部皮革. 2015(20)
[6]“挂壁”法筛选常温稻秆腐解菌及其降解能力研究[J]. 韦中,徐春淼,郑海平,廖汉鹏,王世梅,沈其荣,徐阳春. 农业环境科学学报. 2015(10)
[7]红鳍东方鲀稚鱼肠道可培养细菌的多样性[J]. 李艳宇,任盟,张丛尧,王连顺,朱莹,马悦欣. 水产科学. 2015(10)
[8]蜡质芽孢杆菌AT31防治根结线虫的应用技术探讨[J]. 刘元兵,舒畅,高扬,夏长松,闫俊会,张雪雪. 农药科学与管理. 2015(10)
[9]基于16S rRNA基因序列分析家蚕肠道细菌的多样性[J]. 许刚,孙振丽,胡小龙,薛仁宇,曹广力,贡成良. 蚕业科学. 2015(04)
[10]产蛋白酶酵母菌的选育及酶学特性[J]. 徐亚男,史学伟,童军茂,谈思维,安洋洋,肖婧. 现代食品科技. 2015(10)
博士论文
[1]扬州鹅肠道微生物多样性及其受饲粮纤维水平的调控研究[D]. 刘蓓一.扬州大学 2012
硕士论文
[1]内蒙古锡林郭勒牧区健康家畜肠道菌群多样性研究[D]. 白娜.内蒙古农业大学 2014
[2]小菜蛾肠道菌群对宿主生长发育的影响[D]. 林美玲.福建农林大学 2014
[3]中国大鲵Sox2和Sox19基因cDNA全长克隆及其组织表达分析[D]. 何青.四川农业大学 2013
[4]南美白对虾专用益生菌研究[D]. 郝凯.西北农林科技大学 2013
[5]太湖养殖中华绒螯蟹肠道菌群多样性研究[D]. 狄盼盼.上海海洋大学 2013
[6]雪豹肠道菌群多样性研究[D]. 刘广帅.曲阜师范大学 2013
[7]饲喂不同纤维分解菌对鹅肠道菌群多样性的影响[D]. 马凤莲.吉林农业大学 2012
[8]羊胚胎胃肠道细菌分离与鉴定[D]. 于超.吉林农业大学 2012
[9]陕西省太白县大鲵资源调查及其变动情况分析[D]. 王启军.西北农林科技大学 2012
[10]几种常用实验动物与人肠道主要菌群多样性比较[D]. 李伟.西南大学 2011
本文编号：3494917
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