鳗弧菌多克隆抗体和单克隆抗体的制备及其特性分析
发布时间：2021-11-15 13:05
鳗弧菌感染鳗鲡、鲈鱼、黄鱼、鲑鱼、香鱼、大菱鲆、牙鲆、虹鳟、对虾等广大水产养殖生物,具有发病快,致死率高和流行广泛特点,给水产养殖业造成较大的危害,受到广泛关注,成为研究热点。制备鳗弧菌（SMW5）全菌灭活抗原,免疫新西兰兔,制备兔抗多克隆抗体血清,其效价达1:320000;对鳗弧菌检测灵敏度为1×104CFU/mL;与副溶血弧菌（ATC17802）、嗜水气单胞菌（JS01-1）和类志贺邻单胞菌（LCCi190625）有微弱的交叉反应;Western-Blot表明多克隆抗体与抗原的40 kDa蛋白有结合,与25-35 kDa的蛋白也有抗原抗体反应。所制备的3株单克隆抗体,其中1H9效价好、抗体分泌稳定、灵敏度高、特异性强,可应用于鳗弧菌ELISA或金标试纸条的研制。以灭活鳗弧菌（SMW5）全菌为抗原,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞融合技术,制备鳗弧菌单克隆抗体:细胞融合率达94.6%,融合阳性率达到62.4%;筛选得到3株单克隆抗体分别命名为1H9、1C12、6F8,阳性细胞株培养上清的效价分别为 1:6400、1:3200、1:800,细胞亚类分别为 IgG2a、IgM、IgG...
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１鳗弧菌形态??．．ｒｍｒｏ?ａｎｕａｒｕｍ??
图１．２质粒ｐＪＭｌ??Ｆｉｇ．１．２?Ｔｈｅ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｏｆ?ｐＪＭＩ??１型鳗弧菌不含质粒，但毒性很强，其铁吸收系茶酚胺铁载体和两种１ＲＯＭＰ。此种铁载体与鳗表现，缺乏同源性。与大肠杆菌素作用相似。者［３３，３４］不排除这两者之间存在进化关系，但更产物（ＥＣＰ）具有溶血活性。溶血素为单一的动物致死性。鳗弧菌的溶血素可使鳗鲡致死，低于ＫＴＣ时溶解活性下降，最适作用温度为２０血红白为细菌提营养需要。??
３．３多克隆抗体的纯化??将制备的鳗弧菌（ＳＭＴ５）多克隆抗体采用饱和硫酸铵溶液纯化法纯化。结??果如图２．１所示。在１０？１５?ｋＤａ和４４？５５?ｋＤａ出现明显的条带。??Ｉ纯化前?２纯化后．?３ＰＭ??一?????－一Ｓ??；?！??图２．１鳗弧菌０Ｓ７ＷＴＦ５）多克隆抗体的纯化与ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳??Ｆｉｇ．２，１?Ｔｈｅ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐＡｂ?ｏｆ?Ｖ．ａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍ?（ＳＭＷ５）??３．４多克隆抗体的效价检测??３「ｉａｊ??２５．１??＼＼?■－多抗效价??
【参考文献】：
期刊论文
[1]鳗弧菌多克隆抗体的制备及其特性分析[J]. 王雪妹,吴斌,黄小红,樊海平. 科学养鱼. 2015(01)
[2]5株鲆鲽鱼类病原菌多克隆抗体的制备与应用[J]. 朱岩松,王秀华,韩雯,王锐,黄倢. 渔业科学进展. 2013(03)
[3]迟缓爱德华氏菌胶体金快速检测试纸的研制[J]. 辛志明. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2011(10)
[4]应用间接荧光抗体技术检测林蛙嗜水气单胞菌[J]. 白雪梅,李太元,杨兴,李艳茹,孙丹丹,董丹. 水产科学. 2010(10)
[5]抗鲶爱德华氏菌多克隆抗体的制备及特性分析[J]. 李华,李重实,李明,李强,叶仕根. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2010(10)
[6]鳗弧菌（Vibrio anguillarum）的病原生物学研究现状（下）[J]. 孟思妤,孟长明,陈昌福. 渔业致富指南. 2010(02)
[7]鳗弧菌（Vibrio anguillarum）的病原生物学研究现状（上）[J]. 孟思妤,孟长明,陈昌福. 渔业致富指南. 2010(01)
[8]迟缓爱德华氏菌间接ELISA快速检测法[J]. 白方方,兰建新,王燕,韩茵,张晓华. 中国水产科学. 2009(04)
[9]利用PCR技术快速检测水产品中副溶血性弧菌[J]. 王豪,孙晓红. 安徽农业科学. 2009(15)
[10]双抗原夹心ELISA检测抗鳗弧菌抗体效价的研究[J]. 边慧慧,蒋继志,黄倢,李珊珊,王秀华. 科技信息. 2009(07)
博士论文
[1]鳗弧菌主要致病因子的研究[D]. 陈师勇.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2003
硕士论文
[1]抗哈维弧菌单克隆抗体的制备、特性分析与应用[D]. 李洋.大连海洋大学 2014
[2]鱼类病毒性出血性败血症病毒单克隆抗体的制备及其核蛋白基因的原核表达[D]. 杜娟.华中农业大学 2012
[3]创伤弧菌胶体金免疫层析试纸条研制[D]. 严智敏.南方医科大学 2011
[4]副溶血性弧菌特异性抗体的制备研究[D]. 翁仕强.上海海洋大学 2011
[5]副溶血弧菌耐热溶血毒素单克隆抗体的研究[D]. 张建.上海海洋大学 2011
[6]海水养殖鱼类主要细菌病多联疫苗的研制及应用[D]. 刘斌.中国海洋大学 2007
[7]欧洲鳗鲡败血症病理学和组织化学的研究[D]. 卓玉琛.福建农林大学 2007
本文编号：3496836
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１鳗弧菌形态??．．ｒｍｒｏ?ａｎｕａｒｕｍ??
图１．２质粒ｐＪＭｌ??Ｆｉｇ．１．２?Ｔｈｅ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｏｆ?ｐＪＭＩ??１型鳗弧菌不含质粒，但毒性很强，其铁吸收系茶酚胺铁载体和两种１ＲＯＭＰ。此种铁载体与鳗表现，缺乏同源性。与大肠杆菌素作用相似。者［３３，３４］不排除这两者之间存在进化关系，但更产物（ＥＣＰ）具有溶血活性。溶血素为单一的动物致死性。鳗弧菌的溶血素可使鳗鲡致死，低于ＫＴＣ时溶解活性下降，最适作用温度为２０血红白为细菌提营养需要。??
３．３多克隆抗体的纯化??将制备的鳗弧菌（ＳＭＴ５）多克隆抗体采用饱和硫酸铵溶液纯化法纯化。结??果如图２．１所示。在１０？１５?ｋＤａ和４４？５５?ｋＤａ出现明显的条带。??Ｉ纯化前?２纯化后．?３ＰＭ??一?????－一Ｓ??；?！??图２．１鳗弧菌０Ｓ７ＷＴＦ５）多克隆抗体的纯化与ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳??Ｆｉｇ．２，１?Ｔｈｅ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐＡｂ?ｏｆ?Ｖ．ａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍ?（ＳＭＷ５）??３．４多克隆抗体的效价检测??３「ｉａｊ??２５．１??＼＼?■－多抗效价??
【参考文献】：
期刊论文
[1]鳗弧菌多克隆抗体的制备及其特性分析[J]. 王雪妹,吴斌,黄小红,樊海平. 科学养鱼. 2015(01)
[2]5株鲆鲽鱼类病原菌多克隆抗体的制备与应用[J]. 朱岩松,王秀华,韩雯,王锐,黄倢. 渔业科学进展. 2013(03)
[3]迟缓爱德华氏菌胶体金快速检测试纸的研制[J]. 辛志明. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2011(10)
[4]应用间接荧光抗体技术检测林蛙嗜水气单胞菌[J]. 白雪梅,李太元,杨兴,李艳茹,孙丹丹,董丹. 水产科学. 2010(10)
[5]抗鲶爱德华氏菌多克隆抗体的制备及特性分析[J]. 李华,李重实,李明,李强,叶仕根. 中国海洋大学学报(自然科学版). 2010(10)
[6]鳗弧菌（Vibrio anguillarum）的病原生物学研究现状（下）[J]. 孟思妤,孟长明,陈昌福. 渔业致富指南. 2010(02)
[7]鳗弧菌（Vibrio anguillarum）的病原生物学研究现状（上）[J]. 孟思妤,孟长明,陈昌福. 渔业致富指南. 2010(01)
[8]迟缓爱德华氏菌间接ELISA快速检测法[J]. 白方方,兰建新,王燕,韩茵,张晓华. 中国水产科学. 2009(04)
[9]利用PCR技术快速检测水产品中副溶血性弧菌[J]. 王豪,孙晓红. 安徽农业科学. 2009(15)
[10]双抗原夹心ELISA检测抗鳗弧菌抗体效价的研究[J]. 边慧慧,蒋继志,黄倢,李珊珊,王秀华. 科技信息. 2009(07)
博士论文
[1]鳗弧菌主要致病因子的研究[D]. 陈师勇.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2003
硕士论文
[1]抗哈维弧菌单克隆抗体的制备、特性分析与应用[D]. 李洋.大连海洋大学 2014
[2]鱼类病毒性出血性败血症病毒单克隆抗体的制备及其核蛋白基因的原核表达[D]. 杜娟.华中农业大学 2012
[3]创伤弧菌胶体金免疫层析试纸条研制[D]. 严智敏.南方医科大学 2011
[4]副溶血性弧菌特异性抗体的制备研究[D]. 翁仕强.上海海洋大学 2011
[5]副溶血弧菌耐热溶血毒素单克隆抗体的研究[D]. 张建.上海海洋大学 2011
[6]海水养殖鱼类主要细菌病多联疫苗的研制及应用[D]. 刘斌.中国海洋大学 2007
[7]欧洲鳗鲡败血症病理学和组织化学的研究[D]. 卓玉琛.福建农林大学 2007
本文编号：3496836
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