红螯螯虾不同血细胞类群的分离及功能差异研究
发布时间：2021-11-15 21:31
甲壳动物缺乏免疫球蛋白,需要依靠天然免疫抵御病原侵袭。血细胞在甲壳动物的免疫防御体系中扮演了重要的角色,螯虾的血细胞可分为颗粒细胞（granulocytes,GC）,半颗粒细胞（semi-granulocytes,SGC）和透明细胞（hyalinocytes,HCs）三类亚群,GC与SGC是主要的细胞类型。目前,血细胞的各个类群在宿主免疫系统中承担的功能还不甚明确。研究不同类群血细胞功能,首先要对不同细胞类群进行分离纯化。本文建立了利用Percoll不连续密度梯度离心分离螯虾血细胞的方法,并对配制分离体系的缓冲液以及分离体系的密度组成进行了优化。结果发现,由20%,65%和100%的Percoll组成的分离体系分离效果最优;经过转速为500×g离心20 min之后,可将螯虾血细胞分为SGC与GC两个细胞层,经流式细胞术分析,发现细胞层纯度均在95%以上,死亡细胞比例低于5%,可用于后续的细胞功能分析。目前认为,GC的颗粒中储存了大量proPO,可通过脱颗粒作用释放入血并参与宿主的免疫防御。SGC中也含有胞质颗粒,然而SGC是否存在脱颗粒现象之前并无研究。本文将分离纯化的SGC与GC分别...
【文章来源】：自然资源部第三海洋研究所福建省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
吞噬作用
proPO 系统反应过程见图 1 - 2。20 世纪末，Aspán 从螯虾 Pacifastacus leniusculus 中相继提纯了 proPPPAE[36]。随后，与 proPO 系统有关的蛋白分别被提纯和鉴定，于是学者们光转移到研究 proPO 系统的调控上。研究发现，proPO 系统可被少量的微分激活。SGC 的 proPO 系统可被 β-1,3-葡聚糖（β-1,3-glucans，BG）或者脂（lipopolysaccharides，LPS）激活，GC 的该系统可被 76kD 因子或者 β-1,糖结合蛋白（β-1,3-glucansbindingprotein，BGBP）激活。由于甲壳动物的主要储存于 GC 的颗粒中，因此，76kD 因子和 BGBP 对甲壳动物 proPO 系释放具有重要的调控作用。proPO 系统还会被加热和组织的机械损伤激活[3系统的抑制则由血细胞内的 proPO 抑制剂完成，如 α2-巨球蛋白、丝氨酸抑制剂等[35]，它们可以防止该系统的过度激活，保证机体的正常功能。
图 2-1 WSSV 形态结构示意图a.完整病毒颗粒；b.核衣壳；c.病毒结构示意图资料来源：Van Etten, James L. Lesser Known Large dsDNAViruses. Springer, 2009.2.3 WSSV 的病理症状及组织病理学特征WSSV 是一种感染性强、致死率高的对虾病毒，不仅可感染大部分养殖对虾，还可感染几种蟹和桡足动物[83]，此外，还发现一些昆虫、海葵、浮游生物会携带WSSV[84]。感染 WSSV 后，病虾头胸甲和附肢会出现白斑，白斑多时连成一片，使甲壳变白。这些白斑可能是表皮细胞不正常的钙盐沉积[85]或者细胞分泌物的运输途径被破坏导致的[86]。也有某些甲壳动物宿主（如螯虾），在感染 WSSV 后甲壳上不会出现白斑[87]。在感染 WSD 的早期阶段，患病对虾摄食减少，易昏睡，
【参考文献】：
期刊论文
[1]血蓝蛋白免疫学功能、分子基础与应用新进展[J]. 张泽蕙,张佩,章跃陵. 汕头大学学报(自然科学版). 2016(01)
[2]不同光周期下红螯螯虾幼虾摄食节律的研究[J]. 蒋琦辰,张文逸,谭红月,张悦恬,杨家新,李枫. 淡水渔业. 2012(05)
[3]甲壳动物免疫系统概述及其图论表示(英文)[J]. 马寨璞,张繁霜,井爱芹. Agricultural Science & Technology. 2010(08)
[4]红螯螯虾主要病害的研究进展[J]. 潘晓艺,沈锦玉,曹铮,尹文林,郝贵杰,姚嘉赟,徐洋. 水产科学. 2009(08)
[5]水产甲壳动物免疫学研究进展与前景展望[J]. 邹广众,孙虎山. 生命科学仪器. 2009(06)
[6]对虾白斑综合症病毒核衣壳蛋白VP664的鉴定研究[J]. 熊生良,杨丰. 台湾海峡. 2007(01)
[7]甲壳动物血细胞及其在免疫防御中的功能[J]. 姚翠鸾,王志勇,相建海. 动物学研究. 2006(05)
[8]虾类体液免疫研究进展[J]. 曹剑香,简纪常,吴灶和. 湛江海洋大学学报(自然科学). 2006(01)
[9]WSSV具蛋白酶活性肽段的检测[J]. 刘庆慧,黄倢,贾佩峤,王清印. 中国水产科学. 2004(06)
[10]中华绒螯蟹血细胞的显微、亚显微形态结构及其分类[J]. 陆宏达. 水生生物学报. 2002(05)
本文编号：3497529
【文章来源】：自然资源部第三海洋研究所福建省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
吞噬作用
proPO 系统反应过程见图 1 - 2。20 世纪末，Aspán 从螯虾 Pacifastacus leniusculus 中相继提纯了 proPPPAE[36]。随后，与 proPO 系统有关的蛋白分别被提纯和鉴定，于是学者们光转移到研究 proPO 系统的调控上。研究发现，proPO 系统可被少量的微分激活。SGC 的 proPO 系统可被 β-1,3-葡聚糖（β-1,3-glucans，BG）或者脂（lipopolysaccharides，LPS）激活，GC 的该系统可被 76kD 因子或者 β-1,糖结合蛋白（β-1,3-glucansbindingprotein，BGBP）激活。由于甲壳动物的主要储存于 GC 的颗粒中，因此，76kD 因子和 BGBP 对甲壳动物 proPO 系释放具有重要的调控作用。proPO 系统还会被加热和组织的机械损伤激活[3系统的抑制则由血细胞内的 proPO 抑制剂完成，如 α2-巨球蛋白、丝氨酸抑制剂等[35]，它们可以防止该系统的过度激活，保证机体的正常功能。
图 2-1 WSSV 形态结构示意图a.完整病毒颗粒；b.核衣壳；c.病毒结构示意图资料来源：Van Etten, James L. Lesser Known Large dsDNAViruses. Springer, 2009.2.3 WSSV 的病理症状及组织病理学特征WSSV 是一种感染性强、致死率高的对虾病毒，不仅可感染大部分养殖对虾，还可感染几种蟹和桡足动物[83]，此外，还发现一些昆虫、海葵、浮游生物会携带WSSV[84]。感染 WSSV 后，病虾头胸甲和附肢会出现白斑，白斑多时连成一片，使甲壳变白。这些白斑可能是表皮细胞不正常的钙盐沉积[85]或者细胞分泌物的运输途径被破坏导致的[86]。也有某些甲壳动物宿主（如螯虾），在感染 WSSV 后甲壳上不会出现白斑[87]。在感染 WSD 的早期阶段，患病对虾摄食减少，易昏睡，
【参考文献】：
期刊论文
[1]血蓝蛋白免疫学功能、分子基础与应用新进展[J]. 张泽蕙,张佩,章跃陵. 汕头大学学报(自然科学版). 2016(01)
[2]不同光周期下红螯螯虾幼虾摄食节律的研究[J]. 蒋琦辰,张文逸,谭红月,张悦恬,杨家新,李枫. 淡水渔业. 2012(05)
[3]甲壳动物免疫系统概述及其图论表示(英文)[J]. 马寨璞,张繁霜,井爱芹. Agricultural Science & Technology. 2010(08)
[4]红螯螯虾主要病害的研究进展[J]. 潘晓艺,沈锦玉,曹铮,尹文林,郝贵杰,姚嘉赟,徐洋. 水产科学. 2009(08)
[5]水产甲壳动物免疫学研究进展与前景展望[J]. 邹广众,孙虎山. 生命科学仪器. 2009(06)
[6]对虾白斑综合症病毒核衣壳蛋白VP664的鉴定研究[J]. 熊生良,杨丰. 台湾海峡. 2007(01)
[7]甲壳动物血细胞及其在免疫防御中的功能[J]. 姚翠鸾,王志勇,相建海. 动物学研究. 2006(05)
[8]虾类体液免疫研究进展[J]. 曹剑香,简纪常,吴灶和. 湛江海洋大学学报(自然科学). 2006(01)
[9]WSSV具蛋白酶活性肽段的检测[J]. 刘庆慧,黄倢,贾佩峤,王清印. 中国水产科学. 2004(06)
[10]中华绒螯蟹血细胞的显微、亚显微形态结构及其分类[J]. 陆宏达. 水生生物学报. 2002(05)
本文编号：3497529
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