云纹石斑鱼胚胎冷冻保存及成活鱼苗转录组测序分析
发布时间：2021-11-16 18:39
云纹石斑鱼（Epinephelus moara）是东南亚最重要的水产养殖种类之一,主要分布在中国西北太平洋和沿海地区,是目前作为唯一用于制作刺身的石斑鱼种类,肉质细嫩、味道鲜美,具有极高的经济价值。超低温冷冻保存技术可为云纹石斑鱼石斑鱼种质资源的保存提供一个很好的途径。近年来,由于鱼胚体积大（直径为≥1mm）、双层膜、卵膜通透性差、卵黄囊含水量多,其冷冻保存比哺乳类胚胎困难许多。到目前为止,只有极少数品种的鱼胚能够成功冷冻保存。因此,加强鱼胚低温生物学的基础研究,对于阐明鱼类胚胎冷冻损伤机制,更好地制定相应的鱼胚冷冻保存方法,攻克鱼胚冷冻保存的技术难关具有重要作用。本文研究计划不同于以往大多数的鱼类胚胎冷冻研究路线,摒弃了对胚胎冷冻操作方法的单一摸索,采取三条技术路线相结合的策略。一方面利用传统玻璃化液PMG3S和PMG3T对云纹石斑鱼胚胎存活影响进行初步研究,分析不同玻璃化冷冻保存条件对云纹石斑鱼胚胎存活的影响,进行定向优化;另一方面,在传统玻璃化液研究的基础上,根据低温生物学领域的最新研究动向,研发新型非渗透性冷冻保护剂（NPC）,并探究NPC在云纹石斑鱼胚胎冷冻保存中的应用;同时...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：108 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
—1一种玻璃化冷冻保护剂对不同发育时期云纹石斑鱼胚胎的影响
上海海洋大学硕士学位论文1738.35±22.05%）（P>0.05），均高于对照组（11.11±5.65%）（P<0.05）（图2—2）。图2—2两种玻璃化冷冻保护剂对单一发育时期胚胎的影响Fig.2-2TheeffectoftwovitrificationsolutionsonTBstageembryosofE.moara2.3.3三种浓度玻璃化冷冻保护剂对单一发育时期胚胎的影响结果显示，用35%、40%、45%浓度PMG3S处理过的尾芽期胚胎，随着PMG3S浓度的增加，胚胎存活率显著降低（P<0.05）；其中35%PMG3S组的存活率最高，为72.05±17.33%；40%PMG3S组的存活率其次，为63.36±19.94%；45%PMG3S组生存率最低，为36.79±24.01%，远低于平均存活率57.49%。并且45%PMG3S组的正常发育率为21.27%，同样远低于35%和40%PMG3S组（31.5±7.06%和25.26±14.65%）（P<0.05）。在畸形率方面，三组之间无显著差异（P>0.05），平均为36.13%，但均显著高于对照组（P<0.05），且各分组的胚胎存活率和正常发育率均显著低于对照组（86.76±10.67%，70.65±7.12%，P<0.05）（图2—3a）。结果显示，用35%、40%和45%的PMG3T处理的尾芽期胚胎，同样随着玻璃化液浓度的增加，胚胎存活率显著降低（P<0.05）。35%、40%、45%处理的存活率分别为55.18±12.24%、43.93±19.17%和37.11±16.75%，平均为45.41%。在胚胎正常发育率方面，三种浓度条件下处理的胚胎的正常发育率差异并不显著（P>0.05），平均为11.04%。但胚胎畸形率方面，45%PMG3T处理组的胚胎畸形
上海海洋大学硕士学位论文18率显著低于35%和40%PMG3T组（P<0.05），平均为31.04%。各分组的生存率和正常发育率同样均显著低于对照组（P<0.05）（图2—3b）。图2—3三种浓度玻璃化冷冻保护剂对单一发育时期胚胎的影响Fig.2-3Theeffectof35%,40%and45%PMG3S(a)andPMG3T(b)onTBstageembryos2.3.4冷冻保存成活统计结果显示，利用不同浓度的玻璃化液PMG3S和PMG3T冷冻保存各发育阶段胚胎中，肌节期、尾芽期和胚体颤动期的胚胎获得成活个体，35%、40%、45%浓度PMG3S和45%浓度PMG3T处理组获得成活个体。冷冻保存胚胎的存活率在尾
【参考文献】：
期刊论文
[1]云纹石斑鱼（♀）×蓝身大斑石斑鱼（♂）远缘杂交后代发育与生长[J]. 唐江,田永胜,李振通,成美玲,马文辉,庞尊方,李文升,王晓梅,翟介明. 广东海洋大学学报. 2019(04)
[2]低温胁迫导致斑马鱼尾部发育畸形的分子机制[J]. 李文豪,冉皓宇,陈良标. 基因组学与应用生物学. 2018(06)
[3]低温胁迫对鱼类PI3K/AKT/GSK-3β信号通路的影响[J]. 王金凤,胡鹏,牛虹博,陈良标. 生物学杂志. 2016(06)
[4]云纹石斑鱼仔、稚、幼鱼的形态观察[J]. 刘银华,张雅芝,钟幼平,李军,谢仰杰,胡家财. 应用海洋学学报. 2016(04)
[5]云纹石斑鱼胚胎发育及仔、稚、幼鱼形态观察[J]. 宋振鑫,陈超,翟介明,李炎璐,马文辉,王鲁,庞尊方,吴雷明. 渔业科学进展. 2012(03)
[6]Perspectives:Gene expression in fisheries management[J]. Jennifer L.NIELSEN,Scott A.PAVEY. Current Zoology. 2010(01)
[7]斜带石斑鱼仔鱼变态过程中甲状腺的发育变化[J]. 唐啸尘,刘晓春,林浩然. 水生生物学报. 2010(01)
[8]飞秒激光在生物学领域的应用[J]. 王丽,邱建荣. 激光与光电子学进展. 2010(01)
[9]不同抗冻剂对牙鲆胚胎毒性研究以及玻璃化颗粒冷冻保存方法的应用[J]. 刘本伟,陈松林,田永胜,孔晓瑜,王春花. 中国水产科学. 2007(05)
[10]超声波空化及其应用[J]. 陈辉,强颖怀,葛长路. 新技术新工艺. 2005(07)
博士论文
[1]三种海水鱼类胚胎玻璃化冷冻保存研究[D]. 田永胜.华中农业大学 2004
硕士论文
[1]玻璃化冻存对鲫鱼卵细胞的影响[D]. 沈蔷.浙江农林大学 2013
[2]真鲷精子胚胎冷冻保存研究[D]. 丁福红.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2004
本文编号：3499370
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：108 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
—1一种玻璃化冷冻保护剂对不同发育时期云纹石斑鱼胚胎的影响
上海海洋大学硕士学位论文1738.35±22.05%）（P>0.05），均高于对照组（11.11±5.65%）（P<0.05）（图2—2）。图2—2两种玻璃化冷冻保护剂对单一发育时期胚胎的影响Fig.2-2TheeffectoftwovitrificationsolutionsonTBstageembryosofE.moara2.3.3三种浓度玻璃化冷冻保护剂对单一发育时期胚胎的影响结果显示，用35%、40%、45%浓度PMG3S处理过的尾芽期胚胎，随着PMG3S浓度的增加，胚胎存活率显著降低（P<0.05）；其中35%PMG3S组的存活率最高，为72.05±17.33%；40%PMG3S组的存活率其次，为63.36±19.94%；45%PMG3S组生存率最低，为36.79±24.01%，远低于平均存活率57.49%。并且45%PMG3S组的正常发育率为21.27%，同样远低于35%和40%PMG3S组（31.5±7.06%和25.26±14.65%）（P<0.05）。在畸形率方面，三组之间无显著差异（P>0.05），平均为36.13%，但均显著高于对照组（P<0.05），且各分组的胚胎存活率和正常发育率均显著低于对照组（86.76±10.67%，70.65±7.12%，P<0.05）（图2—3a）。结果显示，用35%、40%和45%的PMG3T处理的尾芽期胚胎，同样随着玻璃化液浓度的增加，胚胎存活率显著降低（P<0.05）。35%、40%、45%处理的存活率分别为55.18±12.24%、43.93±19.17%和37.11±16.75%，平均为45.41%。在胚胎正常发育率方面，三种浓度条件下处理的胚胎的正常发育率差异并不显著（P>0.05），平均为11.04%。但胚胎畸形率方面，45%PMG3T处理组的胚胎畸形
上海海洋大学硕士学位论文18率显著低于35%和40%PMG3T组（P<0.05），平均为31.04%。各分组的生存率和正常发育率同样均显著低于对照组（P<0.05）（图2—3b）。图2—3三种浓度玻璃化冷冻保护剂对单一发育时期胚胎的影响Fig.2-3Theeffectof35%,40%and45%PMG3S(a)andPMG3T(b)onTBstageembryos2.3.4冷冻保存成活统计结果显示，利用不同浓度的玻璃化液PMG3S和PMG3T冷冻保存各发育阶段胚胎中，肌节期、尾芽期和胚体颤动期的胚胎获得成活个体，35%、40%、45%浓度PMG3S和45%浓度PMG3T处理组获得成活个体。冷冻保存胚胎的存活率在尾
【参考文献】：
期刊论文
[1]云纹石斑鱼（♀）×蓝身大斑石斑鱼（♂）远缘杂交后代发育与生长[J]. 唐江,田永胜,李振通,成美玲,马文辉,庞尊方,李文升,王晓梅,翟介明. 广东海洋大学学报. 2019(04)
[2]低温胁迫导致斑马鱼尾部发育畸形的分子机制[J]. 李文豪,冉皓宇,陈良标. 基因组学与应用生物学. 2018(06)
[3]低温胁迫对鱼类PI3K/AKT/GSK-3β信号通路的影响[J]. 王金凤,胡鹏,牛虹博,陈良标. 生物学杂志. 2016(06)
[4]云纹石斑鱼仔、稚、幼鱼的形态观察[J]. 刘银华,张雅芝,钟幼平,李军,谢仰杰,胡家财. 应用海洋学学报. 2016(04)
[5]云纹石斑鱼胚胎发育及仔、稚、幼鱼形态观察[J]. 宋振鑫,陈超,翟介明,李炎璐,马文辉,王鲁,庞尊方,吴雷明. 渔业科学进展. 2012(03)
[6]Perspectives:Gene expression in fisheries management[J]. Jennifer L.NIELSEN,Scott A.PAVEY. Current Zoology. 2010(01)
[7]斜带石斑鱼仔鱼变态过程中甲状腺的发育变化[J]. 唐啸尘,刘晓春,林浩然. 水生生物学报. 2010(01)
[8]飞秒激光在生物学领域的应用[J]. 王丽,邱建荣. 激光与光电子学进展. 2010(01)
[9]不同抗冻剂对牙鲆胚胎毒性研究以及玻璃化颗粒冷冻保存方法的应用[J]. 刘本伟,陈松林,田永胜,孔晓瑜,王春花. 中国水产科学. 2007(05)
[10]超声波空化及其应用[J]. 陈辉,强颖怀,葛长路. 新技术新工艺. 2005(07)
博士论文
[1]三种海水鱼类胚胎玻璃化冷冻保存研究[D]. 田永胜.华中农业大学 2004
硕士论文
[1]玻璃化冻存对鲫鱼卵细胞的影响[D]. 沈蔷.浙江农林大学 2013
[2]真鲷精子胚胎冷冻保存研究[D]. 丁福红.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2004
本文编号：3499370
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