刺激隐核虫的分离鉴定及其幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备
发布时间：2021-11-21 05:56
刺激隐核虫是对海水鱼养殖业危害最大的寄生虫之一,能感染大多数海水鱼品种,造成大量死亡。本研究从福建省长乐、宁德、福鼎三地分离得到寄生于牙鲆、大黄鱼、石斑鱼的三株刺激隐核虫。通过ITS序列对这三株刺激隐核虫进行分子生物学鉴定,并以ITS-1序列和HSP70基因序列为分子标记对这三株刺激隐核虫做序列和系统发育分析,发现这三株刺激隐核虫的同源性很高。以褐牙鲆作为刺激隐核虫的感染模式鱼,在水温22℃-24℃下,对刺激隐核虫进行实验室传代,详细观察其生活史及各阶段的形态结构,比较不同温度处理过的包囊的孵化率和孵出幼虫感染能力,分别采集感染2周后和4周后的褐牙鲆血清做抑动试验。目前已成功进行了40个周期的传代保种,每个周期为8d～10d,表明褐牙鲆可作为刺激隐核虫的模式宿主鱼,为刺激隐核虫的研究提供稳定材料来源。刺激隐核虫滋养体存在于鳃片、体表和鳍条上,呈比针尖略大的白点状,为圆形或椭圆形,移行过程形状会改变,大小为100 μm-400μm,外覆一层纤毛,经过瑞氏染色后观察到滋养体内4叶大核。包囊前体膜壁薄,为圆形或椭圆形,在海水中2h～8h缓慢游动后附着于底壁。包囊透光度明显较包囊前体的低,大小...
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１?ＩＴＳ?ＰＣＲ产物电泳结果??Ｆｉｇ．２－１?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＩＴＳ?ｂｙ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｉ＇ｅｓｉｓ?ｄｅｆｅｃｔｉｏｎ??
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化ａ为感染鱼的餓片Ｉ?１、２为滋养体；ｂ为低倍境下鲍丝内的滋养体；ｃ为体表粘液中滋养体；ｄ为滋养??体的瑞氏染色。??滋养体发育成熟或受到外界刺激后脱离鱼体，成为包囊前体（图３－２－ａ），包??囊前体膜壁薄，大小与包囊相近，同Ｂｕｒｇｅｓｓ和Ｍａｔｔｈｅｗｓ＾描述的一致，包囊前??体经过２?ｈ?￣?８?ｈ缓慢游动盾附着于底壁，在１０?ｈ内膜壁增厚形成包囊。??光学显微镜下，包囊大多数为圆形或桐圆形，透光度明显较包囊前体的低（图??３－２－ｂ）。测量５５个包囊，其大小为３２８．５主３９．６叫１１ｘ４０１．２?±４７．４叫ｎ。２７?°Ｃ水??温条件下，包囊在形成后２４ｈ￣４８ｈ原生质开始出现不均等分裂，分裂出大细胞??和小细胞（图３－２－Ｃ），最终分裂成为大小相近的圆形或楠圆形小幼体（图３－２－ｄ），??然后发育成为幼虫并在包囊内快速游动，随后钻出包囊。在少数包囊内，部分幼??虫仍在游动却未钻出包囊（图３－２－６－１）
【参考文献】：
期刊论文
[1]大菱鲆刺激隐核虫病的诊治[J]. 宫春光,赵凤娇,何忠伟,孙桂清,赵振良. 科学养鱼. 2013(10)
[2]闽东海域刺激隐核虫的生活史观察及乙酸杀虫效果[J]. 邬阳,牛素芳,金媛,毛勇,苏永全. 厦门大学学报(自然科学版). 2013(02)
[3]黄斑蓝子鱼皮肤黏液对刺激隐核虫及一些病原菌的抑杀作用[J]. 黎睿君,刘芳,王方华,李安兴. 水生生物学报. 2013(02)
[4]龙胆石斑刺激隐核虫病防治技术研究[J]. 王大鹏,何安尤,谢达祥,李长伙,陈晓汉. 水产科技情报. 2013(01)
[5]福建海水养殖业现状、存在问题与发展对策[J]. 宁岳,曾志南,苏碰皮,郑乐云,叶金聪. 福建水产. 2011(03)
[6]养殖大菱鲆隐核虫病及其治疗[J]. 王印庚,刘志伟,林春媛,陈霞,王玲,李华. 水产学报. 2011(07)
[7]福建霞浦海区刺激隐核虫虫株鉴定及生活史观察[J]. 孙志宇,郑昌峰,武晓燕,郭果为,汪彦愔,黄晓红. 福建师范大学学报(自然科学版). 2011(02)
[8]犬弓首蛔虫ITS1基因的克隆及序列分析[J]. 周荣琼,夏庆友,黄汉成,邓梦竹. 中国预防兽医学报. 2010(10)
[9]两株水牛伊氏锥虫内转录间隔区基因序列的测定与系统进化关系[J]. 石云良,李健,黄维义,张为宇,张居作,付强,张晓溪,黄文忠,何国声. 中国预防兽医学报. 2009(11)
[10]福建省主要养殖区海水网箱养殖鱼类刺激隐核虫病的调查及防控对策[J]. 苏跃中. 水产科技情报. 2009(01)
博士论文
[1]石斑鱼TLRs功能及刺激隐核虫感染后免疫相关基因表达分析[D]. 李言伟.中山大学 2012
本文编号：3508914
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１?ＩＴＳ?ＰＣＲ产物电泳结果??Ｆｉｇ．２－１?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＩＴＳ?ｂｙ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｉ＇ｅｓｉｓ?ｄｅｆｅｃｔｉｏｎ??
２．２．３?ＨＳＰ了０部分序列的ＰＣＲ扩増及测序分析结果??２．２．３．１?ＨＳＰ７０部分序列的ＰＣＲ扩増??ＰＣ民扩增产物于１?％的琼脂糖凝胶电泳进行电泳，可见大小约５００ｂｐ（图２－３），??与预期相符。阳性克隆菌ＰＣ民验证再次得到约５００ｂｐ片段。??ｂｏ?Ｍ?１?２?３?４??２０００??５００??１００??图２－３ＨＳＰ７０部分序列的ＰＣＲ产物的电泳??Ｆｉｇ．２＿３?ＰＣ艮?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｐａｒｔｉａｌ?ＨＳＰ７０?ｇｅｎｅ?ｂｙ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??过?ｅｔ：ｅｃｔｉｏ?田??注：Ｍ?为?ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ，?１－３?别为?ＣＬ］２０９、ＦＤ１２１０、ＮＤＩ３０４?株?ＰＣ民产物，４?为空白对照??２．２．３．２?ＨＳＰ７０基因部分序列分析??各取５个阳性克隆菌液由上海生工生物工程公司测序，兰个虫株的ＨＳＰ７０??部分序列大小均为４７８ｂｐ，编码１５９个氨基酸。ＣＬ１２０９株基因序列与ＦＤ１２１０??株完全一致，与ＮＤ１３０４株的同源性为９９．３７％，存在Ｈ个碱基差异＂’（图２－４），??分别位于距３＇端１７８ｂｐ处（Ｃ／Ｔ），距３’端２７０ｂｐ处（Ｇ／Ａ），距３＇端４３２ｂｐ处（Ｔ／Ｃ）。??而其编码的氨基酸序列仅有２个位点的差异，即９０个氨基酸（Ｒ／Ｋ）和第１４４??个氨基酸（Ｖ／Ａ）。??将化１２０９的ＨＳＰ７０基因库列
化ａ为感染鱼的餓片Ｉ?１、２为滋养体；ｂ为低倍境下鲍丝内的滋养体；ｃ为体表粘液中滋养体；ｄ为滋养??体的瑞氏染色。??滋养体发育成熟或受到外界刺激后脱离鱼体，成为包囊前体（图３－２－ａ），包??囊前体膜壁薄，大小与包囊相近，同Ｂｕｒｇｅｓｓ和Ｍａｔｔｈｅｗｓ＾描述的一致，包囊前??体经过２?ｈ?￣?８?ｈ缓慢游动盾附着于底壁，在１０?ｈ内膜壁增厚形成包囊。??光学显微镜下，包囊大多数为圆形或桐圆形，透光度明显较包囊前体的低（图??３－２－ｂ）。测量５５个包囊，其大小为３２８．５主３９．６叫１１ｘ４０１．２?±４７．４叫ｎ。２７?°Ｃ水??温条件下，包囊在形成后２４ｈ￣４８ｈ原生质开始出现不均等分裂，分裂出大细胞??和小细胞（图３－２－Ｃ），最终分裂成为大小相近的圆形或楠圆形小幼体（图３－２－ｄ），??然后发育成为幼虫并在包囊内快速游动，随后钻出包囊。在少数包囊内，部分幼??虫仍在游动却未钻出包囊（图３－２－６－１）
【参考文献】：
期刊论文
[1]大菱鲆刺激隐核虫病的诊治[J]. 宫春光,赵凤娇,何忠伟,孙桂清,赵振良. 科学养鱼. 2013(10)
[2]闽东海域刺激隐核虫的生活史观察及乙酸杀虫效果[J]. 邬阳,牛素芳,金媛,毛勇,苏永全. 厦门大学学报(自然科学版). 2013(02)
[3]黄斑蓝子鱼皮肤黏液对刺激隐核虫及一些病原菌的抑杀作用[J]. 黎睿君,刘芳,王方华,李安兴. 水生生物学报. 2013(02)
[4]龙胆石斑刺激隐核虫病防治技术研究[J]. 王大鹏,何安尤,谢达祥,李长伙,陈晓汉. 水产科技情报. 2013(01)
[5]福建海水养殖业现状、存在问题与发展对策[J]. 宁岳,曾志南,苏碰皮,郑乐云,叶金聪. 福建水产. 2011(03)
[6]养殖大菱鲆隐核虫病及其治疗[J]. 王印庚,刘志伟,林春媛,陈霞,王玲,李华. 水产学报. 2011(07)
[7]福建霞浦海区刺激隐核虫虫株鉴定及生活史观察[J]. 孙志宇,郑昌峰,武晓燕,郭果为,汪彦愔,黄晓红. 福建师范大学学报(自然科学版). 2011(02)
[8]犬弓首蛔虫ITS1基因的克隆及序列分析[J]. 周荣琼,夏庆友,黄汉成,邓梦竹. 中国预防兽医学报. 2010(10)
[9]两株水牛伊氏锥虫内转录间隔区基因序列的测定与系统进化关系[J]. 石云良,李健,黄维义,张为宇,张居作,付强,张晓溪,黄文忠,何国声. 中国预防兽医学报. 2009(11)
[10]福建省主要养殖区海水网箱养殖鱼类刺激隐核虫病的调查及防控对策[J]. 苏跃中. 水产科技情报. 2009(01)
博士论文
[1]石斑鱼TLRs功能及刺激隐核虫感染后免疫相关基因表达分析[D]. 李言伟.中山大学 2012
本文编号：3508914
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