斑节对虾耐氨氮相关基因整合素β、Rh蛋白、钠氢离子转运体的鉴定及功能研究
发布时间：2021-11-22 23:51
为研究斑节对虾（Penaeus monodon）耐氨氮的分子机制,本文利用RACE技术首次克隆了参与斑节对虾氨氮应激响应的整合素β（PmItgb）基因及氨氮解毒代谢途径上的Rh蛋白（Pm Rh）基因和钠氢离子转运体（Pm NHE）基因的cDNA全长,并对其进行了生物信息学分析。通过QPCR技术分析了三个基因在各组织中的分布、在96h急性氨氮胁迫下的表达变化模式,证明了其与氨氮胁迫存在相关性。本文对PmItgb在斑节对虾的生长发育、蜕皮、先天免疫和氨氮诱导的细胞凋亡等几个方面进行了探究。我们的研究结果在一定程度上表明PmItgb基因与氨氮胁迫所导致的生长发育缓慢及先天免疫系统功能下降等现象之间可能存在关联。Pm Rh和Pm NHE基因是氨氮解毒代谢途径的基因,本论文并利用RNAi技术探究了它们与氨转运排泄其他相关基因之间的关系以及高氨氮环境下这两个基因的沉默与死亡速率之间的关系。为研究Pm Rh基因和Pm NHE基因在斑节对虾氨氮的解毒代谢过程中所起的作用奠定了基础。斑节对虾整合素β（PmItgb）基因的cDNA全长3011bp（Gen Bank associated NO:MK2643...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PmItgb核酸序列及理论氨基酸序列展示PmItgb(GenebankNo.MK264335)，启动码(ATG)和终止码(TAA)用方形框出
上海海洋大学硕士学位论文22图2-2PmItgb与其他物种Itgb基因之间多重序列比对结果PmItgb基因的多重序列比对分析，(A)PmItgbcDNA推导的氨基酸序列与不同物种的多重比对。用于比对的序列包括：中国对虾(AHH32890.1)、凡纳滨对虾(ADK56123.1)、太平洋对虾(CAA67357.1)和中华绒螯蟹(AYX40719.1)。表示相似性的序列标志显示在比对的顶部，氨基酸的数量列在比对的右侧。整合素β亚基结构域、vonWillebrand因子A型结构域、表皮生长因子样结构域和整合素B尾部分别用红色、绿色、蓝色和黄色下划线突出显示。Fig2-2DeducedaminoacidsequencealignmentofPmItgbtootherspeciesSequenceanalysisofPmItgbgene.MultiplealignmentofthededucedaminoacidsequenceofPmItgbcDNAwithvariousspecies.Sequencesusedforalignmentinclude:Fenneropenaeuschinensis(AHH32890.1),Litopenaeusvannamei(ADK56123.1),Pacifastacusleniusculus(CAA67357.1),Eriocheirsinensis(AYX40719.1).Sequencelogorepresentingthesimilarityisshownatthetopofalignmentsandnumbersofaminoacidarelistedontherightsideofalignments.Integrinbetasubunitsdomain,vonWillebrandfactorTypeAdomain,Epidermalgrowthfactor-likedomain,IntegrinBtaildomain,highlightedbyred,green,blue,andyellowunderline,respectively.图2-3基于氨基酸序列比较的PmItgb在不同生物中的系统发育树Fig2-3ThephylogenetictreeofPmItgbindifferentorganismsbasedonaminoacidsequencecomparisons.
上海海洋大学硕士学位论文233.3PmItgbmRNA在不同组织中的表达分析采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测PmItgb在不同组织中的表达谱。结果如图2-4所示，PmItgb转录本在血细胞、淋巴、肠、心脏、肝胰脏、鳃、肌肉、表皮、胃、脑、眼柄、卵巢和精巢等组织中均有表达，PmItgb在血细胞和淋巴中的mRNA表达水平特别高，在肠、心脏、肝胰腺和鳃中也有较高水平的表达。图2-4PmItgb在各组织的相对表达量实时荧光定量PCR检测PmItgb在斑节对虾中的组织差异表达水平，EF-1α作为内参基因进行对照，对于每个组织，数据显示为三个独立个体的平均值±SD(标准差)。小写字母不同表示各组之间具有显著差异(P<0.05)。Fig2-4ExpressioncharacterizationofPmItgbinvarioustissuesasrevealedbyquantitativereal-timePCRfromhealthyshrimp.TheamountofPmItgbmRNAwasnormalizedtotheEF-1atranscriptlevel.Foreachtissue,dataareshownasmeans±SD(standarddeviation)ofthreeseparateindividuals.Barswithdifferentlettersweresignificantlydifferent(P<0.05).
本文编号：3512688
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PmItgb核酸序列及理论氨基酸序列展示PmItgb(GenebankNo.MK264335)，启动码(ATG)和终止码(TAA)用方形框出
上海海洋大学硕士学位论文22图2-2PmItgb与其他物种Itgb基因之间多重序列比对结果PmItgb基因的多重序列比对分析，(A)PmItgbcDNA推导的氨基酸序列与不同物种的多重比对。用于比对的序列包括：中国对虾(AHH32890.1)、凡纳滨对虾(ADK56123.1)、太平洋对虾(CAA67357.1)和中华绒螯蟹(AYX40719.1)。表示相似性的序列标志显示在比对的顶部，氨基酸的数量列在比对的右侧。整合素β亚基结构域、vonWillebrand因子A型结构域、表皮生长因子样结构域和整合素B尾部分别用红色、绿色、蓝色和黄色下划线突出显示。Fig2-2DeducedaminoacidsequencealignmentofPmItgbtootherspeciesSequenceanalysisofPmItgbgene.MultiplealignmentofthededucedaminoacidsequenceofPmItgbcDNAwithvariousspecies.Sequencesusedforalignmentinclude:Fenneropenaeuschinensis(AHH32890.1),Litopenaeusvannamei(ADK56123.1),Pacifastacusleniusculus(CAA67357.1),Eriocheirsinensis(AYX40719.1).Sequencelogorepresentingthesimilarityisshownatthetopofalignmentsandnumbersofaminoacidarelistedontherightsideofalignments.Integrinbetasubunitsdomain,vonWillebrandfactorTypeAdomain,Epidermalgrowthfactor-likedomain,IntegrinBtaildomain,highlightedbyred,green,blue,andyellowunderline,respectively.图2-3基于氨基酸序列比较的PmItgb在不同生物中的系统发育树Fig2-3ThephylogenetictreeofPmItgbindifferentorganismsbasedonaminoacidsequencecomparisons.
上海海洋大学硕士学位论文233.3PmItgbmRNA在不同组织中的表达分析采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测PmItgb在不同组织中的表达谱。结果如图2-4所示，PmItgb转录本在血细胞、淋巴、肠、心脏、肝胰脏、鳃、肌肉、表皮、胃、脑、眼柄、卵巢和精巢等组织中均有表达，PmItgb在血细胞和淋巴中的mRNA表达水平特别高，在肠、心脏、肝胰腺和鳃中也有较高水平的表达。图2-4PmItgb在各组织的相对表达量实时荧光定量PCR检测PmItgb在斑节对虾中的组织差异表达水平，EF-1α作为内参基因进行对照，对于每个组织，数据显示为三个独立个体的平均值±SD(标准差)。小写字母不同表示各组之间具有显著差异(P<0.05)。Fig2-4ExpressioncharacterizationofPmItgbinvarioustissuesasrevealedbyquantitativereal-timePCRfromhealthyshrimp.TheamountofPmItgbmRNAwasnormalizedtotheEF-1atranscriptlevel.Foreachtissue,dataareshownasmeans±SD(standarddeviation)ofthreeseparateindividuals.Barswithdifferentlettersweresignificantlydifferent(P<0.05).
本文编号：3512688
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