斜带石斑鱼IL-10和IL-16的原核表达及其在鱼体内组织特异性表达研究

发布时间：2021-11-26 09:04

　　白细胞介素-10（IL-10）和白细胞介素-16（IL-16）是重要的多效细胞因子,在特异性和非特异性免疫中发挥着重要作用。本研究以我国重要的海水养殖鱼类斜带石斑鱼为对象,利用同源克隆以及RACE技术获得了斜带石斑鱼IL-10基因cDNA全长,为1104 bp,其ORF为564 bp,编码187个氨基酸,预测蛋白分子量为21.7 kDa,等电点为5.74,含有信号肽,无跨膜区。基于IL-10蛋白氨基酸同源性及进化分析显示,斜带石斑鱼与吉富罗非鱼（Oreochromis niloticus）亲缘关系较近,表明所获得的序列是斜带石斑鱼IL-10基因。根据GenBank已登录的基因片段,利用同源克隆和RACE技术获得了斜带石斑鱼IL-16基因cDNA序列,全长为2859 bp,其ORF为1896 bp,编码631个氨基酸,预测蛋白分子量为68.2 kDa,理论等电点为5.36,无信号肽,无跨膜区。基于IL-16氨基酸序列的进化分析表明斜带石斑鱼与大黄鱼（Larimichthys crocea）亲缘关系较近,说明所获得的序列是斜带石斑鱼IL-16基因。利用双酶切和质粒重组技术构建了重组基因原核... 

【文章来源】：广东海洋大学广东省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词
1 文献综述
    1.1 斜带石斑鱼概况
    1.2 细胞因子
    1.3 白细胞介素-10
        1.3.1 白细胞介素-10和白细胞介素-10家族
        1.3.2 鱼类中白细胞介素-10的研究进展
    1.4 白细胞介素-16
    1.5 本研究的目的意义
2 斜带石斑鱼IL-10和IL-16基因的克隆及其生物信息学分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验用鱼
        2.1.2 载体与菌株
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 主要溶液和试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 斜带石斑鱼组织样品的预处理
        2.2.2 斜带石斑鱼总RNA的提取
        2.2.3 斜带石斑鱼IL-10和IL-16基因的克隆
        2.2.4 斜带石斑鱼IL-10和IL-16基因序列生物信息学分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 斜带石斑鱼IL-10基因的克隆结果和分析
        2.3.2 斜带石斑鱼IL-16基因的克隆结果和分析
    2.4 讨论
3 斜带石斑鱼IL-10和IL-16的原核重组表达
    3.1 实验材料
        3.1.1 菌株和载体
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要溶液
        3.1.4 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 IL-10的原核表达
        3.2.2 IL-16的原核表达
    3.3 结果与分析
        3.3.1 IL-10的原核表达结果与分析
        3.3.2 IL-16的原核表达结果与分析
    3.4 讨论
4 斜带石斑鱼IL-10和IL-16基因组织特异性表达研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验用鱼
        4.1.2 主要试剂和溶液
        4.1.3 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 斜带石斑鱼的暂养
        4.2.2 灭活哈维氏弧菌的制备
        4.2.3 斜带石斑鱼免疫实验和样品的采集
        4.2.4 荧光定量用引物
        4.2.5 cDNA一链的合成
        4.2.6 荧光定量PCR
        4.2.7 数据统计与分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 灭活哈维氏弧菌免疫石斑鱼前后IL-10和IL-16的组织表达差异
        4.3.2 灭活哈维氏弧菌免疫石斑鱼后IL-10在各组织中的时空表达差异
        4.3.3 灭活哈维氏弧菌免疫石斑鱼后IL-16在各组织中的时空表达差异
    4.4 讨论
5 结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]一株斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）病原菌的分离与鉴定[J]. 林克冰,吴建绍,黄兆斌,葛辉,朱志煌,孙敏秋.  福建水产. 2014(06)
[2]华南地区海水养殖鱼类主要弧菌病原的分离与鉴定[J]. 崔婧,范雪亭,刘文竹,李红月,周永灿,王世锋,谢珍玉.  海南大学学报(自然科学版). 2014(03)
[3]点带石斑鱼溃烂病病原菌的分离与鉴定[J]. 王雪惠,耿绪云,李翔,董学旺,孙金生.  天津农学院学报. 2012(03)
[4]斜带石斑鱼烂尾病病原菌的分离与鉴定[J]. 梅冰,周永灿,徐先栋,王世峰,谢珍玉.  热带海洋学报. 2010(06)
[5]红鳍东方鲀皮肤溃烂病病原菌的分离与鉴定[J]. 王斌,于兰萍,胡亮,李艳,刘双凤,姜志强.  中国水产科学. 2008(02)
[6]舟山养殖大黄鱼烂尾病中哈氏弧菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 石亚素,童国忠,薛超波,顾松叶,龚红霞.  中国卫生检验杂志. 2005(03)
[7]鱼类细胞因子研究进展[J]. 陈旭衍,侯亚义.  水生生物学报. 2004(06)
[8]网箱养殖青石斑鱼的溃疡病病原[J]. 覃映雪,池信才,苏永全,王德祥,陈信忠.  水产学报. 2004(03)
[9]海水网箱养殖鲈鱼皮肤溃疡病及其病原菌的研究[J]. 王国良,金珊,薛良义,钱云霞.  黄渤海海洋. 2000(03)
[10]海水网箱养殖高体鰤弧菌病病理学研究[J]. 吴后波,潘金培.  水产学报. 1999(02)

硕士论文
[1]红笛鲷重组激活基因克隆及表达分析[D]. 张雪利.广东海洋大学 2012



本文编号：3519824