蛙源伊丽莎白菌的鉴定、分子流行病学及其碳青霉烯酶多样性研究
发布时间：2021-11-27 00:44
伊丽莎白菌是一类具有多重耐药性的条件致病菌,可感染新生儿和免疫缺陷人群,被感染患者具有较高的死亡率,近年来被报道可感染蛙类,能导致蛙类发生暴发性歪头症。该病传染性强,死亡率高,治愈率低,是危害我国养殖蛙类的最主要病害之一。早期人们对伊丽莎白菌的认识较少,其属内物种的鉴定和分类系统比较混乱,基础研究工作相对滞后,尤其在我国养殖蛙类中的流行特点及耐药机制研究十分匮乏。本研究在对蛙源伊丽莎白菌准确鉴定的基础上,通过全基因组测序、比较基因组学和分子分型,研究病原米尔伊丽莎白菌种内和属内物种的系统发育关系,比较流行菌株的克隆关系;基于全基因组数据,研究伊丽莎白菌碳青霉烯类耐药机制,揭示其碳青霉烯酶变异体多样性,主要研究内容和结论如下:一,首次确定米尔伊丽莎白菌为黑斑蛙歪头病的病原。对采自多个养殖区的患歪头病的黑斑蛙进行了系统的病原学诊断,排除了蛙病毒、壶菌和寄生虫感染的可能性,发现细菌感染的阳性率为190/213,基于16S r DNA和gyr B基因序列,将优势分离株鉴定为米尔伊丽莎白菌;对自然发病蛙脑组织的病理观察和超微结构分析显示,被感染蛙的脑膜增厚,出现炎性病变,神经元细胞受损;人工感染...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：161 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
伊丽莎白菌分类学变化
华中农业大学2020届博士研究生学位论文24从其核心基因组中注释到了67个假定毒力基因，同时他们还发现多个暴发菌株的淀粉利用酶SusD发生了改变，与荚膜多糖合成相关的多糖转运蛋白Wza或Wzc被部分或完全破坏，由此推测，暴发菌株荚膜多糖的缺失可能会促进其粘附和定植，导致其抗原性的降低，通过改变菌体表面粘附力而使其更容易在宿主体内扩散。此外，他们还对114个伊丽莎白菌基因组中的cps基因簇（荚膜多糖合成酶基因簇，capsularpolysaccharidesynthesiscluster）进行了分析，发现该属内物种的cps基因簇有17个不同的基因组合模式，而本次疾病暴发中的分离株cps基因簇却非常一致，同属于一个类型（typeI），因此推测该类型的cps基因簇在这些分离株的致病力中发挥了一定的作用。除了基于基因组的致病基因研究外，Huang等（2019）等建立了E.miricola感染黑斑蛙的模型，用来研究伊丽莎白菌对机体的损伤机制（图1.2）。研究发现，病原菌主要定植在宿主的大脑，导致神经源性器官损伤，伊丽莎白菌在感染黑斑蛙时，可导致黑斑蛙的氧化应激反应（oxidativestress），从而引起线粒体应激（mitochondrialstress）和未折叠蛋白反应（unfoldedproteinresponse），用来消除细胞内自由基，作者认为动物在感染伊丽莎白菌后，其抗氧化系统功能会逐渐减弱，从而进一步加剧了疾病的发生状态（Huangetal2019）。图1.2米尔伊丽莎白菌对黑斑蛙的系统感染模型（Huang等2019）Fig.1.2SystemicinfectionmodelofE.miricolaagainstP.nigromaculatus(Huangetal2019)
华中农业大学2020届博士研究生学位论文28表2.1不同采样地样品采集信息Table2.1Informationofsamplefromdifferentlocations采集地Location采样时间Time样品量Number益阳2016.8.942宁乡2016.8.1430长沙2016.8.1435株洲2016.10.326衡阳2016.9.522邵阳2016.7.2031武冈2016.7.2127图2.1湖南黑斑蛙采样地图Fig.2.1Themapofsampledblack-spottedfrogsfromHunanprovince2.3方法2.3.1样品的处理及病原检测将样品蛙冰园冬眠麻醉”后，用剪刀从大脑下方剪断脊柱，取蛙的皮肤、肝脏、肾脏、脑、胆囊和肌肉等组织做病原检测，样品组织DNA的提取参照康为世纪DNA
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国两栖动物寄生原虫及其对宿主的影响研究[J]. 卿芯妤,杨承忠,赵元莙. 教育教学论坛. 2020(17)
[2]蛙脑膜炎败血金黄杆菌分离株的药敏试验[J]. 曾彦钦,林秋娟,潘平,陈震,林福忠,蔡鹤鸣. 福建畜牧兽医. 2020(02)
[3]脑膜败血伊丽莎白菌耐药性及同源性分析[J]. 刘喆,王丽凤,叶丽艳,沈定霞. 解放军医学院学报. 2020(03)
[4]脑膜败血伊丽莎白菌医院感染的特点与药敏分析[J]. 李文杰,林少华,骆丰,俞洪,孙桂芹. 中华医院感染学杂志. 2020(03)
[5]黑斑蛙“白内障”病原菌分离及药敏试验[J]. 王湘,侯强红,舒鸣,白玲,张光友. 畜禽业. 2019(12)
[6]β-内酰胺酶抑制剂研究进展[J]. 韩江雪,刘忆霜,肖春玲. 中国抗生素杂志. 2019(06)
[7]棘胸蛙白内障病原鉴定及病理组织观察[J]. 刘子明,金晶,胡则辉,戴庆敏,李巧玲,施倩,吕耀平. 浙江农业学报. 2018(11)
[8]脑膜败血伊丽莎白菌致医院感染的临床特点与耐药性分析[J]. 宁兴旺,谢小兵,朱惠斌,钱纯,匡敏. 中华医院感染学杂志. 2018(13)
[9]棘胸蛙白内障病原的分离、鉴定及药物敏感性分析[J]. 吴明皇,林玲,孙承文,王英英,石存斌. 浙江农业科学. 2018(06)
[10]黑斑蛙“白内障（歪头）”病原诊断及药敏试验[J]. 夏理海,罗凯,李由申,韩盼盼,黎明,郜卫华,许巧情,胡伟. 江苏农业科学. 2018(08)
硕士论文
[1]黑斑蛙“歪头病”病原菌的分离鉴定及全基因组测序分析[D]. 秦振阳.四川农业大学 2018
[2]我国牛蛙产业现状及前景分析[D]. 高博.集美大学 2017
[3]黑斑蛙白内障病原菌的分离鉴定及体外抑菌作用研究[D]. 吴兴镇.西南大学 2016
[4]广西南宁市市售蛙、蛇体内寄生虫调查[D]. 周庆安.广西大学 2013
本文编号：3521254
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：161 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
伊丽莎白菌分类学变化
华中农业大学2020届博士研究生学位论文24从其核心基因组中注释到了67个假定毒力基因，同时他们还发现多个暴发菌株的淀粉利用酶SusD发生了改变，与荚膜多糖合成相关的多糖转运蛋白Wza或Wzc被部分或完全破坏，由此推测，暴发菌株荚膜多糖的缺失可能会促进其粘附和定植，导致其抗原性的降低，通过改变菌体表面粘附力而使其更容易在宿主体内扩散。此外，他们还对114个伊丽莎白菌基因组中的cps基因簇（荚膜多糖合成酶基因簇，capsularpolysaccharidesynthesiscluster）进行了分析，发现该属内物种的cps基因簇有17个不同的基因组合模式，而本次疾病暴发中的分离株cps基因簇却非常一致，同属于一个类型（typeI），因此推测该类型的cps基因簇在这些分离株的致病力中发挥了一定的作用。除了基于基因组的致病基因研究外，Huang等（2019）等建立了E.miricola感染黑斑蛙的模型，用来研究伊丽莎白菌对机体的损伤机制（图1.2）。研究发现，病原菌主要定植在宿主的大脑，导致神经源性器官损伤，伊丽莎白菌在感染黑斑蛙时，可导致黑斑蛙的氧化应激反应（oxidativestress），从而引起线粒体应激（mitochondrialstress）和未折叠蛋白反应（unfoldedproteinresponse），用来消除细胞内自由基，作者认为动物在感染伊丽莎白菌后，其抗氧化系统功能会逐渐减弱，从而进一步加剧了疾病的发生状态（Huangetal2019）。图1.2米尔伊丽莎白菌对黑斑蛙的系统感染模型（Huang等2019）Fig.1.2SystemicinfectionmodelofE.miricolaagainstP.nigromaculatus(Huangetal2019)
华中农业大学2020届博士研究生学位论文28表2.1不同采样地样品采集信息Table2.1Informationofsamplefromdifferentlocations采集地Location采样时间Time样品量Number益阳2016.8.942宁乡2016.8.1430长沙2016.8.1435株洲2016.10.326衡阳2016.9.522邵阳2016.7.2031武冈2016.7.2127图2.1湖南黑斑蛙采样地图Fig.2.1Themapofsampledblack-spottedfrogsfromHunanprovince2.3方法2.3.1样品的处理及病原检测将样品蛙冰园冬眠麻醉”后，用剪刀从大脑下方剪断脊柱，取蛙的皮肤、肝脏、肾脏、脑、胆囊和肌肉等组织做病原检测，样品组织DNA的提取参照康为世纪DNA
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国两栖动物寄生原虫及其对宿主的影响研究[J]. 卿芯妤,杨承忠,赵元莙. 教育教学论坛. 2020(17)
[2]蛙脑膜炎败血金黄杆菌分离株的药敏试验[J]. 曾彦钦,林秋娟,潘平,陈震,林福忠,蔡鹤鸣. 福建畜牧兽医. 2020(02)
[3]脑膜败血伊丽莎白菌耐药性及同源性分析[J]. 刘喆,王丽凤,叶丽艳,沈定霞. 解放军医学院学报. 2020(03)
[4]脑膜败血伊丽莎白菌医院感染的特点与药敏分析[J]. 李文杰,林少华,骆丰,俞洪,孙桂芹. 中华医院感染学杂志. 2020(03)
[5]黑斑蛙“白内障”病原菌分离及药敏试验[J]. 王湘,侯强红,舒鸣,白玲,张光友. 畜禽业. 2019(12)
[6]β-内酰胺酶抑制剂研究进展[J]. 韩江雪,刘忆霜,肖春玲. 中国抗生素杂志. 2019(06)
[7]棘胸蛙白内障病原鉴定及病理组织观察[J]. 刘子明,金晶,胡则辉,戴庆敏,李巧玲,施倩,吕耀平. 浙江农业学报. 2018(11)
[8]脑膜败血伊丽莎白菌致医院感染的临床特点与耐药性分析[J]. 宁兴旺,谢小兵,朱惠斌,钱纯,匡敏. 中华医院感染学杂志. 2018(13)
[9]棘胸蛙白内障病原的分离、鉴定及药物敏感性分析[J]. 吴明皇,林玲,孙承文,王英英,石存斌. 浙江农业科学. 2018(06)
[10]黑斑蛙“白内障（歪头）”病原诊断及药敏试验[J]. 夏理海,罗凯,李由申,韩盼盼,黎明,郜卫华,许巧情,胡伟. 江苏农业科学. 2018(08)
硕士论文
[1]黑斑蛙“歪头病”病原菌的分离鉴定及全基因组测序分析[D]. 秦振阳.四川农业大学 2018
[2]我国牛蛙产业现状及前景分析[D]. 高博.集美大学 2017
[3]黑斑蛙白内障病原菌的分离鉴定及体外抑菌作用研究[D]. 吴兴镇.西南大学 2016
[4]广西南宁市市售蛙、蛇体内寄生虫调查[D]. 周庆安.广西大学 2013
本文编号：3521254
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