卵形鲳鲹TLR21、TLR22及相关基因的克隆与表达分析
发布时间：2021-11-27 05:18
Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）作为一类重要的模式识别受体（pattern-recognition receptors,PRRs）,主要负责识别病原相关分子模式（pathogen associated molecular patterns,PAMPs）,启动先天免疫系统抵御病原微生物的入侵。TLRs除了启动先天免疫外,还可调节适应性免疫,是连接先天免疫和适应性免疫的桥梁。TLR21和TLR22是TLRs家族的重要成员,主要存在于鸟类、两栖类或鱼类中;TRAF3和IRAK1是TLRs信号转导通路中的重要分子,在TLRs信号转导级联反应中具有重要作用。卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）是我国南方重要的海水养殖经济鱼类,随着养殖规模的不断扩大,病害不时发生,给卵形鲳鲹养殖业带来巨大经济损失。鉴于TLR21、TLR22、TRAF3和IRAK1在免疫中具有重要功能,本研究采用RACE-PCR和RT-PCR技术克隆了卵形鲳鲹TLR21（TrTLR21）、TrTLR22、TrTRAF3和TrIRAK1基因;应用生物信息学分析上述基因的序列特征和蛋白结构...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：105 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＴＬＲｓ信号通路图［４９］??Ｆｉｇ．?１－１?ＴＬＲｓ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙｓ??３?ＴＬＲ２１／ＴＬＲ２２／ＩＲＡＫ１／ＴＲＡＦ３进
卵形鲳鰺脾脏总ＲＮＡ的ＯＤ２６０／ＯＤ２８０值１．９８，?ＯＤ２６０／ＯＤ２３０值为２．０９，浓度为??６６５．８?ｎｇ４ｉＬ，?ＲＮＡ浓度和纯度符合要求；用１％的琼脂糖凝胶电泳检测结果中，２８Ｓ、??１８Ｓ和５Ｓ核糖体ＲＮＡ的比例符合预期结果（如图２－１）。??Ｍ?Ｒ??２０００ｂｐ?■??ｌＯＯＯｂｐ?—Ｂ??图２－１卵形鲳鰺脾脏总ＲＮＡ??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｓｐｌｅｅｎ?ｏｆ?Ｔｒａｃｈｉｎｏｔｕｓ?ｏｖａｔｕｓ??４．２卵形鲳鰺ＴＬＲ２１和ＴＬＲ２２基因中间和末端片段扩增结果??将测序结果拼接后在ＮＣＢＩ的在线软件ＢｌａｓｔＸ进行同源性查找，确定所得基因全长??为ＴｒＴＬＲ２１和ＴｒＴＬＲ２２。向ＮＣＢＩ提交登录号，ＴｒＴＬＲ２１基因的登录号为ＭＫ２９９８４２；??ＴｒＴＬＲ２２基因的登录号为ＭＫ２３１１６。??２３??
图Ａ?图Ｂ??图２－４ＴｒＴＬＲ２１?３Ｄ结构模型??Ｆｉｇ．２－４?Ｔｈｅ?３Ｄ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ＴｒＴＬＲ２１??图Ａ为卵形鲳鰺ＴＬＲ２１－ＬＲＲ?３Ｄ结构图；图Ｂ为卵形鲳鰺ＴＬＲ２１－ＴＩＲ?３Ｄ结构图；??Ａ：?Ｔｈｅ?３Ｄ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ＴｒＴＬＲ２１－ＬＲＲ；?Ｂ：?Ｔｈｅ?３Ｄ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ＴｒＴＬＲ２１－ＴＩＲ；??４．３．２卵形鲳鲮ＴＬＲ２２的序列特征和蛋白结构??ＴｒＴＬＲ２２?ｃＤＮＡ全长３４５４?ｂｐ，编码了?９５９个氨基酸，该ｃＤＮＡ序列包含５＇ＵＴＲ?２０４??ｂｐ、ＯＲＦ２８８０ｂｐ和３＇ＵＴＲ３７０ｂｐ，其中在３＇翻译区还有两个个不稳定基序（ａｔｔｔａ）和一??个加尾信号（ａｔｔａａａ）（图２－５）。预测蛋白质分子质量为１１０．８０?ＫＤ，等电点为８．７１。ＳＭＡＲＴ??分析显示，ＴｒＴＬＲ２２胞外域有３个ＬＲＲ－ＴＹＰ基序，有１３个ＬＲＲ基序和１个ＬＲＲ－ＣＴ??基序，跨膜结构域和胞内ＴＩＲ结构域（图２－６）。ＴｒＴＬＲ２２－ＬＲＲ的３Ｄ结构模型和??ＴｒＴＬＲ２２－ＴＩＲ的３Ｄ结构模型如图２－７所示，ＴｒＴＬＲ２２－ＬＲＲ结构域由２３个［３－折叠和２０??个ａ－螺旋以及数个无规则卷曲形成马蹄状结构，ＴｒＴＬＲ２２－ＴＩＲ结构域由５个ａ－螺旋和４??２７??
本文编号：3521628
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：105 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＴＬＲｓ信号通路图［４９］??Ｆｉｇ．?１－１?ＴＬＲｓ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙｓ??３?ＴＬＲ２１／ＴＬＲ２２／ＩＲＡＫ１／ＴＲＡＦ３进
卵形鲳鰺脾脏总ＲＮＡ的ＯＤ２６０／ＯＤ２８０值１．９８，?ＯＤ２６０／ＯＤ２３０值为２．０９，浓度为??６６５．８?ｎｇ４ｉＬ，?ＲＮＡ浓度和纯度符合要求；用１％的琼脂糖凝胶电泳检测结果中，２８Ｓ、??１８Ｓ和５Ｓ核糖体ＲＮＡ的比例符合预期结果（如图２－１）。??Ｍ?Ｒ??２０００ｂｐ?■??ｌＯＯＯｂｐ?—Ｂ??图２－１卵形鲳鰺脾脏总ＲＮＡ??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｓｐｌｅｅｎ?ｏｆ?Ｔｒａｃｈｉｎｏｔｕｓ?ｏｖａｔｕｓ??４．２卵形鲳鰺ＴＬＲ２１和ＴＬＲ２２基因中间和末端片段扩增结果??将测序结果拼接后在ＮＣＢＩ的在线软件ＢｌａｓｔＸ进行同源性查找，确定所得基因全长??为ＴｒＴＬＲ２１和ＴｒＴＬＲ２２。向ＮＣＢＩ提交登录号，ＴｒＴＬＲ２１基因的登录号为ＭＫ２９９８４２；??ＴｒＴＬＲ２２基因的登录号为ＭＫ２３１１６。??２３??
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