日本鳗鲡GILT及COX-2基因的克隆与表达
发布时间：2021-12-17 18:21
日本鳗鲡是世界主要水产养殖种类之一,是中国重要的经济鱼类,但我们对其免疫反应机理的研究较为匮乏。γ-干扰素诱导的溶酶体巯基还原酶（gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase,GILT）可通过二硫键的还原在II型组织相容性复合物抗原呈递过程中起到对外来抗原进行去折叠及随后的蛋白酶水解的作用;环氧化酶（cyclooxygenase,COX）可通过连续的氧化和还原反应将花生四烯酸转化为前列腺素内过氧化物H2,进而在脊椎动物中参与广泛的生理过程,包括发热、炎症反应、维持妊娠和调节离子运输等。本文从日本鳗鲡（Anguilla japonica）中克隆了两种与免疫相关的基因,GILT与COX-2。本研究主要检测了GILT和COX-2在日本鳗鲡黑仔鳗多个组织及玻璃鳗中的表达情况,受外源物细菌脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）、多聚胞苷酸（polyinosinic-polycytidylic acid,Poly I:C）和鳗鲡致病菌Edwardsiella tarda的刺激下,3个基因在多个组织器官中的转录表达量的变化,...
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GILT还原机理[8]
集美大学硕士学位论文 日本鳗鲡GILT及COX-2基因的克隆与表达活性。在李斯特菌感染过程中，为避免被消灭会释放 LLO，而只有还原态的 LLO 具有活性，GILT 则充当该过程的还原剂。GILT 可维持一个正常的细胞内的氧化谷胱甘肽比的降低，防止异常的线粒体自噬；GILT 还可调节细胞内的氧化还原态，增强某些细胞超氧化物歧化酶 2(Superoxide dismutase，SOD2) 的表达以及稳定；此外，在细胞外 GILT 可由激活的巨噬细胞分泌，表明其在炎症中具有未知的作用 (见图 1.2)。还有研究证明 GILT 参与中和细胞外的病原体和清除感染的细胞碎片等过程[20]；GILT 的缺失会影响对细菌、寄生虫、病毒等的免疫应答，并且导致自身免疫性疾病[9]；成纤维细胞中表达的 GILT 可以降低活性氧的浓度，比如超氧负离子，从而减弱了细胞增殖[11]。研究还发现在 IFN-γ，PMA (phorbol-12-myristate-13-acetate) 和 LPS 的诱导作用下可使 THP-1 细胞分泌促炎细胞因子和趋化因子，包括 GILT[20]。该基因可能在免疫应答反应中有重要作用。
5图 1.3 前列腺素类生物合成途径[30]Fig.1.3 Prostanoid biosynthetic pathway[30]1.2.2 硬骨鱼类COX-2 的研究现状在硬骨鱼类中，COX同源物已从虹鳟 (Oncorhynchus mykiss)[28]、金鱼 (Carassiusauratus)[31]、斑马鱼 (Danio rerio)[21]、青鳉 (Oryzias latipes)[32]、美洲红点鲑 (Salvelinusfontinalis)[33]、塞内加尔鳎 (Solea senegalensis)[14]、波纹绒须石首鱼 (Micropogonias undulatus)[35]及狼鲈(Dicentrarchus labrax L)[36]等中得到克隆鉴定。在硬骨鱼类中，COX-2参与多种生物过程。LPS、重组IL-1β和鳗弧菌 (Vibrio anguillarum) 可诱导狼鲈的头肾白细胞中COX-2基因上调转录表达[36]；LPS、IL-1β和天蚕抗菌肽B可以诱导虹鳟COX-2a在虹鳟鱼性腺细胞RTG-2中的转录表达[28]，表明COX-2可以参与炎症反应。此外，在佛波酯PMA(phorbol-12-myristate-13-acetate)/ A23187作用下，美洲红点鲑COX-2在皮肤中转录表达量显著上调[33]。另有研究发现PMA/A23187诱导鱼类合成前列腺素PGF及PGE，后者参与排卵的生理过程[34]，因而认为
【参考文献】：
期刊论文
[1]牙鲆鳃淋巴样组织内免疫相关细胞的超微结构[J]. 刘云,姜国良,姜明,张士璀. 青岛海洋大学学报(自然科学版). 2001(06)
硕士论文
[1]虹鳟鱼γ-IFN诱导的溶酶体巯基还原酶及LIGHT（TNFSF14）的克隆、表达及生物学活性研究[D]. 刘萌.南京师范大学 2013
[2]非洲爪蟾白细胞介素8及γ-IFN诱导的溶酶体巯基还原酶的克隆、表达及生物学活性研究[D]. 崔县伟.南京师范大学 2012
本文编号：3540680
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GILT还原机理[8]
集美大学硕士学位论文 日本鳗鲡GILT及COX-2基因的克隆与表达活性。在李斯特菌感染过程中，为避免被消灭会释放 LLO，而只有还原态的 LLO 具有活性，GILT 则充当该过程的还原剂。GILT 可维持一个正常的细胞内的氧化谷胱甘肽比的降低，防止异常的线粒体自噬；GILT 还可调节细胞内的氧化还原态，增强某些细胞超氧化物歧化酶 2(Superoxide dismutase，SOD2) 的表达以及稳定；此外，在细胞外 GILT 可由激活的巨噬细胞分泌，表明其在炎症中具有未知的作用 (见图 1.2)。还有研究证明 GILT 参与中和细胞外的病原体和清除感染的细胞碎片等过程[20]；GILT 的缺失会影响对细菌、寄生虫、病毒等的免疫应答，并且导致自身免疫性疾病[9]；成纤维细胞中表达的 GILT 可以降低活性氧的浓度，比如超氧负离子，从而减弱了细胞增殖[11]。研究还发现在 IFN-γ，PMA (phorbol-12-myristate-13-acetate) 和 LPS 的诱导作用下可使 THP-1 细胞分泌促炎细胞因子和趋化因子，包括 GILT[20]。该基因可能在免疫应答反应中有重要作用。
5图 1.3 前列腺素类生物合成途径[30]Fig.1.3 Prostanoid biosynthetic pathway[30]1.2.2 硬骨鱼类COX-2 的研究现状在硬骨鱼类中，COX同源物已从虹鳟 (Oncorhynchus mykiss)[28]、金鱼 (Carassiusauratus)[31]、斑马鱼 (Danio rerio)[21]、青鳉 (Oryzias latipes)[32]、美洲红点鲑 (Salvelinusfontinalis)[33]、塞内加尔鳎 (Solea senegalensis)[14]、波纹绒须石首鱼 (Micropogonias undulatus)[35]及狼鲈(Dicentrarchus labrax L)[36]等中得到克隆鉴定。在硬骨鱼类中，COX-2参与多种生物过程。LPS、重组IL-1β和鳗弧菌 (Vibrio anguillarum) 可诱导狼鲈的头肾白细胞中COX-2基因上调转录表达[36]；LPS、IL-1β和天蚕抗菌肽B可以诱导虹鳟COX-2a在虹鳟鱼性腺细胞RTG-2中的转录表达[28]，表明COX-2可以参与炎症反应。此外，在佛波酯PMA(phorbol-12-myristate-13-acetate)/ A23187作用下，美洲红点鲑COX-2在皮肤中转录表达量显著上调[33]。另有研究发现PMA/A23187诱导鱼类合成前列腺素PGF及PGE，后者参与排卵的生理过程[34]，因而认为
【参考文献】：
期刊论文
[1]牙鲆鳃淋巴样组织内免疫相关细胞的超微结构[J]. 刘云,姜国良,姜明,张士璀. 青岛海洋大学学报(自然科学版). 2001(06)
硕士论文
[1]虹鳟鱼γ-IFN诱导的溶酶体巯基还原酶及LIGHT（TNFSF14）的克隆、表达及生物学活性研究[D]. 刘萌.南京师范大学 2013
[2]非洲爪蟾白细胞介素8及γ-IFN诱导的溶酶体巯基还原酶的克隆、表达及生物学活性研究[D]. 崔县伟.南京师范大学 2012
本文编号：3540680
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