鲤鱼PLA2g3a1催化活性区的原核表达及酶活性分析

发布时间：2021-12-24 03:32

　　[目的]本文旨在获得可溶的鲤鱼（Cyprinus carpio）groupⅢ分泌型磷脂酶A₂（PLA2g3a1）催化活性区（PLA₂ bee venom like region,PBVR）原核重组蛋白,并测定该蛋白的磷脂酶活性。[方法]分别构建标签蛋白小分子泛素样修饰蛋白（small ubiquitin-like modifier,SUMO）、硫氧还原蛋白（thioredoxin A,TrxA）、N利用物质A（N-utilization substance A,NusA）、麦芽糖结合蛋白（maltose-binding protein,MBP）与PBVR的重组表达质粒,转化入大肠杆菌感受态细胞Transetta（DE3）进行原核表达,比较不同标签蛋白的促溶作用;使用Ni-NTA柱纯化重组蛋白,与BSA蛋白标准品电泳比对确定纯化后蛋白的浓度;采用偶联氧脂合酶法测定PBVR重组蛋白的磷脂酶活性。[结果]促溶作用最高的标签蛋白是NusA,可溶性重组蛋白占总蛋白的95%,其次是MBP和TrxA,分别占87%和47%。综合考量可溶性重组蛋白的得率,选择... 

【文章来源】：南京农业大学学报. 2020,43(02)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

纯化后蛋白质量的测定

融合蛋白的磷脂酶A2(PLA2)活性

分别在22、25、28和30 ℃条件下,测定MBP-PBVR的PLA2比活力。结果表明(图5):这几个温度下酶活性无显著性差异(P>0.05),25 ℃时酶活性最高。在25 ℃时,分别测定不同pH值(6.0、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0和10.0)对PLA2酶活性的影响,发现pH 7.5时酶活性最高。2.3.2 Ca2+对MBP-PBVR的PLA2酶活性的影响

【参考文献】：
期刊论文
[1]鲤sPLA2-Ⅲ基因结构、系统发育和表达特征[J]. 许迪辉,李红霞,李建林,唐永凯,王钦,张磊,沈泽恩,俞菊华.  水生生物学报. 2019(06)
[2]不同标签辅助的IBTX原核表达纯化及活性鉴定[J]. 赵志文,张峥,刘浩文,黄智刚,吴颖.  现代生物医学进展. 2014(07)
[3]应用响应曲面法研究金华火腿生产过程中磷脂酶的变化[J]. 郇延军,周光宏,徐幸莲.  食品与发酵工业. 2005(02)



本文编号：3549741