草鱼肠道GS和ASCT2基因克隆及表达研究
发布时间：2022-01-06 11:18
谷氨酰胺是肠道黏膜上皮细胞最主要的供能物质,谷氨酰胺合成酶GS（glutamine synthetase）与谷氨酰胺合成相关,谷氨酰胺转运载体ASCT2（AlaSerCys Transporter 2）与谷氨酰胺转运相关,研究肠道GS和ASCT2基因功能可深入了解谷氨酰胺的吸收转运、合成及利用的分子生物学机理。本研究利用T-A和RACE技术从草鱼（Ctenopharyngodon idellus）肠道克隆出GS和ASCT2cDNA全序列,采用实时荧光定量PCR技术检测草鱼不同组织、不同发育时期GS和ASCT2基因的表达,分析不同蛋白及谷氨酰胺二肽日粮对草鱼GS和ASCT2基因表达的调控作用。1、草鱼GS、ASCT2 cDNA克隆及系统进化分析草鱼GScDNA全长为1457 bp,包括1116 bp的编码区、114bp的5’UTR和 227 bp的3’UTR,共编码371个氨基酸。草鱼GScDNA全长为2168bp,包括1626 bp的编码区、152bp的5’UTR和390 bp的3’UTR,共编码541个氨基酸。系统进化分析表明GS及ASCT2在进化上均比较保守,GS与鲤鱼（Cypri...
【文章来源】：湖南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．１总ＲＮＡ电泳??
?ｓｙｍｐｏｒｔｅｒ?ｆａｍｉｌｙ）结构域（在蛋白序列上的位置分别为５３－４８４），该结构域主要与??钠离子转运，相关结果见图２．３。此外，用ＴＭＨＭＭ２．０在线软件对草鱼ＡＳＣＴ２基??因所编码的氨基酸残基的跨膜结构进行分析，结果显示草鱼ＡＳＣＴ２具有跨膜结构??域，疏水性分析显示该蛋白可能存在７个跨膜区域（结果见图２．４）。??（２）?ＧＳ、ＡＳＣＴ２同源性分析??首先将ＧＳ与ＡＳＣＴ２在ＧｅｎＢａｎｋ中进行ＢＬＡＳＴ分析，分别获取了?１４个物种??的ＧＳ基因序列和２０个物种的ＡＳＣＴ２基因（在ＧｅｎＢａｎｋ的登录号详见表２．６、??２．７）。使用?Ｍｅｇａ?４．１?构建邻接（Ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ，?ＮＪ）进化树，１０００?次?Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ??重复检验进化树的置信度（图２．５、２．６）。??结果表明，草鱼ＧＳ与同属鲤科鱼类的鲤鱼同源性最高，达到９８．４％。此外，??鱼类ＧＳ具有高度的保守性，序列同源性在达到９５％－９８％之间，而且与哺乳动物??分别独立形成一枝，与传统分类学一致。草鱼ＡＳＣＴ２基因编码５４１个氨基酸的??序列
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【参考文献】：
期刊论文
[1]草鱼营养需求与配合饲料技术研究进展(下)[J]. 叶金云,邵仙萍,马恒甲,吴成龙,明建华,杨霞,张易祥. 科学养鱼. 2013(09)
[2]小肽对水生动物的营养作用探讨[J]. 马嵩,李明新. 黑龙江水产. 2013(04)
[3]叶元土:养好肠道,养好鱼（下）[J]. 吴群凤. 当代水产. 2013(04)
[4]精氨酸和谷氨酰胺对猪小肠上皮细胞增殖的影响及机理探讨[J]. 聂新志,蒋宗勇,林映才,郑春田,周桂莲,汪仕奎,王丽. 中国农学通报. 2012(02)
[5]谷氨酰胺和牛磺酸对仔猪肠黏膜形态的影响[J]. 张建斌,车向荣,陈娟娟. 饲料研究. 2011(08)
[6]谷氨酰胺对肉仔鸡肠道黏膜淋巴细胞增殖活性、氧化应激和免疫应激的调控作用[J]. 杨小军,高泽,刘凯,王益兵,覃定奎,姚军虎. 动物营养学报. 2011(02)
[7]不同温度下不同蛋白水平对镜鲤（Cyprinus carpio L.）非特异性免疫的影响[J]. 张桐,徐奇友,许红,王常安,尹家胜. 东北农业大学学报. 2010(12)
[8]中国水产养殖与水产饲料工业的成就与展望[J]. 麦康森. 科学养鱼. 2010(11)
[9]谷氨酰胺对肠道免疫调节作用的研究进展[J]. 郭焱芳,张彬. 中国兽医杂志. 2010(08)
[10]丙氨酰-谷氨酰胺对哲罗鱼仔鱼生长和抗氧化能力的影响[J]. 徐奇友,王常安,许红,尹家胜,马建章. 动物营养学报. 2009(06)
博士论文
[1]L-亮氨酸对新生哺乳仔猪肠道发育及氨基酸转运影响的研究[D]. 孙玉丽.中国农业大学 2015
[2]肠上皮细胞谷氨酰胺载体B～0AT1/ASCT2的克隆表达及严重创伤后的功能调控研究[D]. 黄骞.第二军医大学 2007
硕士论文
[1]谷氨酰胺二肽对建鲤生长、免疫和抗应激的影响[D]. 芦红梅.吉林农业大学 2011
[2]谷氨酰胺二肽对镜鲤生长、肠道发育及非特异性免疫的影响[D]. 朱青.东北农业大学 2010
[3]谷氨酰胺对梗阻性黄疸大鼠门静脉阻断后肠黏膜屏障的影响[D]. 吴鹏.滨州医学院 2010
[4]谷氨酰胺在冷应激雏鸡肺损伤中保护作用的研究[D]. 贾海燕.东北农业大学 2009
[5]谷氨酰胺对幼建鲤肠道功能和免疫力的影响[D]. 林燕.四川农业大学 2005
本文编号：3572354
【文章来源】：湖南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．１总ＲＮＡ电泳??
?ｓｙｍｐｏｒｔｅｒ?ｆａｍｉｌｙ）结构域（在蛋白序列上的位置分别为５３－４８４），该结构域主要与??钠离子转运，相关结果见图２．３。此外，用ＴＭＨＭＭ２．０在线软件对草鱼ＡＳＣＴ２基??因所编码的氨基酸残基的跨膜结构进行分析，结果显示草鱼ＡＳＣＴ２具有跨膜结构??域，疏水性分析显示该蛋白可能存在７个跨膜区域（结果见图２．４）。??（２）?ＧＳ、ＡＳＣＴ２同源性分析??首先将ＧＳ与ＡＳＣＴ２在ＧｅｎＢａｎｋ中进行ＢＬＡＳＴ分析，分别获取了?１４个物种??的ＧＳ基因序列和２０个物种的ＡＳＣＴ２基因（在ＧｅｎＢａｎｋ的登录号详见表２．６、??２．７）。使用?Ｍｅｇａ?４．１?构建邻接（Ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ，?ＮＪ）进化树，１０００?次?Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ??重复检验进化树的置信度（图２．５、２．６）。??结果表明，草鱼ＧＳ与同属鲤科鱼类的鲤鱼同源性最高，达到９８．４％。此外，??鱼类ＧＳ具有高度的保守性，序列同源性在达到９５％－９８％之间，而且与哺乳动物??分别独立形成一枝，与传统分类学一致。草鱼ＡＳＣＴ２基因编码５４１个氨基酸的??序列
?ｓｙｍｐｏｒｔｅｒ?ｆａｍｉｌｙ）结构域（在蛋白序列上的位置分别为５３－４８４），该结构域主要与??钠离子转运，相关结果见图２．３。此外，用ＴＭＨＭＭ２．０在线软件对草鱼ＡＳＣＴ２基??因所编码的氨基酸残基的跨膜结构进行分析，结果显示草鱼ＡＳＣＴ２具有跨膜结构??域，疏水性分析显示该蛋白可能存在７个跨膜区域（结果见图２．４）。??（２）?ＧＳ、ＡＳＣＴ２同源性分析??首先将ＧＳ与ＡＳＣＴ２在ＧｅｎＢａｎｋ中进行ＢＬＡＳＴ分析，分别获取了?１４个物种??的ＧＳ基因序列和２０个物种的ＡＳＣＴ２基因（在ＧｅｎＢａｎｋ的登录号详见表２．６、??２．７）。使用?Ｍｅｇａ?４．１?构建邻接（Ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ，?ＮＪ）进化树，１０００?次?Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ??重复检验进化树的置信度（图２．５、２．６）。??结果表明，草鱼ＧＳ与同属鲤科鱼类的鲤鱼同源性最高，达到９８．４％。此外，??鱼类ＧＳ具有高度的保守性，序列同源性在达到９５％－９８％之间，而且与哺乳动物??分别独立形成一枝，与传统分类学一致。草鱼ＡＳＣＴ２基因编码５４１个氨基酸的??序列
【参考文献】：
期刊论文
[1]草鱼营养需求与配合饲料技术研究进展(下)[J]. 叶金云,邵仙萍,马恒甲,吴成龙,明建华,杨霞,张易祥. 科学养鱼. 2013(09)
[2]小肽对水生动物的营养作用探讨[J]. 马嵩,李明新. 黑龙江水产. 2013(04)
[3]叶元土:养好肠道,养好鱼（下）[J]. 吴群凤. 当代水产. 2013(04)
[4]精氨酸和谷氨酰胺对猪小肠上皮细胞增殖的影响及机理探讨[J]. 聂新志,蒋宗勇,林映才,郑春田,周桂莲,汪仕奎,王丽. 中国农学通报. 2012(02)
[5]谷氨酰胺和牛磺酸对仔猪肠黏膜形态的影响[J]. 张建斌,车向荣,陈娟娟. 饲料研究. 2011(08)
[6]谷氨酰胺对肉仔鸡肠道黏膜淋巴细胞增殖活性、氧化应激和免疫应激的调控作用[J]. 杨小军,高泽,刘凯,王益兵,覃定奎,姚军虎. 动物营养学报. 2011(02)
[7]不同温度下不同蛋白水平对镜鲤（Cyprinus carpio L.）非特异性免疫的影响[J]. 张桐,徐奇友,许红,王常安,尹家胜. 东北农业大学学报. 2010(12)
[8]中国水产养殖与水产饲料工业的成就与展望[J]. 麦康森. 科学养鱼. 2010(11)
[9]谷氨酰胺对肠道免疫调节作用的研究进展[J]. 郭焱芳,张彬. 中国兽医杂志. 2010(08)
[10]丙氨酰-谷氨酰胺对哲罗鱼仔鱼生长和抗氧化能力的影响[J]. 徐奇友,王常安,许红,尹家胜,马建章. 动物营养学报. 2009(06)
博士论文
[1]L-亮氨酸对新生哺乳仔猪肠道发育及氨基酸转运影响的研究[D]. 孙玉丽.中国农业大学 2015
[2]肠上皮细胞谷氨酰胺载体B～0AT1/ASCT2的克隆表达及严重创伤后的功能调控研究[D]. 黄骞.第二军医大学 2007
硕士论文
[1]谷氨酰胺二肽对建鲤生长、免疫和抗应激的影响[D]. 芦红梅.吉林农业大学 2011
[2]谷氨酰胺二肽对镜鲤生长、肠道发育及非特异性免疫的影响[D]. 朱青.东北农业大学 2010
[3]谷氨酰胺对梗阻性黄疸大鼠门静脉阻断后肠黏膜屏障的影响[D]. 吴鹏.滨州医学院 2010
[4]谷氨酰胺在冷应激雏鸡肺损伤中保护作用的研究[D]. 贾海燕.东北农业大学 2009
[5]谷氨酰胺对幼建鲤肠道功能和免疫力的影响[D]. 林燕.四川农业大学 2005
本文编号：3572354
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