青鱂在半滑舌鳎性别相关基因dmrt1和csw1研究中的应用

发布时间：2022-01-08 23:31

　　本研究以青鱂为模式生物研究半滑舌鳎性别分化相关基因的表达情况，为海水鱼基因功能研究提供了新的思路。本研究从三个方面进行阐述：一是异源和同源dmrt1基因过表达载体构建；二是异源和同源dmrt1基因过表达载体在青鳉体内的整合和表达分析；三是olcsw1Talen载体在青鱂体内基因敲除分析。主要实验结果如下：1.异源和同源dmrt1基因过表达载体构建。提取半滑舌鳎和青鱂精巢组织RNA，并进行RT-PCR反转录获得大量cDNA，通过BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切，与同样经过这两种酶双酶切的pIRES-hrGFP-1a载体进行连接，启动子为巨噬细胞病毒（CMV）启动子，分别构建含有半滑舌鳎和青鱂dmrt1基因的过表达载体。分别命名为：pIRES-Csdmrt1-hrGFP-1a和pIRES-Oldmrt1-hrGFP-1a。通过质粒提取获得大量过表达载体质粒溶液。2.异源和同源dmrt1基因过表达载体在青鳉体内的整合和表达分析。采用显微注射的方式将两种过表达载体稀释至30ng/μl,分别导入到青鱂1细胞受精卵中，比较异源和同源dmrt1基因对青鳉胚胎孵化率的影响以及两种dmrt1基因在青鳉体内... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

显微注射操作过程

2.2.2.3 Talen 载体构建通过克隆得到的青鱂 olcsw1，我们进一步分析该基因结构，并在处设计 Talen 基因靶向敲除位点(图 2-3)，载体由香港中文大学构建。

上海海洋大学硕士学位论文小 量 制 备 ， 将 制 备 好 的 半 滑 舌 鳎 和 青 鱂 质 粒 载 体 分 别 命 名 为pIRES-Csdmrt1-hrGFP-1a 和 pIRES-Oldmrt1-hrGFP-1a（图 2-4）。

【参考文献】：
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本文编号：3577486