IGFBP4、5、7和胰岛素样蛋白在杂色鲍幼虫附着变态过程中的作用研究

发布时间：2022-01-11 20:41

　　杂色鲍幼虫的附着变态过程,是其生活史中至关重要的时期。该时期的幼虫敏感而脆弱,死亡率高,直接关系到其种群分布、数量变动。本研究在实验室构建的杂色鲍EST数据库的基础上,采用SMART-RACE技术共成功克隆得到3条胰岛素超家族基因:胰岛素样生长因子结合蛋白4（insulin-like growth binding protein 4,IGFBP4）、胰岛素样生长因子结合蛋白5（insulin-like growth binding protein 5,IGFBP5）和胰岛素样蛋白（molluscan insulin-like peptide,MIRP）基因的cDNA,分别命名为hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdMIRP。连同实验室已克隆到的杂色鲍胰岛素样生长因子结合蛋白7（insulin-like growth binding protein 7,IGFBP7）（hdIGFBP7）,采用实时定量PCR（qPCR）和基因沉默等技术分析上述基因在杂色鲍幼虫附着变态过程中的作用。主要的研究结果如下:1)hdIGFBP4 cDNA全长为584 bp,为无脊椎动物中首次克隆到IGFBP4基... 

【文章来源】：集美大学福建省

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 杂色鲍的养殖现状及幼虫研究
    1.2 无脊椎动物幼虫附着变态的研究进展
        1.2.1 鲍幼虫发育研究
        1.2.2 海洋无脊椎动物幼虫附着变态的研究进展
    1.3 IGFs系统及胰岛素样蛋白概述
        1.3.1 IGF信号通路研究进展
        1.3.2 IGFBP4的研究进展
        1.3.3 IGFBP5的研究进展
        1.3.4 IGFBP7的研究进展
        1.3.5 无脊椎动物胰岛素样生长因子研究进展
    1.4 本研究的目的与意义
    1.5 主要研究内容和技术路线
        1.5.1 主要研究内容
        1.5.2 主要技术路线
第2章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要仪器和试剂
        2.1.3 引物
    2.2 实验方法
        2.2.1 总RNA的提取 (TRIzol法) 和去除DNA的污染
        2.2.2 合成RT-PCR cDNA第一链和PCR扩增获取基因cDNA片段
        2.2.3 SMART-RACE技术获取基因全长
        2.2.4 割胶纯化基因片段
        2.2.5 与质粒载体连接
        2.2.6 感受态细胞的转化及筛选
        2.2.7 质粒插入片段的检测
        2.2.8 质粒测序
        2.2.9 目的基因的生物信息学分析
        2.2.10 实时荧光定量PCR (Real-time PCR) 反应体系及条件
        2.2.11 RNAi实验
        2.2.12 原核表达
第3章 结果
    3.1 杂色鲍各组织总RNA的抽提结果
    3.2 RACE-PCR扩增结果
    3.3 hdIGFBP4、5、7、hdMIRP生物信息学分析
        3.3.1 hdIGFBP4 生物信息学分析
        3.3.2 hdIGFBP5 生物信息学分析
        3.3.3 hdIGFBP7 生物信息学分析
        3.3.4 hdMIRP 生物信息学分析
    3.4 杂色鲍 hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdIGFBP7、hdMIRP 基因的表达特征
        3.4.1 RNAi技术干扰hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdIGFBP7、hdMIRP基因幼虫的附着率与死亡率
        3.4.2 RNAi后hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdIGFBP7、hdMIRP基因的表达情况
        3.4.3 干扰后，胰岛素/胰岛素样蛋白/胰岛素样生长因子结合蛋白相关通路的表达情况
    3.5 原核表达
        3.5.1 重组表达载体pET-22b-IGFBP4/IGFBP5/IGFBP7/MIRP的构建及表达
        3.5.2 重组表达载体pET-32a-IGFBP4/IGFBP5/IGFBP7/MIRP的构建及表达
        3.5.3 密码子预测分析
第4章 讨论
    4.1 胰岛素样生长因子结合蛋白 4
    4.2 胰岛素样生长因子结合蛋白 5
    4.3 胰岛素样生长因子结合蛋白 7
    4.4 胰岛素样蛋白
第5章 结论与展望
致谢
参考文献
在校期间发表的文章


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3583429