基于cytb引物的鱼粉原料鱼组成分子鉴定方法

发布时间：2022-01-17 16:59

　　本研究旨在开发一种灵敏、准确、简便的分子鉴定方法,实现对鱼粉中原料鱼组成的鉴定。采用cytb和16S rDNA 2对引物,分别对9种海、淡水鱼和7种商品鱼粉的基因组DNA进行扩增后发现,cytb较16S rDNA引物可获得良好的扩增效果,各样品中均出现较清晰明亮的目的条带。将cytb引物扩增鱼粉基因组DNA得到的目的片段分别连接到克隆载体pMD19-T,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞后,挑取阳性克隆进行测序,将测序结果进行BlastN比对分析。结果显示:在7种商品鱼粉中共鉴定到33个鱼类物种,主要包括鳀属（Engraulis）、圆鲹属（Decapterus）、沙丁鱼属（Sardina）、竹荚鱼属（Trachurus）、油鲱属（Brevoortia）及罗非鱼属（Tilapia）的各种鱼类,种类数量远超产品标签所示鱼种范围。为验证该方法的可靠性,重复以上步骤,对2种添加已知鱼种的自配鱼粉进行了验证性鉴定,鉴定结果与试验设计吻合。综上可知,基于cytb引物的分子鉴定技术可实现鱼粉中原料鱼组成的鉴定,鉴定结果将为鱼粉质量的准确判断提供丰富信息。 

【文章来源】：动物营养学报. 2020,32(12)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

cytb和16S rDNA引物扩增鱼类样品的结果

cytb引物第1、2次扩增7种商业鱼粉样品的结果

将所有鱼粉cytb引物的二次扩增产物纯化回收、连接、转化、培养后，每个样品从LB平板中随机选择30个单克隆，PCR鉴定后，分别获得阳性克隆13～21个，阳性克隆率为43.3%～70.0%。将得到的阳性克隆进行测序和BlastN比对分析，确定样品中原料鱼的种类。图4 cytb引物第1、2次扩增2种自配鱼粉样品的结果

【参考文献】：
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博士论文
[1]基于二维相关NIRS/NIRM的蛋白饲料原料判别方法研究[D]. 吕程序.中国农业大学 2014

硕士论文
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本文编号：3595099