饲料精氨酸对珍珠龙胆石斑鱼肠道物理和免疫屏障的影响机制
发布时间：2022-01-21 14:46
精氨酸作为一种功能性氨基酸,需要通过相应的转运载体进入细胞内,发挥其在鱼类的生长、免疫及肠道黏膜等方面的重要作用。鱼类肠道作为维持机体内环境稳定的一道重要屏障,对机体的防御系统意义重大。因此,精氨酸的吸收转运及对鱼类肠道物理和免疫屏障的系统研究具有重要意义。本文从珍珠龙胆石斑鱼肠道精氨酸的吸收转运机制入手,探讨其对肠道物理屏障和免疫屏障的影响。主要的研究结果如下:1.为了探究精氨酸在肠道的吸收转运机制,运用c DNA末端快速扩增（RACE）技术克隆得到珍珠龙胆石斑鱼碱性氨基酸转运载体CAT1基因（SLC7A1）c DNA的全长序列,并且应用实时荧光定量PCR技术对CAT1基因在珍珠龙胆石斑鱼不同组织中的表达进行检测。结果显示,CAT1基因序列全长2319bp,其中开放阅读框（ORF）为1938bp,编码645个氨基酸,5’-UTR为208bp,3’-UTR为173bp,预测其相对分子量为69.7KDa,理论等电点5.31。多序列比对结果显示珍珠龙胆石斑鱼CAT1基因与其他物种的CAT1具有较高的保守性。SMART软件对CAT1 c DNA进行蛋白质序列分析,发现它包含14个跨膜区。实时...
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
紧密连接蛋白结构图[6]
饲料精氨酸对珍珠龙胆石斑鱼肠道物理和免疫屏障的影响机制10图2-1珍珠龙胆石斑鱼CAT1基因和蛋白序列图CAT1cDNA的核苷酸和推导的氨基酸序列。起始密码子ATG和终止密码子TAA用粗体字母表示。推导的氨基酸序列显示在核苷酸序列下方。黑框显示了潜在的跨膜区域（TM），圆圈显示了磷酸化位点（Ser：3;Thr：3;Tyr：1）。Fig.2-1NucleotideanddeducedaminoacidsequenceofCAT1cDNA.ThestartcodonATGandthestopcodonTAAareindicatedinboldletters.Thededucedaminoacidsequenceisshownbelowthenucleotidesequence.Thepotentialtransmembranemotif(TM)isshowninblackboxesandthephosphorylationsite(Ser:3;Thr:3;Tyr:1)isshownincircles.2.2.2CAT1氨基酸序列蛋白跨膜结构域和三级结构的预测通过TMHMM2.0和KinasePhosServer软件对CAT1蛋白进行跨膜结构域和磷酸化位点的预测，推测出CAT1蛋白具有14个跨膜结构域（见图2-2），22个磷酸化位点（丝氨酸，16个；苏氨酸，6个）（见图2-1）。Swiss-Model软件预测珍珠龙胆石斑鱼CAT1蛋白三级结构结果显示，CAT1蛋白三维结构主要由α螺旋、β折叠和无规则卷曲构成（见图2-3）。图2-2珍珠龙胆石斑鱼CAT1蛋白结构域预测Fig.2-2ThepredictionoftransmembranestructureofHybridGrouperCAT1aminoacidsequence
广东海洋大学硕士学位论文11图2-3珍珠龙胆石斑鱼CAT1蛋白三级结构预测Fig.2-3PredictionoftertiarystructureofCAT1proteininHybridGrouper2.2.3CAT1氨基酸序列同源性分析氨基酸多序列比对结果显示，珍珠龙胆石斑鱼CAT1氨基酸序列与硬骨鱼鞍斑杜父鲈鰧（Cottopercagobio）（XP_029302534.1）（87%）、斑马鱼（Daniorerio）（NP_001315138.1）（76%）及虹鳟（Oncorhynchusmykiss）（XP_021472982.1）（74.96%）的具有较高同源性，与牛（BosTaurus）（NP_001129264.1）、山羊（Caprahircus）（XP_017912100.1）、人（Homosapiens）（NP_003036.1）、猕猴（Macacamulatta）（AFI33244.1）、犬（Canislupusfamiliaris）（NP_001274482.1）、非洲爪蟾（Xenopus(Silurana)tropicalis）（XP_002934074.1）、兔（Oryctolaguscuniculus）（XP_017206429.1）及小鼠（Musmusculus）（NP_001288353.1）的同源性较低，分别为69%、69%、69%、69%、68%、68%、67%与66%（见图2-4）。使用CLUSTALX1.83和MEGA4.0程序构建了系统发育树，揭示了CAT1的分子系统发育位置。结果显示，珍珠龙胆石斑鱼首先与鲈形目的鞍斑杜父鲈鰧聚为一支，再与其他硬骨鱼及脊椎动物聚为一支，两栖动物非洲爪蟾单独聚为一支（见图2-5、表2-2）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鲤鱼IgM的分离纯化及其抗血清的制备[J]. 姜娜,邢薇,罗琳,李铁梁,李文通,刘彩霞,袁丁,徐冠玲,马志宏. 黑龙江畜牧兽医. 2018(03)
[2]Leucine increases mucin 2 and occludin production in LS174T cells partially via PI3K-Akt-mTOR pathway[J]. Xiangbing Mao,Haiyan Hu,Jun Tang,Daiwen Chen,Bing Yu. Animal Nutrition. 2016(03)
[3]饲料精氨酸水平对斜带石斑鱼幼鱼生长和肠道形态的影响[J]. 迟淑艳,韩凤禄,谭北平,董晓慧,杨奇慧,刘泓宇,章双. 水生生物学报. 2016(02)
[4]The immune modifying effects of amino acids on gut-associated lymphoid tissue[J]. Megan R Ruth,Catherine J Field. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2013(03)
[5]叶元土:养好肠道,养好鱼（下）[J]. 吴群凤. 当代水产. 2013(04)
[6]多糖免疫增强剂对水产动物免疫的影响及机理研究[J]. 孙爱杰,任同军,孙永欣. 饲料与畜牧. 2011(12)
[7]精氨酸和赖氨酸对瓦氏黄颡鱼幼鱼生长和非特异性免疫力的影响[J]. 封福鲜,艾庆辉,徐玮,麦康森,张文兵. 水产学报. 2011(07)
[8]IL-2-PE40抑制大鼠角膜上皮细胞MHC抗原表达的研究[J]. 吴京,黄发明,王小宁. 眼科新进展. 2002(01)
硕士论文
[1]膨化和普通豆粕替代鱼粉对斜带石斑鱼生长性能和肠道屏障的影响[D]. 王彦飞.集美大学 2019
[2]谷胱甘肽对金鳟生长性能和肠道健康的影响[D]. 苏宝辉.东北农业大学 2018
[3]精氨酸对草鱼幼鱼生长、肠道结构调控及机制研究[D]. 陈娇娇.华中农业大学 2017
[4]草鱼（Ctenopharyngodon idellus）肠道紧密连接蛋白基因克隆与表达活性分析[D]. 许凡.苏州大学 2013
[5]生长中期草鱼的苏氨酸需要量研究[D]. 胡晓霞.四川农业大学 2012
[6]精氨酸对细毛羊肠道蛋白质合成、氨基酸转运蛋白mRNA表达及肠道健康的影响[D]. 赵宏丽.内蒙古农业大学 2012
[7]鲫鱼IgM单克隆抗体的制备及嗜水气单胞菌抗体ELISA检测方法的建立[D]. 臧明发.南京农业大学 2011
[8]斑马鱼肠道微细结构及肠粘膜屏障的研究[D]. 姚一琳.南京农业大学 2010
[9]谷氨酰胺二肽对镜鲤生长、肠道发育及非特异性免疫的影响[D]. 朱青.东北农业大学 2010
本文编号：3600462
【文章来源】：广东海洋大学广东省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
紧密连接蛋白结构图[6]
饲料精氨酸对珍珠龙胆石斑鱼肠道物理和免疫屏障的影响机制10图2-1珍珠龙胆石斑鱼CAT1基因和蛋白序列图CAT1cDNA的核苷酸和推导的氨基酸序列。起始密码子ATG和终止密码子TAA用粗体字母表示。推导的氨基酸序列显示在核苷酸序列下方。黑框显示了潜在的跨膜区域（TM），圆圈显示了磷酸化位点（Ser：3;Thr：3;Tyr：1）。Fig.2-1NucleotideanddeducedaminoacidsequenceofCAT1cDNA.ThestartcodonATGandthestopcodonTAAareindicatedinboldletters.Thededucedaminoacidsequenceisshownbelowthenucleotidesequence.Thepotentialtransmembranemotif(TM)isshowninblackboxesandthephosphorylationsite(Ser:3;Thr:3;Tyr:1)isshownincircles.2.2.2CAT1氨基酸序列蛋白跨膜结构域和三级结构的预测通过TMHMM2.0和KinasePhosServer软件对CAT1蛋白进行跨膜结构域和磷酸化位点的预测，推测出CAT1蛋白具有14个跨膜结构域（见图2-2），22个磷酸化位点（丝氨酸，16个；苏氨酸，6个）（见图2-1）。Swiss-Model软件预测珍珠龙胆石斑鱼CAT1蛋白三级结构结果显示，CAT1蛋白三维结构主要由α螺旋、β折叠和无规则卷曲构成（见图2-3）。图2-2珍珠龙胆石斑鱼CAT1蛋白结构域预测Fig.2-2ThepredictionoftransmembranestructureofHybridGrouperCAT1aminoacidsequence
广东海洋大学硕士学位论文11图2-3珍珠龙胆石斑鱼CAT1蛋白三级结构预测Fig.2-3PredictionoftertiarystructureofCAT1proteininHybridGrouper2.2.3CAT1氨基酸序列同源性分析氨基酸多序列比对结果显示，珍珠龙胆石斑鱼CAT1氨基酸序列与硬骨鱼鞍斑杜父鲈鰧（Cottopercagobio）（XP_029302534.1）（87%）、斑马鱼（Daniorerio）（NP_001315138.1）（76%）及虹鳟（Oncorhynchusmykiss）（XP_021472982.1）（74.96%）的具有较高同源性，与牛（BosTaurus）（NP_001129264.1）、山羊（Caprahircus）（XP_017912100.1）、人（Homosapiens）（NP_003036.1）、猕猴（Macacamulatta）（AFI33244.1）、犬（Canislupusfamiliaris）（NP_001274482.1）、非洲爪蟾（Xenopus(Silurana)tropicalis）（XP_002934074.1）、兔（Oryctolaguscuniculus）（XP_017206429.1）及小鼠（Musmusculus）（NP_001288353.1）的同源性较低，分别为69%、69%、69%、69%、68%、68%、67%与66%（见图2-4）。使用CLUSTALX1.83和MEGA4.0程序构建了系统发育树，揭示了CAT1的分子系统发育位置。结果显示，珍珠龙胆石斑鱼首先与鲈形目的鞍斑杜父鲈鰧聚为一支，再与其他硬骨鱼及脊椎动物聚为一支，两栖动物非洲爪蟾单独聚为一支（见图2-5、表2-2）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鲤鱼IgM的分离纯化及其抗血清的制备[J]. 姜娜,邢薇,罗琳,李铁梁,李文通,刘彩霞,袁丁,徐冠玲,马志宏. 黑龙江畜牧兽医. 2018(03)
[2]Leucine increases mucin 2 and occludin production in LS174T cells partially via PI3K-Akt-mTOR pathway[J]. Xiangbing Mao,Haiyan Hu,Jun Tang,Daiwen Chen,Bing Yu. Animal Nutrition. 2016(03)
[3]饲料精氨酸水平对斜带石斑鱼幼鱼生长和肠道形态的影响[J]. 迟淑艳,韩凤禄,谭北平,董晓慧,杨奇慧,刘泓宇,章双. 水生生物学报. 2016(02)
[4]The immune modifying effects of amino acids on gut-associated lymphoid tissue[J]. Megan R Ruth,Catherine J Field. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2013(03)
[5]叶元土:养好肠道,养好鱼（下）[J]. 吴群凤. 当代水产. 2013(04)
[6]多糖免疫增强剂对水产动物免疫的影响及机理研究[J]. 孙爱杰,任同军,孙永欣. 饲料与畜牧. 2011(12)
[7]精氨酸和赖氨酸对瓦氏黄颡鱼幼鱼生长和非特异性免疫力的影响[J]. 封福鲜,艾庆辉,徐玮,麦康森,张文兵. 水产学报. 2011(07)
[8]IL-2-PE40抑制大鼠角膜上皮细胞MHC抗原表达的研究[J]. 吴京,黄发明,王小宁. 眼科新进展. 2002(01)
硕士论文
[1]膨化和普通豆粕替代鱼粉对斜带石斑鱼生长性能和肠道屏障的影响[D]. 王彦飞.集美大学 2019
[2]谷胱甘肽对金鳟生长性能和肠道健康的影响[D]. 苏宝辉.东北农业大学 2018
[3]精氨酸对草鱼幼鱼生长、肠道结构调控及机制研究[D]. 陈娇娇.华中农业大学 2017
[4]草鱼（Ctenopharyngodon idellus）肠道紧密连接蛋白基因克隆与表达活性分析[D]. 许凡.苏州大学 2013
[5]生长中期草鱼的苏氨酸需要量研究[D]. 胡晓霞.四川农业大学 2012
[6]精氨酸对细毛羊肠道蛋白质合成、氨基酸转运蛋白mRNA表达及肠道健康的影响[D]. 赵宏丽.内蒙古农业大学 2012
[7]鲫鱼IgM单克隆抗体的制备及嗜水气单胞菌抗体ELISA检测方法的建立[D]. 臧明发.南京农业大学 2011
[8]斑马鱼肠道微细结构及肠粘膜屏障的研究[D]. 姚一琳.南京农业大学 2010
[9]谷氨酰胺二肽对镜鲤生长、肠道发育及非特异性免疫的影响[D]. 朱青.东北农业大学 2010
本文编号：3600462
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